鲁米诺-四磺基锰酞菁-过氧化氢化学发光体系在蛋白质测定中的应用

1 引 言蛋白质的分析测定在科研和临床上都具有重要意义。目前已建立了许多对蛋白质进行定量的方法。利用血红素等天然酶,或者金属卟啉催化鲁米诺化学发光,已实现了对蛋白质样品的化学发光测定。作为与金属卟啉有类似母体结构的化合物,金属酞菁在荧光和化学发光分析中已显示了强烈的催化活性。在本文中,将MnTSPc用于催化鲁米诺-过氧化     

四磺基铈酞菁共振光散射法测定人血清白蛋白

1　引　　言蛋白质的定量测定是生物化学、药学、食品及临床中常涉及的内容 ,也是临床诊断疾病及检验疾病康复情况的重要指标 ,是许多生化药物分离提纯和质量检验中最常用的手段。其定量分析方法研究在国际上一直非常活跃。本文研究了四磺基铈酞菁 (ＣｅＳ4Ｐｃ)与人血清白蛋白 (ＨＳＡ)作用的共振光散射光谱 ,发现在酸性条件 (ｐＨ =2 .0～ 3 .0 )下 ,在 4 1 2ｎｍ处存在一共振光散射强峰 ,其强度增加值 (ΔＩ)与人血清白蛋白的浓度呈线性关系。据此建立了一种测定微量ＨＳＡ的方法。该方法简便 ,快速 ,灵敏度高 ,用于混合样品中ＨＳＡ的测…     

溴化十六烷基三甲基铵敏化四磺基锰酞菁-脱氧核糖核酸作用的共振光散射增强研究

阳离子染料四磺基锰酞菁(MnTSPe)与脱氧核糖核酸(DNA)作用可产生共振光散射增强(RISE)，在pH为10．60-11．85及离子强度低于0．01mol/L的条件下，能观察到314、346．2、452.6和494．4nm处的特征RLSE信号；加入表面活性剂溴化十六烷基三甲铵(CTMAB)后，发现其可强烈敏化该RLSE信号。受CTMAB敏化后的RLSE信号与一定范围内的DNA浓度呈线性关系，从而拟定了一种测定DNA的共振光散射新方法，并将其用于合成样品的分析测定，效果良好。     

四磺基锰酞菁在光度分析中的催化性能研究

研究了四磺基锰酞菁(MnTSPc)作为辣根过氧化物酶(HRP)的模拟酶,在光度分析中有、无H2O2存在时对苯酚及4 氨基安替比林的氧化缩合反应的催化作用;还研究了一些表面活性剂对其催化作用的影响。利用此催化反应可以测定H2O2及葡萄糖的浓度;本体系中H2O2测定的线性范围为1～50mmol L;对1.0×10-3mmol L的H2O2做了7次平行测定,相对标准偏差为1.9%;测定葡萄糖的线性范围为1～14mmol L。     

四磺基锰酞菁作为过氧化物模拟酶在过氧化氢测定中的应用

1　引　　言过氧化氢的测定在医学和环境科学中都具有很重要的意义。目前已有许多测定过氧化氢的方法 ,如光度法、荧光法、电分析法及化学发光法等。四磺基锰酞菁 (MnTSPc)是一种与金属卟啉有着类似母体结构的金属酞菁类化合物 ,它具有过氧化物模拟酶的性质。继前文用对羟基苯乙酸和L 酪氨酸两种经典荧光底物成功实现对过氧化氢进行荧光分析测定后 ,我们又发现 ,用邻苯二胺 (OPD)做底物 ,以MnTSPc催化其与过氧化氢反应 ,也可实现对过氧化氢的高灵敏测定。本文研究了此催化荧光反应的最佳条件 ,建立了测定过氧化氢的催化荧光分析新方法 …     

四磺基锰酞菁作为过氧化物模拟酶在过氧化氢化学发光测定中的应用

以四磺基锰酞菁 (MnTSPc)作为过氧化物模拟酶催化H2 O2 与鲁米诺的化学发光反应 ,建立了测定环境样品中H2 O2 的化学发光分析新方法。该法的线性范围为 4 .0× 10 - 8～ 2 .0× 10 - 5mol L ;检出限为 6 .8×10 - 9mol L ;对 1.0× 10 - 6 mol L的H2 O2 进行连续 10次平行测定 ,相对标准偏差为 2 .4 %。用本法对天然雨水进行了分析测定 ,结果良好。     

四羧基镍酞菁共振散射法测定蛋白质

建立了一种测定蛋白质的新方法．在pH3．6的Britton-Robinson（B-R）缓冲溶液中,蛋白质与四羧基镍酞菁NiPc（COOH）4发生相互作用,使体系在λ=388nm处的共振散射（RLS）增强,并且增强的散射强度（IRLS）与蛋白质的含量成比例,据此利用四羧基镍酞菁NiPc（COOH）4为光谱探针共振散射法测定人血清中的总蛋白质,同时优化了体系光散射检测的实验参数．在最佳的实验条件下,对牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）、人血清总蛋白（TP）的线性范围分别为0．00～1．20mg／L、0．00～1．00mg／L、0．00～1．00mg／L,相应检测限分别为5．97×10^-4mg／L、2．90×10^-4mg／L、4．76×10^-4mg／L．将该方法应用于实际人血清样品中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝法比较,令人满意．     

蛋白质-四羧基铜酞菁体系的共振散射行为及其分析应用

在pH 3.0的Clark-Lub's 缓冲溶液中,蛋白质与四羧基铜酞菁(CuPc(COOH)4)作用,使体系的共振光散射增强,在λ=389 nm处光散射强度最大.增强作用的强弱与蛋白质的含量成正比,据此建立了共振光散射测定蛋白质的新方法.此方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、免疫球蛋白G(IgG)、鱼精蛋白(Protamine)、血清总蛋白(TP)的测定范围分别为0.05～1.60 mg/L、 0.025～1.60 mg/L、 0～1.45 mg/L、 0.1～1.50 mg/L、 0～1.60 mg/L,相应检出限分别为1.12×10-2 mg/L、 1.11×10-2 mg/L、 1.95×10-2 mg/L、 3.61×10-3 mg/L、 4.34×10-3 mg/L.方法应用于实际人血清样品中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝法基本一致.     

吖啶红-SLS体系共振瑞利散射法测定蛋白质

研究了吖啶红染料与蛋白质的结合反应。在十二烷基磺酸钠存在下及pH2.90的柠檬酸NaOH介质中,蛋白质与吖啶红形成复合物,使最大波长392nm的共振光散射光谱得到加强,根据其共振光散射的增强程度,可用于蛋白质的定量测定。十二烷基磺酸钠的加入,使灵敏度提高11倍,牛血清白蛋白、γ球蛋白的线性范围分别为0.03～0.7mg/L、0.05～1.3mg/L,检出限分别为6.4μg/L、10.8μg/L。用于人血清、牛奶、豆浆、尿液中总蛋白质的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G 250法一致。     

四磺基铝酞菁-阳离子表面活性剂体系应用于白酒中乙醇含量的测定

基于四磺基铝酞菁（AIS4Pc)在阳离子表面活性剂存在下发生诱导缔合而导致体系荧光猝灭,而在乙醇存在下AIS4Ps解聚体而使体系荧光恢复的原理,建立了测定白酒中乙醇含量的新方法。方法的线性区间为0．5％－90％（V／V）乙醇,检测限为0．48％（V／V）。本法已应用于实际酒样中乙醇的直接测定,结果满意。     

用共振光散射技术研究蛋白质与丽春红2R的相互作用

在pH3．50的Britton-Robinson缓冲溶液中，丽春红2R与蛋白质发生结合反应，使最大波长为352．5nm的共振散射光谱得到加强。据此建立了利用丽春红2R作探针，用共振散射光谱技术测定蛋白质的新方法。散射光强度与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)和免疫球蛋白(IgG)的浓度在0．25～17．5μg／mL范围内成正比。方法的稳定性好，快速、简便，绝大多数氨基酸、金属离子均不产生干扰，用于人血清样品中蛋白质的测定，获得了满意的结果，加标回收率为93．4％～100．1％。     

Determination of Proteins Based on Their Resonance Light Scattering Enhancement Effect on Manganese-Tetrasulfonatophthalocyanine

This is the first report on the determination of proteins with manganese-tetrasulfonatophthalocyanine (MnTSPc) by resonance light scattering (RLS). At pH 3.6, the interactions of MnTSPc with the enhanced RLS signals at 344nm, proteins, including bovine serum albumin (BSA), human serum albumin (HSA), human -IgG, and ovalbumin, can be determined with a limit of detection below 20ngmL^–1. The method has been applied to the analysis of total protein in human serum samples collected from a hospital, and the results were in good agreement with those reported by the hospital.     

钯(II)-柠檬黄-离子液体三元络合体系的共振瑞利散射光谱及其分析应用研究

在pH 2.0～6.0的BR缓冲溶液中, Pd(II)与柠檬黄(TTZ)形成的络离子与溴化1-十六烷基-3-甲基咪唑([C₁₆mim]Br)离子液体发生作用形成离子缔合物, 引起溶液共振瑞利散射(RRS)显著增强, 并产生新的RRS光谱, 其最大RRS峰位于458 nm. 在0.043～0.860 μg/mL范围内散射强度(ΔI)与柠檬黄的浓度成正比. 该方法简单灵敏, 对柠檬黄的检出限(3σ/K)为5.5 ng/mL (n＝11). 建立了一种简便、快速测定柠檬黄的新方法, 并成功用于饮料样中柠檬黄含量的测定.     

共振瑞利散射淬灭法的分析应用

对共振瑞利散射(resonance Rayleigh scattering, RRS)淬灭法在蛋白质、核酸、药物及金属离子测定中的分析应用进行综述. 结合共振瑞利散射增强原理,对实验中出现的散射淬灭现象及淬灭原因进行归纳总结,为RRS淬灭分析方法的建立提供新的思路.     

苋菜红—蛋白质体系的共振光散射光谱研究及其分析应用

研究了染色剂苋菜红与蛋白质的结合反应,在ＰＨ３．８７的Ｃｌａｒｋ－Ｌｕｂｓ缓冲介质中,苋菜红与蛋白质通过分子间作用力形成复合物。使最大波长约为３６４ｎｍ的共振光散射光谱得到加强。以苋菜红为标记物根据其共振光散射的增强程度。可用于蛋白质的定量测定,其线性响应范围为０－５．０ｍｇ／Ｌ。方法的稳定性及选择性良好,用于人血清试样中总蛋白的测定,结果与经典的考马斯亮兰法一致。     

Determination of Trace Proteins by Rayleigh Light Scattering Technique with Indophenol Blue

The interaction of indophenol blue (IPB) with proteins in aqueous solution has been studied by optical absorption and Rayleigh light scattering (RLS) spectroscopy. At pH 3.8, the weak RLS of IPB is enhanced by proteins. Based on this phenomenon, a novel method for the determination of proteins at nanogram levels using the RLS technique is developed. The method is simple, practical and sensitive. The linear range is 0.25–20.9µgmL^–1 for BSA, and 0.25–17.6µgmL^–1 for HSA. The detection limits (S/N=3) are 23ngmL^–1 for BSA and 22ngmL^–1 for HAS. The results for the determination of proteins in human serum samples are very close to those obtained by an established clinical method. There is very little interference from amino acids, metal ions or other coexisting compounds.     

甲基紫硫酸软骨素共振瑞利散射光谱及其应用

在Britton-Robinson缓冲介质(pH9.37)中硫酸软骨素与甲基紫反应形成离子缔合物时,共振瑞利散射(RRS)强度会明显增强,其最大RRS峰位于505和661 nm处。本文对反应的最佳条件、影响因素、硫酸软骨素浓度与RRS强度的关系进行了研究,建立起一种快速、简便、灵敏的测定硫酸软骨素的方法。本法在661和505 nm测定波长处的线性范围均为:0.15~0.90 mg/L,其检出限分别为0.019 mg/L(505 nm)和0.043mg/L(661 nm)。该法应用于针剂中硫酸软骨素的测定,结果满意。     

超痕量HRP的邻苯二胺微粒瑞利散射光谱分析新方法及其应用

在pH 4.8 的乙酸盐缓冲溶液中, 邻苯二胺(OPD)形成粒径约380 nm的微粒, 在392, 420, 445, 484和507 nm处有5个较强的Rayleigh散射峰. 辣根过氧化酶(HRP)催化H2O2氧化邻苯二胺生成黄色的2,3-二氨基吩嗪产物, 反应体系在420, 445和484 nm处的Rayleigh散射光信号显著减弱. 在最佳条件下, HRP浓度在8.3×10-12～4.17×10-10 g/mL范围内均与445和484 nm处的Rayleigh散射强度的降低值呈线性关系, 其回归方程、相关系数、检出限(3σ)分别为ΔI445 nm=2.23c+11, ΔI484 nm=1.47c+4.8; 0.9982, 0.9919; 3.6×10-12 g/mL HRP和5.4×10-12 g/mL HRP. 该法用于辣根过氧化酶(HRP)的测定, 结果满意.     

共振瑞利散射法对普萘洛尔特效适配体系的手性分析

本文提出了对于手性药物普萘洛尔手性识别和手性分析的新方法。 该方法引用基于氧化石墨烯的指数富集配体系统进化筛选技术(GO-SELEX),经过10轮优化筛选出对心血管药物普萘洛尔有高度亲和力的特效适配体。 然后通过共振瑞利散射光谱法(RRS)对反应体系进行特效性检测,实验表明S-普萘洛尔和R-普萘洛尔有迥然不同的光谱差异,S-普萘洛尔与特效适配体结合后的RRS显著增强,而R-普萘洛尔与适配体结合后的RRS几乎没有变化。 据此可以对心血管药物手性普萘洛尔进行有效的手性识别。 在考察反应体系和实验条件的基础上,可对S-普萘洛尔进行实验检测,同时对外消旋体中的R-普萘洛尔进行计算分析。 实验对S-普萘洛尔的线性范围为5~275 nmol/L,检测限为0.5 nmol/L。 方法应用于外消旋药片的分析检测,结果令人满意。 实验表明,RRS检测特效适配体结合的手性靶标体系会彰显不同的光谱差异,从而可对手性对映体进行手性识别,尤其是可利用其光谱差异实现同时测定的手性分析,方法可在特殊情形下不经分离而同时测定手性对映体,具有推广应用价值。     

亮黄-曲通X-100体系共振瑞利散射法测定蛋白质

基于在TrtionX-100存在下，蛋白质对有机染料亮黄瑞利光散射的增强作用。拟定了测定蛋白质的瑞利光散射光，由于添加了TritonX-100，对不同的蛋白质，测定的灵敏度提高了5－11．8倍，线性范围在0－5．0mg/L之间，最低检测限为10．2μg/L。