脂质体转染人肝星状细胞和肝细胞条件优化

利用Lipofectamine 2000(Lipo)介导LacZ及EGFP基因转染人肝星状细胞系LX-2和人肝细胞系Chang Liver,探讨Lipo用量、质粒用量、转染时间、细胞初始接种密度及不同启动子驱动对转染效率的影响.结果显示,两种细胞均能得到高效转染,Chang Liver细胞转染效率(80%)高于LX-2细胞(60%).Lipo用量为每孔2μL,转染后6 h换液,LX-2细胞应用质粒DNA为每孔0.45μg,Chang Liver细胞应用质粒DNA为每孔0.30~0.45μg,此时转染效率最高.巨细胞病毒(CMV)启动子驱动LacZ转染效率与CMV早期增强子/鸡β肌动蛋白(CAG)启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染效率无显著差异;细胞初始接种密度对转染效率无显著影响.     

血管内皮细胞生长因子

血管内皮细胞生长因子是一种高度特异作用于血管内皮细胞的多功能因子,与内皮细胞的ＦＬＴ１和ＦＬＫ１受体有高度的亲和力,总结了ＶＥＧＦ的结构特点,分类,体内分布与表主生物学功能。     

重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及对其增殖的影响

探讨重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响。将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中 ,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量。观察转染后平滑肌细胞生长状态情况 ,用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果正常细胞组NO的含量为78.4 4± 1 5 .38,而iNOS转染组NO含量为 2 36 .5 7± 31 .83,两组相比有非常显著差异 (P =0 .0 0 0 ,n =6 ) ,血管平滑肌细胞转染后生成一氧化氮。转染后的平滑肌细胞生长明显受到抑制 ,主要抑制平滑肌细胞周期G1 S期的过渡 ,使细胞停留在G1期。说明血管平滑肌细胞可以成功转染iNOS基因 ,生成的一氧化氮可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,为从血管非内皮成分进行iNOS基因转染提供了实验研究的依据     

流式细胞术优化MDCK细胞基因转染效率的研究

为探究脂质体介导的MDCK细胞基因转染效率,并获得最佳的优化方案,本研究选取不同配比的质粒和脂质体浓度,将p-EGFP-C1质粒转入MDCK细胞。转染后36h,利用台盼蓝染色法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率,获得优化的转染条件。结果发现,转染后MDCK细胞,实验组细胞活力与阴性对照组差异不显著(P>0.05)。当质粒(μg)∶脂质体(μL)浓度配比为0.5∶1.0、0.5∶1.25、0.5∶1.5时,转染率达到了较高水平,分别为(23.4±3.4)%、(24.5±4.5)%、(25.2±3.7)%,从经济因素考虑,脂质体介导的MDCK细胞基因转染质粒(μg)与脂质体(μL)的最佳配比浓度为0.5∶1.0。这为MDCK细胞用于基因转染提供了一定的理论基础。     

血管内皮细胞生长因子在损伤修复中的作用

近年研究显示血管内皮细胞生长因子能够促进局部组织的血管化,而血管生成是生理及病理性组织生长和损伤愈合的基础,故血管内皮细胞生长因子在损伤修复中有重要的作用。目前认为这一作用主要是促进内皮细胞有丝分裂和使细胞通透性增强,通过和血管内皮细胞的特异性受体结合,产生强大的促进内皮增殖及血管生成作用而实现的。     

川芎嗪依赖于内皮细胞的松弛血管作用

本实验结果表明川芎嗪(CXQ)具有松弛血管的作用。去内膜后,这种作用减弱。用消炎痛处理后,松弛作用不受改变,提示CXQ的作用并非由于内皮细胞代谢生成的前列隙素衍生物所引起。用放射免疫法测定cGMP和cAMP含量变化的结果表明,CXQ松弛血管的作用与cGMP含量升高有关,并受Ca~(++)所介导,而,cAMP含量无甚变化。这说明CXQ松弛血管的作用是依赖于内皮细胞的存在,可能与血管内皮细胞释放的内皮衍生松弛因子(EDRF)有关。     

血管内皮细胞生长因子在损伤修复中的作用

近年研究显示血管内皮细胞生长因子能够促进局部组织的血管化,而血管生成是生理及病理性组织生长和损伤愈合的基础,故血管内皮细胞生长因子在损伤修复中有重要的作用.目前认为这一作用主要是促进内皮细胞有丝分裂和使细胞通透性增强,通过和血管内皮细胞的特异性受体结合,产生强大的促进内皮增殖及血管生成作用而实现的.     

两种内皮细胞分泌血管紧张素Ⅱ的差异

为进一步了解血管内皮细胞 (VEC)在代谢特征上的异质性 ,加深对VEC生物学特性的认识 ,文中应用平行平板流动腔装置 ,将人胚肾小球血管内皮细胞 (HGVEC)和牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC)两种不同的EC在同样的剪切流环境中剪切作用 2 4h ,利用放射免疫法检测循环液中血管紧张素II(AngII)分泌量。结果表明 ,HGVEC的AngII平均分泌率 ( 7.5 4± 0 .2 7)pg (cm2 ·h)显著高于BPAEC( 6 .0 8± 0 .11)pg (cm2 ·h) ,且HGVEC的AngII平均分泌率随剪切时间的增加而减少 ,在各时点间的变异相对较大 ;而BPAEC的AngII平均分泌率在各时点的分泌率较为稳定 ,变幅较小。表明这两种内皮细胞在AngII分泌特性上存在异质性。     

桑叶对乳腺癌肿瘤血管内皮细胞抑制作用的研究

本文通过流式细胞仪(FCM)和酶联免疫吸附法(ELISA)来研究桑叶对乳腺癌肿瘤血管内皮细胞(ECs)细胞凋亡、细胞周期及内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)的影响.FCM分析表明,桑叶中有效成分能够诱导异常增殖的内皮细胞凋亡,使细胞周期停滞在DNA合成期,有效阻止内皮细胞的有丝分裂(P0.05);ELISA法结果表明,VEGFR-2的表达受到明显的抑制(P0.05).以上结果证实桑叶能够有效促进乳腺癌肿瘤血管内皮细胞的凋亡、影响其细胞周期的分布、抑制乳腺癌肿瘤血管内皮细胞生长因子受体-2的表达,对其增殖具有抑制作用.     

hBSP与GFP非融合表达载体的构建及乳腺癌细胞转染条件优化

为进一步研究骨唾液蛋白(BSP)在乳腺癌细胞骨转移的整个过程中的作用,首先要建立稳定高效表达BSP的乳腺癌细胞系.文中首先从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆hbsp基因,构建重组质粒pIRES2-hBSP-EGFP,然后利用脂质体介导转染特异性骨转移的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和流式细胞仪筛选获得稳定转染细胞.结果发现:在96孔板中,细胞融合度达到90%;用1μg脂质体介导280 ng重组质粒转染10 h,转染效率最高可达(19.70±1.10)%.     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。     

剪切力对脐静脉内皮细胞内游离钙的影响

探讨剪切力对脐静脉内皮细胞内游离钙的影响,利用流室装置,通过精密蠕动泵提供剪切力,选择5×10-5N/cm2(5dyne/cm2)和10×10-5N/cm2(10dyne/cm2)两种剪切力作用体外培养的脐静脉内皮细胞,作用不同时间,用荧光染色法来观察细胞内游离钙的变化。结果细胞在受到剪切力作用下,其胞内钙离子均有显著增加,且10×10-5N/cm2(10dyne/cm2)组要高于5×10-5N/cm2(5dyne/cm2)组,两实验组与对照组相比,两实验组之间相比在统计学上均具有显著性差异。说明内皮细胞受到剪切力作用后其细胞信号传导机制可能与细胞内钙的变化有关。     

用siRNA抑制胃癌细胞AGS中COX-2表达及对AKT磷酸化的抑制

构建了可在真核细胞中表达针对COX-2基因的siRNA表达载体,并用胃腺癌细胞系AGS建立了COX-2 siRNA的稳定转染细胞系。用Western-Blot检测稳定转染细胞系中COX-2的表达以及AKT的磷酸化水平。结果表明稳定转染C0X-2 siRNA的细胞中COX-2的表达较转染空载体的细胞明显降低,且发现COX-2表达的降低可抑制AKT—Ser^473和Thr-^308的磷酸化水平。为进-步探索抑制COX-2对胃癌细胞生物学特性的影响,及其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。     

儿茶素对溶血卵磷脂胆碱所致细胞损伤的保护作用

作者以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为材料,研究了溶血卵磷脂胆碱（LPC）和氧自由基（OFR）对血管内皮细胞（VEC）的损伤,及儿茶素对VEC的保护。结果显示：当VEC与LPC（6ug/ml）或黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶（X／XO）（10umol/L 200umol/L）共孵育24小时时,表现为细胞内乳酸脱氢酶（LDH）泄漏量增多,细胞内过氧化脂质丙二醛（MDA）含量升高,细胞生长减缓,存活率下降;当加入不同浓度的儿茶素后则可明显抑制LDH的泄量,降低MDA含量,细胞生长正常,存活率提高。表明LPC与X／XO对VEC有损伤作用,而儿茶素则能通过抗氧化途径抵抗LPC与X／XO至VEC的损伤。     

血管组织工程内皮细胞分离培养新方法

建立一种简单高效的血管组织工程内皮细胞分离培养方法.无菌分离大鼠主动脉,剪成约5 mm×2 mm的组织块,内膜朝下平铺于含Ⅰ型胶原酶的细胞培养皿中消化30 min,收集内皮细胞;其后,取出组织块继续内膜朝下置于另一培养皿中贴壁培养,直至细胞爬出并融合成单层.观察细胞形态,并分别对两种方式获得的传至第5代的细胞进行Ⅷ因子...     

葛根黄酮对糖基化终产物致细胞损伤的修复

研究了糖基化终产物（AGEs）对血管内皮细胞（VEC）的作用,以及葛根黄酮对AGEs致VEC损伤的修复.以体外培养的新生小牛胸主动脉VEC为材料,检测了AGEs (4 g/L)作用于VEC 24 h后,细胞内一氧化氮（NO^-₂/ NO^-₃）、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽（GSH）和脂褐素（LPF）含量的变化;细胞乳酸脱氢酶（LDH）的泄漏量;AGEs对细胞生长增殖的影响,及细胞形态和超微结构的变化.结果显示AGEs (4g/L)可使细胞增殖率、LDH、MDA及LPF含量显著升高（P<0.01）,NO^-₂/ NO^-₃和GSH含量显著降低(P<0.01).细胞形态收缩变形,胞内出现脂滴和空泡.同时加入葛根黄酮,可使以上指标及细胞形态均接近或恢复到正常水平.因此,葛根黄酮可作为防治糖尿病血管并发症的外源性氧自由基清除剂.     

反义核酸技术对人血管内皮细胞的改造作用

为降低在血栓形成早期血管内皮细胞分泌的血管性血友病因子(vWF)对凝血级联反应的触发效应,利用反义核酸技术构建降低vWF表达量的血管内皮细胞.人工合成vWF部分反义核酸(pvWF),构建重组的真核表达载体pcDNA3.1( )/pvWF.测序正确后用脂质体介导的方法转染血管内皮细胞,硫酸新霉素加压筛选后扩大培养转基因细胞,RT-PCR法检测转基因细胞中vWF mRNA的表达水平.结果表明,构建的vWF反义核酸真核表达载体能有效抑制细胞中vWF mRNA的表达,为新型抗凝血材料的研究提供一种基因改造的内皮细胞.     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。