端粒酶检测新方法研究进展

端粒酶是一种核蛋白逆转录酶,能以自身的RNA为模板添加重复序列(TTAGGG)n至染色体末端,稳定端粒长度。端粒酶在85%～90%的癌细胞中处于激活状态,已经引起了人们的广泛关注,成为肿瘤诊断和临床治疗的重要突破口。因此,准确、高效地测定端粒酶活性具有重要意义。近年来,许多灵敏、准确的体外或原位检测技术在端粒酶活性检测方面得到了发展。该文综述了近年来端粒酶活性检测的最新进展,并对其发展趋势进行了展望。     

端粒酶活性检测试纸构建与肿瘤细胞可视化判定

端粒酶是将端粒重复序列添加到染色体末端端粒上的核糖核蛋白,可补偿细胞分裂过程中的端粒缩短,维持细胞持续增殖.端粒酶活性在肿瘤细胞中过表达,在正常体细胞中被抑制,是癌症诊断和预后评估的重要标志物.本研究构建了一种检测试纸,用于可视化分析端粒酶活性和判定肿瘤细胞.将样品垫、喷涂DNA功能化金纳米粒子的结合垫、含有测试区和对...     

端粒酶活性在氯化镧诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用

探讨端粒酶活性在LaCl_3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中细胞中的作用.肿瘤细胞常规培养于RPMI1640培养液中,加入终浓度为3 mmol·L~(-1)的LaCl_3,继续培养12,24,36,48 h后,应用琼脂糖凝胶电泳和AO/EB双荧光染色检测细胞凋亡,以FITC-(C_3TA_2)_3 PNA为荧光探针检测细胞内端粒长度.以TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性.LaCl_3浓度为3 mmol·L~(-1),作用0～48 h,细胞的琼脂精凝胶电泳和AO/EB双荧光染色法均观察到明显的细胞凋亡变化,细胞内端粒长度缩短,端粒酶活性下降,并呈时间-效应关系.LaCl_3可通过抑制MDCC-MSB1细胞端粒酶活性而诱导其发生凋亡.     

基于链替代信号放大灵敏检测端粒酶活性的电化学方法

利用标记二茂铁基团的DNA(T-DNA)分子作为信号探针, 基于端粒酶特异性延长其底物链(TS)所引发的链替代反应, 建立了一种检测端粒酶活性的电化学信号放大法. 将巯基化的发夹型DNA分子(H-DNA)通过金-硫键自组装于金电极表面, 辅助DNA(A-DNA)与二茂铁修饰的T-DNA部分互补杂交形成双链AT-DNA; 当端粒酶存在时, 可在TS的3′末端合成TTAGGG的重复序列; A-DNA与TS延长链杂交置换出T-DNA; T-DNA与发夹H-DNA杂交使得二茂铁靠近电极表面; 一条TS延长链可以释放出多条T-DNA, 将二茂铁富集到金电极表面, 从而实现信号放大检测端粒酶活性. HeLa细胞个数在5~100范围内与电流值成正比, 最低可检测5个HeLa细胞中端粒酶的活性. 因此, 本文建立了一种简单灵敏检测端粒酶活性的电化学方法.     

基于脱氧核酶的无标记端粒酶检测新方法

设计了一种发卡型核酸探针,结合脱氧核酶(DNAzyme)与支点介导链置换技术建立了一种检测端粒酶的新方法.该发卡型探针通过阻碍G-四链体的形成来抑制DNAzyme的过氧化物酶活性.当体系中的端粒酶引物TS被催化延伸后,可以通过链置换反应破坏该发卡结构,从而释放出自由的DNAzyme以催化过氧化氢氧化ABTS2-,产生可被检测的吸收信号变化.实验结果表明,应用该方法可以检测低至500个Hela细胞等当量的端粒酶,且该方法操作简单、不需要荧光标记和复杂的表面修饰,有望在肿瘤细胞端粒酶活性分析中获得广泛应用.     

单分子荧光技术在端粒和端粒酶研究中的应用

端粒酶是一种逆转录酶,能够维持端粒的长度和活性,从而防止染色体末端降解或融合,维持染色体稳定.大多数正常体细胞中端粒酶活性被抑制,端粒长度随着细胞持续分裂逐渐缩短;而在大多数癌细胞中端粒酶都表现出活性,端粒的长度和结构得以维持,癌细胞永生化.由此可见端粒酶是一种重要的癌症标志物,可作为癌症诊断依据和治疗靶点.然而,端粒酶结构复杂且数量少,难以从微量全酶复合物中分离出足量端粒酶用于分析,这为传统方法研究端粒酶带来极大困难.随着单分子荧光技术的发展,荧光共振能量转移、荧光双色同步响应等技术已被应用于端粒酶的研究,打破了传统方法检测端粒酶的各种局限.本文主要综述了单分子荧光技术的发展,端粒、端粒酶与癌症及其研究进展,并对单分子荧光技术在端粒酶研究中的应用及其发展趋势进行了总结和展望.     

基于杂交链式反应信号放大和磁分离技术荧光检测端粒酶活性

端粒酶是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶, 它一般在癌细胞中被激活. 它与端粒DNA的不断复制以及癌细胞的不断增殖密切相关. 所以检测端粒酶的活性对癌症的早期诊断以及以端粒酶为靶标分子的抗癌药物的开发具有重要意义. 利用杂交链式反应(HCR)无酶放大检测信号, 建立了一种简单、快速的端粒酶活性检测方法. 端粒酶延伸产物是一条末端具有(ggttag)_n重复序列的DNA. 在实验过程中, 通过链霉亲合素与生物素的特异性作用将端粒酶延伸产物连接在磁性微球上. 设计一条端粒酶延伸产物特异性的DNA探针I作为杂交链式反应的引发探针. DNA探针I的3'-端与端粒酶延伸产物的重复序列匹配, 通过杂交, DNA探针I被固定在磁球上; DNA探针I的5'-端引发DNA探针II和探针III发生杂交链式反应. DNA探针II和探针III上都标记有荧光基团, 可以利用荧光直接进行信号检测. 在反应过程中, 通过磁分离去除多余未反应的三种DNA探针. 在优化条件下, 可以检测到1.0×10⁵个Hela细胞中的端粒酶活性. 该方法简单、快速、检测成本低, 分析全程无酶参与, 在肿瘤或癌症的临床诊断以及以端粒酶为靶标分子的抗癌药物的筛选上具有广阔的应用前景.     

NEWS——基于磁珠和纳米粒子的电化学业发光扩增方法检测癌细胞端粒酶活力

端粒酶又称端粒末端转转酶,是一种能延长端粒末端的核酸蛋白复合物,它能够以自身的RNA为模板合成端粒重复序列TTAGGG,从而得以维持端粒长度,而研究表明,在恶性肿瘤中端粒酶呈广谱的表达,大于85%的人体肿瘤中端粒酶活性显著增高,这些特征使得端粒酶可被看作为一种通用的癌症标记物.     

基于磁性微球的无标记化学发光端粒传感新技术

近年来无标记型DNA传感技术的研究已成为病原基因测定和基因疾病诊断等领域新的研究热点之一. 基于磁性微球分离和富集的方法, 建立了一种新型的无标记化学发光检测技术, 并成功地应用于特定序列DNA——端粒的检测. 首先采用dT₂₀修饰的磁性微球, 与连接有dA₂₀的捕获探针DNA杂交, 然后再与端粒进行第二步杂交反应. 磁性分离洗涤后, 利用端粒中富含的G碱基与3,4,5-三甲氧基苯乙二醛反应产生特异性化学发光, 从而实现特定序列 DNA——端粒的无标记检测. 实验结果表明: 该法具有操作简便、分析快速、灵敏度高、专属性好等特点. 目标DNA浓度在5×10^－9～1×10^－7 mol/L浓度范围内具有良好的线性关系, 相关系数为0.9918.     

吲哚并喹啉衍生物与G-四链体相互作用的分子模拟研究

G-四链体是富含鸟嘌呤碱基的DNA序列通过氢键相互作用形成的四链螺旋结构. 通过小分子化合物诱导与稳定端粒G-四链体从而抑制端粒酶活性是一种新的抗癌策略. 为了研究一系列吲哚并喹啉衍生物与端粒G-四链体的相互作用, 探究其相互作用模式, 从而为实现基于G-四链体结构的药物合理设计提供依据, 使用分子对接的方法构建了吲哚并喹啉衍生物与G-四链体复合物结构, 在此基础上进行分子动力学模拟, 并使用线性相互作用能(LIE)方法计算了化合物与G-四链体的结合自由能. 结果表明: 化合物与G-四链体的主要相互作用方式由氢键、静电与π-π堆积作用构成, 侧链末端基团类型和侧链的长短是影响相互作用强弱的重要因素. 通过LIE方法计算的结合自由能与实验结果基本吻合, 相关度达到r²＝0.79. 并且, 基于预测的结合模式, 总结了拥有更高活性的新型吲哚并喹啉衍生物应具有的几个结构特征.     

On the Proper Normalization Constraint

In the variational optimization of a trial function the proper functional to be varied is the Rayleigh quotient with the normalization constraint explicitly imposed. It will be shown that only under certain very rigorous conditions can one use the energy functional to replace the Rayleigh quotient and that, therefore, the normalization constraint is by no means a matter of no consequence.     

A comparative study by AM1, PM3 and ab initio HF/3-21G methods on the structure and reactivity of monosubstituted carbanion 1,2,4-triazolium ylides

A full conformational analysis of six 1,2,4-monosubstituted carbanion 1,2,4-triazolium ylides 4 a–f was performed using AM1, PM3 and HF/3-21G methods. The C-type conformers were found as the most stable structures by these different methods. This study also includes a qualitative estimation of the chemical behavior of triazolium ylides 4 a–f as nucleophilic agents on the level of ylide carbon atoms. The ab initio 3-21G method seems to be the most suitable in the characterization of these molecular systems.     

气相色谱叠加定量方法的研究

叠加法是由内标法衍生而来的一种气相色谱定量方法。对于较复杂混合物的分析,当选择内标物困难时,用叠加法定量更为方便。本文在大量实验的基础上,提出了叠加法定量过程中应注意的一些问题。     

四种方法合成单一手性聚苯胺纳米纤维研究

以过硫酸铵或2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌（DDQ）为氧化剂,单一手性樟脑磺酸作为诱导酸及掺杂剂,在有机溶剂、水-有机溶剂和水溶剂体系中,采用四种不同方法分别进行了单一手性聚苯胺纳米纤维合成研究。通过扫描电子显微镜（SEM）、紫外可见光谱（UV-VIS）、X射线衍射（XRD）和圆二色谱（CD）等手段对自组装法、界面聚合法、低聚物辅助法与二次掺杂法等四种方法制备得到聚苯胺纳米纤维的形貌、结构及光学活性进行表征,对比分析后发现四种方法合成的掺杂态聚苯胺纳米纤维形貌、结构相似,但溶剂体系会影响最终产物的光学活性：水溶剂、有机溶剂体系中,得到的聚苯胺纳米纤维光学活性相反。     

单原子催化剂合成方法

单原子催化剂作为一种原子尺度的催化剂,在制氢、CO氧化及光催化等领域均具有广阔的应用前景。大量实验结果和理论计算证实了金属单原子和载体之间的相互作用,及由两者之间电荷转移引起的电子结构改变是单原子催化剂具有高的选择性和催化活性的主要原因。本文着重综述了近年来共沉淀法、化学还原法及浸渍法所制备单原子催化剂的催化性能,并进行展望。     

Scattering dilution method in Fourier transform infrared spectrometry

For the measurement methods of powder samples or muddy samples using infrared spectrometry, we proposed the scattering dilution method and scattering filter method. In our methods, the fabricating pellets are made by pressing mixed alkali halide powders (KBr/CsI). That is why the dilution powder's (KBr/CsI powders') packing ratio becomes almost 100%, thus giving the pellets a sufficient scattering effect. These methods have novel advantages versus transmission or diffuse reflectance methods although our proposal has much criticism and negative comments.     

The Thermal Decomposition of Triple-Base Propellants

The thermal decompositions of a double-base propellant (DB), five triple-base propellants (TB) and nitroguanidine (NGV) were examined. The kinetic parameters were evaluated using the ASTM, Kissinger, Rogers-Morris, Freeman-Carroll and Borchardt-Daniels methods. The values of the orders of some of the chemical reactions (n), like some values of activation energies (E_a), do not have any physical meaning, but they represent the manner of propellant decomposition and prove that the mechanism of the reaction changes during the decomposition process. As a result of this fact, differences appear in the evaluated kinetic parameters between various methods. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

介孔沸石分子筛的制备

介孔沸石分子筛是一种含有丰富介孔的结晶沸石,它不同于介孔分子筛和微孔沸石的简单机械混合。它不仅具备微孔沸石高的热和水热稳定性、优异的选择性和活性,而且由于介孔的引入改善了其对大分子的吸附和扩散性能,逐渐成为多孔催化材料研究领域的热点。本文主要从模板法、后处理法和前驱体组装法等方法出发,介绍了介孔沸石分子筛最新的制备方法研究进展。通过对比不同制备方法的优缺点,指出各种方法的改进方向,以期寻求一种较优的合成策略,以满足现今催化领域日益苛刻的要求。     

物理化学理论体系中的几种基本研究方法

理想模型化法、标准状态法、可逆过程极值法和微元法是物理化学中具有典型学科特征的基本理论研究方法,在物理化学理论体系的形成和发展过程中相应形成并贯穿整个学科。本文从科学方法论的角度,归纳总结了四种理论研究方法的研究目的、处理方法及相应规定和结论,并对它们在物理化学理论体系中的具体应用通过实例予以分析和说明。同时阐述了如果掌握并深刻领会了这些科学研究方法,将有助于学习者构建物理化学宏观知识体系,培养逻辑思维能力,增强分析问题和解决问题能力。     

苯甲酰丙酮存在下含水体系中合成二茂钛取代水杨酸配合物

Four titanocene complexes were prepared in aqueous or two-phase medium by the reaction of benzoylacetone titanocene with substituted salicylic acid, respectively. Based on the UV-Vis spectra, we studied the accelerating effect of the benzoylacetone on the reaction rate quantificationally. The results demonstrated that the presence of it not only stabilizes the “Cp₂Ti” species and accordingly makes pH value of the aqueous solution of substituted salicylic acid increased but also prompts the reaction due to the presence of its conjugation structure and oleophyllic group. Furthermore, the presence of benzoylacetone is in favor of the simplification of the products.