层理鞭枝藻的藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白α-亚基及其色素肽的光化学与光谱性质

用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学，这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域．藻蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻蓝蛋白α－亚基的相应性质很相似，藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻红蓝蛋白α－亚基的相应性质相似，不过藻红蓝蛋白α－亚基色素肽还具有一种新的可逆光化学性质，本文中称为类型Ⅲ可逆光化学，藻红蓝蛋白α－亚基在１ｍｏｌ／Ｌ硫氰化钾和４ｍｏｌ／Ｌ尿素中也具有该类型Ⅲ可逆光化学．     

蛋白A-藻蓝蛋白β亚基融合蛋白的性质及应用

PCR扩增金黄色葡萄球菌蛋白A基因spa,通过酶切位点的转换构建重组质粒pET-spa,进一步成功构建能表达融合蛋白SPA-CpcB的质粒pET-spa-cpcB.将重组质粒pET-spa-cpcB与在大肠杆菌内生成藻胆色素必需的质粒,以及藻胆蛋白裂合酶质粒,共同转入大肠杆菌BL21(DE3)内,进行体内重组,生物合成融合色素蛋白.蛋白质电泳以及锌染色结果表明,体内重组分别获得了融合色素蛋白SPA-CpcB-PCB或SPA-CpcB-PEB.吸收光谱与荧光光谱结果表明,融合色素蛋白SPA-CpcB-PCB或SPA-CpcB-PEB具有与CpcB-PCB或CpcB-PEB相同的光谱特征.将SPA-CpcB-PEB与生物素标记的兔抗体进行荧光免疫反应,通过多功能微孔板荧光检测仪检测,结果表明融合色素蛋白SPA-CpcB-PEB具有SPA能与多种哺乳动物血清中的IgG的Fc段结合的特点.利用SPA-CpcB-PEB来检测包被于聚苯乙烯微量反应板的基因编码为all5292的蛋白,证实了该融合色素蛋白可用于免疫检测.     

三种藻胆蛋白对人乳腺癌Bcap-37细胞的光动力杀伤效果

从高等红藻坛紫菜中提取R-藻红蛋白(R-PE)、R-藻蓝蛋白(R-PC),从低等蓝藻钝顶螺旋藻中提取C-藻蓝蛋白(C-PC).研究10、25、50和100 μg/mL的R-PE、R-PC和C-PC介导的光动力效应对乳腺癌细胞Bcap-37的生存率的影响,MTT法测定结果,探讨这三种藻胆蛋白对癌细胞的光动力杀伤效应与其光敏性质差异的相关性.三种藻胆蛋白的光动力作用对Bcap-37细胞具有显著杀伤并显示出剂量效应,质量浓度在25 μg/mL以上时,杀伤效果依次为:R-PE＞R-PC＞C-PC;仅用激光处理(497 nm,632.8 nm),Bcap-37细胞的生存率达到88.6%和91.3%;仅用藻胆蛋白处理,培养24 h后,R-PE＜25 μg/mL,R-PC、C-PC＜50 μg/mL时,对Bcap-37细胞具有一定的促进生长作用,R-PE≥25 μg/mL,R-PC、C-PC≥50 μg/mL时,抑制细胞生长.     

藻红蓝α亚基脱辅基蛋白基因的克隆和表达

用 Ｐ Ｃ Ｒ技术从层理鞭枝藻总 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增藻红蓝蛋白 α亚基脱辅基蛋白的基因（ｐｅｃ Ａ）, 将ｐｅｃ Ａ 克隆于ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ,然后将ｐｅｃ Ａ 基因插入表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｍ Ｄ,形成的重组质粒在 Ｂ Ｌ２１（ Ｄ Ｅ３）中获得了高效表达,表达蛋白形成包涵体．高效表达的蛋白质的分子量为１９×１０３ ,与藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白的分子量一致,经 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 进一步证实该表达蛋白为藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白