合成多肽的电喷雾质谱研究

利用电喷雾多极串联质谱对3种合成多肽进行了系统的鉴定和分析研究。首先通过全扫描模式测定了其分子量，然后选择[M H]^ 或[M 2H]^2 离子通过串联质谱(MS／MS)得到碎片离子，采用y离子和b离子互补的方法测定了多肽序列。利用文献数据对这种方法进行了验证，实验结果表明，该方法简便、快速、实用。     

纳升电喷雾串联质谱法确证阿托西班的一级结构

利用电喷雾串联质谱对合成八肽阿托西班进行了二硫键还原前后的精确分子量测定和一级结构的确证.首先通过全扫描模式测定了其还原前后的精确分子量,然后选择母离子m/z 498.73(双电荷)通过串联质谱(MS/MS)得到碎片离子,采用Y离子的方法测定了阿托西班的序列并对其的修饰位点进行了确证.本方法具有灵敏度高、速度快、样品无需纯化等特点,在多肽类药物一级结构分析方面具有独特的优势.     

纳升电喷雾串联质谱在阿托西班一级结构确证中的应用

利用电喷雾串联质谱对合成八肽阿托西班进行了二硫键还原前后的精确相对分子质量测定和一级结构的确证.首先通过全扫描模式测定了其还原前后的精确相对分子质量,然后通过串联质谱(MS/MS)得到母离子m/z 498.73(双电荷)的碎片离子,采用y离子的方法测定了阿托西班的序列并对其修饰位点进行了确证.该方法具有灵敏度高、速度快、样品无需纯化等特点,在多肽类药物一级结构分析方面具有独特的优势.     

无机磷试剂辅助均环肽库的建立及其电喷雾质谱研究

在无机磷试剂辅助下建立了氨基酸自组装成均环肽的方法, 得到了相应的均环肽库. 均环肽库的建立增加了肽库的多样性, 为药物筛选提供了新的选择性. 采用电喷雾多级质谱技术, 对系列均环多肽 [M＋H]＋离子和[M＋Na]＋离子的质谱裂解规律进行了系统研究, 两种系列的离子具有不同的质谱裂解特征, 分别提出了其可能的质谱裂解机制. 该研究丰富了环多肽化合物的电喷雾多级质谱研究, 结果表明环肽化合物的加钠离子较加氢离子的质谱图可以更容易地用于环多肽的序列测定. 本研究为其它类似环肽化合物结构的分析鉴定及利用电喷雾质谱推测环肽序列提供了有效的质谱方法.     

反相高效液相色谱-电喷雾质谱法分析食源血管紧张素转换酶抑制肽

利用反相高效液相色谱/电喷雾离子阱质谱法,直接分析从牦牛乳酪蛋白中酶水解得到的血管紧张素转换酶抑制肽粗产物。RP-HPLC显示具有活性的多肽粗产物含有3个主要成分,质谱同步测定各组分的分子量(m/z)分别为815.2,1680.1,962.2,然后选择[M H] 离子通过串联质谱(MS/MS)得到碎片离子,利用b离子和y离子互补的方法鉴定了多肽序列。三条肽分别为Leu-Pro-Tyr-Tyr,Pro-Leu-Pro-Leu-Leu-Gln,Phe-Leu-Pro-Pro-Tyr-Tyr。结果显示,所获得的多肽序列与牛乳酪蛋白一级结构中相应肽段的序列一致。     

含有28个氨基酸的复杂多肽的串级质谱全序列分析研究

利用MALDI-TOF/TOF MS和ESI-MS/MS对一种含有多达28个氨基酸的复杂合成多肽成功进行了全序列测定. 通过调节激光强度、碰撞诱导解离(CID)能量等质谱参数以及依据不同序列分析软件, 获得了涵盖所有b型和y型碎片离子的串级质谱图. 结果显示这种方法可以有效地解决de novo测序方法遇到的谱峰过于复杂导致运算死机等问题. 通过讨论如何对含有超过20个氨基酸片断的多肽进行合格串级质谱实验, 为蛋白质组学肽段序列测定提供了新的方法和思路.     

磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法对新蛋白质进行从头测序

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序. 共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列, 一些磺化后信噪比非常低的肽段也获得了比较完整的序列. 同时通过从头测序分析确定了一对甲硫氨酸非氧化和氧化肽段的序列. 结果表明, 磺化后的肽段离子化效率大大增强, 在PSD(源后裂解)过程中只有肽键断裂产生的C端的碎片离子系列(y离子系列)出现在质谱图中, 图谱背景清晰, 信噪比高, 单纯的y离子系列使得图谱解析变得非常容易. 将这8条序列在NCBI(美国国立生物技术信息中心)数据库中进行BLAST(蛋白质序列比对工具)检索印证这种β-葡萄糖甘酶是一个新蛋白质, 发现的两条相对保守的序列为进一步研究奠定了基础.     

中药方剂化学成分液质联用分析中标准质谱库的建立和应用

利用电喷雾离子化四级杆飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF)技术,以四物汤类方为例,建立了类方成分的液质联用分析质谱库。利用Masslynx工作站的Chromalynx模块的检索和与质谱库比较的功能,可以快速鉴定色谱图中各个色谱峰。此方法可应用于液质联用检测系统的谱库检测,提高了对类方成分鉴定的效率和可靠性。本质谱库共收录了液质联用条件下57个四物汤类方标准品的质谱信息,包括正负离子模式下各成分的保留时间、准分子离子峰及其碎片离子的精确质量数。该质谱库支持标准NIST谱图检索及比对方法,可自动完成总离子流色谱图中各色谱峰的识别、质谱图提取及鉴定。     

基于双极性离子阱内质子转移反应的多肽离子电荷调控方法研究

电喷雾是质谱分析多肽和蛋白质等生物分子时最常用的离子化技术。电喷雾产生的多肽和蛋白质离子通常带有多电荷,从而产生多个谱峰,导致谱图复杂。通过气相离子/离子间的质子转移反应可以有效调节经电喷雾离子化后蛋白和多肽等生物大分子的电荷价态,简化谱图,对于复杂蛋白和多肽生物样品的分析具有重要意义。本研究通过研制的一套双极性离子阱质谱装置,利用阱内正、负离子间的质子转移反应,实现了多肽离子的电荷调控。以氧化型谷胱甘肽、缩宫素、强啡肽分子作为典型样品对方法的检测效果进行了验证。结果表明,此方法可去除多肽正离子中多余的正电荷,当注入足够的负离子进行反应时,可以将带多个电荷的多肽阳离子的价态降至最低,从而有效简化谱图。     

乙二胺钴氧合反应的电喷雾串联质谱研究

采用电喷雾多级串联质谱技术对氧载体模型化合物乙二胺钴氧合产物的的质谱裂解规律进行了探讨。以固相法合成的乙二胺钴吸氧初和吸氧6 d两个阶段为研究体系,在正离子电喷雾质谱条件下能够清楚地观测到乙二胺钴氧合配合物的特征碎片离子。对其中m/z 150.86的碎片峰进行子离子扫描,可得到失去中性氧分子(M=32)的子离子碎片峰(m/z 118.85),从而可进一步确认其为氧合配合物碎片峰。本文采用电喷雾多级串联质谱技术对吸氧初和吸氧饱和后的两个体系进行了合理的初步探讨,根据所得质谱数据对乙二胺钴氧合产物的结构、裂解规律及氧气的存在形态给出初步合理的推论,结果表明,吸氧过程是一个老化的过程,乙二胺钴配合物从吸氧初到吸氧饱和后,其形态经历了从双核过氧桥联配合物到双核过氧羟基双桥联配合物形态的转变。初步确立电喷雾质谱(ESI-MS)可做为研究氧合反应和表征氧合配合物的有效技术手段。