产朊假丝酵母细胞壁33kD蛋白的酶学特性研究

培养产朊假丝酵母菌收获菌体,经裂解酶处理细胞壁,离心后得到上清粒酶液,粗酶波经DEAE-纤维素层析、Sepharose4B凝胶过滤纯化。对33kD蛋白的酶学性质研究表明,反应最适pH为5．5,反应的最适温度为45℃。热稳定性较差,50℃温度下放置1h活力下降50％。主要水解β-1,3-倍苦键,具有较强的专一性,是一种典型的葡聚糖内切酶（对pNPG无作用）。     

产肟假丝酵母细胞壁自水解的动态研究

通过检测细胞壁随自水解进行而产生的动态变化,确定了自水解的最适温度为３７℃,最适ｐＨ为５．５。探讨了产肟假丝酵母细胞壁在自水解过程中发生的变化以及温度,ｐＨ值对细胞壁自水解程度的影响。细胞壁自水解２２小时后细胞壁释放的葡聚糖酶趋于饱和。     

产朊假丝酵母细胞和细胞壁对铜离子吸附能力观察

通过比较产朊假丝酵母细胞与分离纯化的细胞壁对铜离子吸附能力差异,探讨了细胞壁在酵母吸附重金属离子过程中的作用。结果表明,细胞壁吸附的铜离子量通常是细胞吸附量的50% 以上。说明细胞壁是酵母吸附重金属离子的主要部位。     

产朊假丝酵母细胞和细胞壁对铜离子吸附能力观察

通过比较产朊假丝酵母细胞与分离纯化的细胞壁对铜离子吸附能力差异，探讨了细胞壁在酵母吸 重金属离子过程中的作用。结果表明，细胞壁吸附的铜郭量通常是细胞吸附量的５０％以上。     

产朊假丝酵母种子液培养基的优化

采用单因素及正交实验,对产朊假丝酵母的培养基组成(麦汁、酵母浸出粉、尿素、无机盐)进行优化,结果表明:以麦汁浓度6.5°Bé,酵母浸出粉0.08%,尿素0.12%,K2HPO40.06%,CaCl20.025%为最佳培养基组成,在此条件下,酵母细胞数可达3.2×108.mL-1.     

产朊假丝酵母细胞壁自水解的动态研究

通过检测细胞壁随自水解进行而发生的动态变化,确定了自水解的最适温度为37℃,最适pH为5.5。探讨了产朊假丝酵母Candida utilis细胞壁在自水解过程中发生的变化以及温度,pH值对细胞壁自水解程度的影响。细胞壁自水解22小时后细胞壁释放的葡聚糖酶趋于饱和。     

产朊假丝酵母对铜离子的抗性与吸附能力

一定条件下，用含不同浓度ＣｕＳＯ４培养基培养产朊假丝酵母。实验结果，当ＣｕＳＯ４浓度高达１０ｍｍｏｌ／Ｌ时，菌体生长被完全抑制，产朊假丝酵母对铜离子有很强耐受力。     

产朊假丝酵母对铜离子的抗性与吸附能力

一定条件下,用含不同浓度CuSO4培养基培养产朊假丝酵母。实验结果,当CuSO4浓度高达10mnol／L时,菌体生长被完全抑制,产朊假丝酵母对铜离子有很强耐受力。菌体对铜离子吸附实验表明,随铜离子浓度增大,菌体对银离子吸附增强,说明菌体对铜离子的抗性与其吸附能力有关。     

响应面法优化产朊假丝酵母的枇杷酒降酸工艺

采用响应面法优化产朊假丝酵母CU-6的枇杷酒降酸工艺,应用中心组合Box-Benhnken实验设计进行响应面分析,建立数学模型.结果表明:经优化后的产朊假丝酵母CU-6降酸最佳工艺参数SO2质量浓度为50mg·L-1,酒精度为7.8%,残糖质量浓度为4.3g·L-1,在苹果酸质量浓度为4.5g·L-1,接种量为1.5%,发酵温度为24℃,发酵周期为5d的条件下,枇杷酒的理论降酸量可达到1.82g·L-1.采用优化后的工艺枇杷酒的降酸量达到(1.80±0.02)g·L-1.     

产脂肪酶假丝酵母的筛选及其研究

从武汉油污样中分离获得一株高产脂肪酶酶的假丝酵母R－2．发酵研究表明,最适培养基为蛋白胨20g/L,蔗糖10g/L,橄榄油5g/L,(NH4)2SO41g/L,MgSO4.7H2O1g/L,K2HPOR1g/L和吐温－801g/L,最适产酶条件为30℃,初始pH7．0,转速200r/min,培养32h ,最高产酶活力达到1437u/mL,酶作用最适温度40℃,最适pH7.5。     

南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究

为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarcticalipase B,CALB)的表达量,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/mg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0~8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子(10 mmol/L)Ca2+,Zn2+,Mn2+有助于CALB酶活力的提高,而Cu2+,Ag+,Fe3+强烈抑制酶催化反应.     

南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母中的分泌型表达及酶学性质初探

将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA(含pAOX1启动子)和pGAPZαA(含pGAP启动子)中,转入毕赤酵母表达宿主KM71H,经三丁酸甘油酯平板活性筛选获得高效表达的酵母工程菌株.分泌型表达CLAB酵母工程菌的酶活较高,经摇瓶发酵96h后,CLAB活力达到11.1U/mL.经发酵罐高密度发酵84h后,CLAB活力达到179.2U/mL,蛋白质量浓度为1.36mg/mL.体积分数12%SDS-PAGE凝胶电泳显示重组CALB相对分子量为36kDa.该酶最适温度为40℃,最适pH值为8.0.在pH7.5~9.5较稳定,经55℃保温1h,残余酶活还有48.5%.5mmol/LMg2+、Ni+、Co2+和体积分数0.10%SDS对CALB酶活影响很小,而Zn2+强烈抑制酶催化反应,体积分数0.05%TritonX-100对CALB稍有激活作用.     

朊圆酵母尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

内孢霉酵母糖化酶产酶条件及酶学特性的研究

本研究对Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ（内孢霉酵母）糖化酶发酵进行培养基的选择，并对产酶时间、接种量、装量和初始ｐＨ值诸因素进行探讨，获得最佳产酶条件．该糖化酶以可溶性淀粉为底物，最适ｐＨ为５．２，最适温度４０℃；在５０℃以下较稳定，有较宽的ｐＨ稳定范围（ｐＨ３．０－７．０）；米氏常数Ｋｍ＝１２．８４ｍｇ·ｍｌ－１．     

产朊圆酵母(Torula utilis Henn 2.281)尿酸酶快速提取法的研究

近年来,种类繁多的细胞破碎技术在迅速发展的生物工程领域占有越来越重要的地位．酵母细胞由于其细胞壁的特殊结构,较难破碎,从而限制了它的应用前景．对此,前人曾经进行了广泛而深入的研究：Asenjo等人对酵母细胞的酶溶过程中温度、pH、酶用量及使用次序等方面进行了深入的研究．     

假丝酵母类金属硫蛋白的分离、纯化及功能研究

假丝酵母Cu-12(Candida sp．Cu-12)经Cu^2 诱导产生的蛋白进行Sephadex G-100和纤维素DE-52分离纯化及理化性质测定，获得的蛋白具有四个亚型，其主理化性质均与MT的定义相符，因此确定得到了假丝酵母的类金属硫蛋白，同时测定了该Cu—MT清除羟自由基和氧自由基的能力．     

海洋热带假丝酵母产角鲨烯发酵工艺研究

【目的】为了从海洋热带假丝酵母(Candida tropicalis)菌株中获取高产量的角鲨烯活性物质。【方法】研究不同碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH值、培养时间、光照和氧气等条件对海洋热带假丝酵母菌株产角鲨烯的影响。【结果】确定最优培养基为(W/V)1%酵母膏+2%蛋白胨+2%蔗糖,最佳摇瓶发酵条件:有氧条件下,初始pH值为5.0,培养温度25℃,经48h培养,角鲨烯产量可达2.25mg/g干重。【结论】采用优化后工艺条件进行发酵,获得的角鲨烯产量明显提高。