小麦叶绿体DNA的提取与酶切

研究小麦叶绿体ＤＮＡ，需要快速，简便地获得质纯，量大的ｃｔＤＮＡ蒋高离子强度和抗坏血酸同时引入缓冲系统用于提取小麦ｃｔＤＮＡ利用高离子强度对ＤＮＡ与蛋白质之间的静电吸引造成襄胁损失的阻碍作用，及抗坏血酸提供低ｐＨ环境抑制酶活性等作用，得到较好的产率和纯度，并可得到清晰的限制性内酶图谱。     

rbcL基因在水稻叶绿体DNA基因库克隆中的定位

由水稻品系珍汕９７不育系为材料制得的叶绿体ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）基因库中，筛选到屯含核酮糖１，５－二磷酸羧化酶／加氧酶大亚基基因（ｒｂｃＬ）的重组质粒，对该重组质粒用ＰｖｕⅡ，Ｐｓｔ１ｔ和ＳａｌＩ限制性内切酶进行了分析并制得了限制图谱，ｒｂｃＬ基因在该图谱上进行了定位。     

猪肝线粒体DNA的纯化及其限制酶切分析

本文报道了一种纯化猪肝线粒体DNA } mtDNA)的简便方法.用差速离心制备线粒体，然后用1 `oSarkosyl提取粗制的mt DNA,氯仿一异戍醇脱蛋白，最后用Sepharose4B凝胶柱层析纯化mt DNA.对纯化的mt DNA用化学分析、紫外吸收光谱、凝胶电泳和限制酶切等方法进行了鉴定.猪肝mt DNA经限制酶Hindi, Hael, Hinc.y,BamH I和Eco R I酶切分别切割成.4r .6,.r,5, 5和3个片断，经估算猪肝。tDNA的分子鼻约为15.85千碱基对或10. A6 x 10‘道尔顿.     

纯化水稻叶绿体DNA的新方法

绿色植物叶绿体基因组结构和功能的探讨,是当前植物分子遗传学研究中的一个热点。七十年代中期以来,人们已对近四十种植物的叶绿体DNA(ctDNA)进行了深入的研究并逐渐形成了一套较为成熟的方法。然而,有关主要粮食作物水稻叶绿体基因组的研究,报道很少,其主要原因之一是水稻ctDNA的分离纯化较为困难。最近,我们将新鲜水稻嫩叶在缓冲液中直接匀浆,并调节细胞器悬浮液pH,改变细胞器表面带电状况的新方法,结合蔗糖梯度离心,成功地分离到纯净的水稻叶绿体,获得纯度较     

含水稻rbcL重组质粒限制图谱的构建

从水稻叶绿体羞因文库中挑选含rbcL荃因的3号克隆，采用大t煮沸法，分离纯化了质粒DNA.利用限制性核酸内切醉BamH I ,Sma I ,Xho I和Cla I进行单酶或双酶切，在BamH I限制图谱的羞础上构建了几种限制醉的限制图谱.     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｕｓ）肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了分析，其分子大小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＸｂａⅠ，ＢｇｌⅠ，ＨｉｎｄⅢ，ＢｇｌⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点．根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱     

萝卜叶绿体rbc L基因定位及ctDNA基因文库的构建

用改进的高离子强度法分离的萝卜叶绿体（ｃｔ）经ＳＤＳ６０℃裂解，抽提的ｃｔＤＮＡ只需简单纯化即可用于酶切分析．萝卜ｃｔＤＮＡ用４种限制性内切酶ＢａｍＨⅠ，ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ分别进行单酶完全酶解，推算其分子量和长度分别为８２．５×１０６和１２５ｋｂ．以Ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ标记的异源探针ｒｂｃＬ基因与ｃｔＤＮＡＥｃｏＲⅠ片段进行杂交，初步定位在Ｅ１１片段（１．７ｋｂ）上．以ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＭ１３为载体构建了萝卜ｃｔＤＮＡＥｃｏＲⅠ基因文库     

鳙鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱

用１１种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＢｃｏＲⅠ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ）分析鳙鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，简称ｍｔＤＮＡ），构建了全部１１种酶２２个切点的物理图谱．鳙鱼线粒体ＤＮＡ的分子大小约为１６．４４ｋｂ．酶切位点的分布是非随机的．     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

大肠杆菌分泌型穿梭质粒P^#GTE5DNA的酶切图谱

本文采用碱性裂解法获得产率较高的分泌型穿梭质粒P~# GTE_5 DNADNA,并作限制性内切酶的单、双酶完全消化,通过对DNA电泳条带的分析,初步得出该质粒的限制性酶切图谱.     

氯化铯密度梯度离心法纯化叶绿体DNA

本方法用蔗糖密度梯度离心分离烟草及油菜纯化的叶绿体,然后用氯化铯密度梯度超速离心纯化叶绿体DNA.不加DNase处理,但从限制性核酸内切酶作用,经琼脂糖凝胶电泳得到的比较清晰的限制图谱,产物可用于制作物理图谱和DNA重组合.     

一个在水稻胚胎中差异表达基因的分离鉴定

通过筛选水稻开花后48～50h的原胚和120～122h的分化胚的cDNA文库,得到一个在胚胎发育过程中表达有差异的克隆,命名为OsEES,测序结果显示OsEES含有一个预测的亚精氨合成酶结构域,编码一个大小约38×103(pI6.5)的蛋白.同时RNA原位杂交的结果显示开花48～50h的原胚中的信号强度明显大于开花120～122h的分化胚,表明OsEES可能在水稻胚胎发生过程中起到一定的调控作用.     

AFLP在水稻线粒体DNA研究中的应用

对 Ａ Ｆ Ｌ Ｐ应用于水稻线粒体基因组研究中的问题进行了研究结果表明： Ａ Ｆ Ｌ Ｐ分析对ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 质量要求高,ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 应完整并反复抽提以达高纯度 ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 不完全酶切所造成的假阳性可经第二次酶切排除选择引物一个选择碱基最适合水稻ｍ ｔ Ｄ Ｎ Ａ Ａ Ｆ Ｌ Ｐ分析 另外,研究表明从银染后未经烘烤的新鲜银染凝胶回收的 Ｄ Ｎ Ａ 扩增效果好、产物经纯化可直接用于克隆以及探针标记     

水杨酸预处理对水稻种子萌发及其代谢酶的影响

以不同浓度(0.005～0.2 mmol·L-1)的外源水杨酸(SA)预处理水稻种子协优46(抗水稻白叶枯病)和浙辐802(高感水稻白叶枯病).结果表明:低浓度SA预处理促进水稻种子萌发,两品种在发芽率、发芽指数、可溶性糖含量、POD和SOD酶活性存在明显差异.在SA浓度为0.01 mmol·L-1时,发芽指数及活性指数达最高;协优46在处理46 h时发芽率提高最多,为8.0%,浙辐802在处理12 h时提高最多,为6.7%;浙辐802比协优46可溶性糖含量增加多;在SA浓度为0.005 mmol·L-1时,浙辐802的POD酶活性降低了27.8%,协优46的POD活性则提高了52.3%;浙辐802的SOD酶活性较对照降低了8.7%,而协优46只降低了2.4%.     

响应面分析法优化稻壳灰制备纳米级白炭黑工艺

以稻壳灰为原料经过生产水玻璃的中间环节制备纳米级白炭黑,利用响应面软件设计试验,并建立数学模型,在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出反应的最佳条件:水玻璃浓度为15 Be,反应温度为54℃,硫酸浓度为0.6 mol/l,反应终止时pH为6,反应时间为62 min,所得产品的粒度平均为70     

利用RAPD分子标记在我国杂交水稻主要恢复系的DNA多态性研究

用258个RAPD引物分析了我国杂交水稻35个主要恢复系,其中42个引物具有多态性,从中筛选出13个RAPD引物,可检测出重演性较好的多态性片段93条,能够有效地区分所有供试的恢复系材料,聚类分析显示：在GS＝0．57附近,可将35个恢复系材料聚为4类,大部分材料的遗传相似系数在0．80以上,表明我国杂交水稻恢复资源比较丰富,但其遗传差异较小,遗传背景比较单一,从而在很大程度上限制了我国水稻杂种优劣的利用。     

含蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿体核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法,提取、分离和纯化了pVFB33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解,构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱,同时,对实验结果进行了分析讨论.