蛋白质组学方法研究葡萄糖对人血清白蛋白的修饰作用

晚期糖基化终产物是一组由不同种类物质组成的复杂混合物,其与很多疾病相关,如糖尿病及其并发症、肾衰竭以及与老龄化相关等疾病.人血清白蛋白(HSA)是血清中含量最丰富的蛋白质.葡萄糖对血液中的HSA和其它蛋白质的结构具有修饰作用,发生糖基化反应.本文利用LC/MS联用技术,通过蛋白质组学方法,寻找差异肽段,研究糖基化HSA的修饰位点以及修饰种类,对于进一步寻找临床诊断糖尿病以及与老龄化相关疾病的肽类生物标志物具有重要意义.     

烟酸修饰尾式卟啉的合成及其与人血清白蛋白的相互作用

合成了烟酸分子修饰的自由卟啉o-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PP、p-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PP及锌配合物o-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PPZn、p-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PPZn.经元素分析、紫外-可见光谱、核磁共振氢谱(1HNMR)、红外(IR)光谱等对结构进行了表征,并通过量子化学方法计算了锌卟啉的最低能量构型.实验结果表明:o-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PPZn中侧链烟酸基团处于卟啉环上方,烟酸基团中N原子与卟啉环中Zn2+存在着Zn―N间的分子内配位作用,而p-(niacin)C2O-T(3p-OCH3)PPZn中侧链烟酸基团处于卟啉环较远的位置,一个锌卟啉的中心Zn2+与另一个锌卟啉烟酸中N原子之间存在着Zn―N间的分子间配位作用.同时,为模拟金属卟啉的生物功能,采用荧光光谱滴定法测定了金属锌卟啉与人血清白蛋白相互作用的光谱性质.荧光光谱实验结果显示:金属锌卟啉与人血清白蛋白(HSA)之间发生了较强的静态荧光猝灭作用,反应机理是以氢键或van der Waals力结合反应.按照Stern-Volmer方程、Lineweaver-Burk双倒数方程分析和处理实验数据,得到了反应的猝灭常数、结合常数和热力学参数等.     

小檗碱与人血清白蛋白结合的电喷雾离子阱质谱研究

以小檗碱与人血清白蛋白间的非共价结合作用为例,提出了一种应用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)研究蛋白-配体非共价结合稳定常数与结合计量比等特性的新方法。根据小檗碱与人血清白蛋白间的ESI-ITMS滴定实验结果,小檗碱与人血清白蛋白形成复合物的最大表观化学结合计量比为4.4∶1;根据ESI-ITMS滴定实验结果的Scatchard方程分析,小檗碱-人血清白蛋白复合物的表观稳定常数K值为1.29×105L/mol,结合位点数n为5.1;根据作用温度对复合物热力学常数△H、△S的影响,确定小檗碱与人血清白蛋白间的作用力主要为疏水作用力。实验结果与应用荧光法得到的结果基本一致。     

改良的分光光度法测定血清缺血修饰白蛋白

目的建立改良的分光光度法测定血清缺血修饰白蛋白。方法为通过确定试剂中的各成分的含量、缓冲体系、抗干扰体系以及抗氧化体系等关键技术的解决,建立改良钴-白蛋白结合测试法测定血清IMA。结果该法测定的血清缺血修饰白蛋白,线性范围为0~180 U/m L,平均回收率为99.3%,批内变异系数和批间变异系数分别为1.17%~3.11%和2.15%~4.21%,准确性和重复性较好,线性回归方程为y=0.986 7 x+0.4,相关系数为r=0.999 3。结论用该文建立的方法测定血清IMA含量,具有测定简便、灵敏度高等特点,适合推广应用。     

离心超滤质谱筛选川乌中与人血清白蛋白相互作用的乌头类生物碱

采用离心超滤质谱技术从川乌总生物碱提取物中筛选与人血清白蛋白相互作用的乌头类生物碱成分,并用LC-MSn技术对筛选出的活性成分进行了分离鉴定.结果表明,从川乌总生物碱中筛选并鉴定出9种与人血清白蛋白存在相互作用的乌头类生物碱:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、10-OH-中乌头碱、中乌头碱、10-OH-乌头碱、乌头碱、次乌头碱、脱氧乌头碱和3,13-脱氧乌头碱.     

测定人血清白蛋白的电化学研究及分析应用

以电化学方法研究了pH 3.2的Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液中变色酸2R与蛋白质的相互作用。变色酸2R在-0.43 V(vs.SCE)有1个良好的极谱还原峰,加入人血清白蛋白(HSA)后,其峰电位不变而峰电流下降。峰电流的下降值同HSA的浓度在(1.5~30.0)×10-8moL/L范围内呈线性关系,其线性方程为ΔIp″(nA)=-338.38+191.9c(moL.L-1),r=0.997。应用于实际人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G_250光度法一致。由实验结果求得人血清白蛋白和变色酸2R的结合比为1∶3,结合常数K为1.55×105。     

茜素红S光度法测定人血清白蛋白

１引言人体血液中的白蛋白是形成血浆胶渗压的主要成分，它在维持体液的正常分布，以及保持血容量及血压等方面起重要作用。同时，血浆白蛋白对人体具有营养作用。已有报道将它作为人体营养健康和疾病诊断、疗效观察的重要指标及资料数据。分析、测定、研究血浆中白蛋白的含量，对人体健康和生命科学的研究可提供重要的科学依据和研究价值。２实验部分２．１仪器与试剂ＵＶ－２６５分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；７２４微机型分光光度计（上海光学仪器厂）；８２１型ｐＨ计（中山大学电子厂）。茜素红Ｓ（ＡＲＳ）５．０×１０－４ｍｏｌ…     

线性扫描伏安法测定人血清白蛋白

建立了一种测定人血清白蛋白的新方法。应用线性扫描伏安法研究了灿烂甲酚蓝(BCB)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用的条件,当BCB与HSA作用后,其峰电流下降且峰电位负移,峰电流的下降值的二阶导数(ΔI″p)同HSA的质量浓度在2.0~60.0 mg.L-1范围内呈线性关系,相关系数为0.9970。方法的检出限为2.0 mg.L-1,用于健康人血清样品的测定,回收率在95.6%~107.5%之间。     

防腐剂苯甲酸与人血清白蛋白相互作用

为研究食品防腐剂苯甲酸在人体内的转运和降解机制,在人体血液的生理条件下运用荧光光谱法和分子对接、分子动力学模拟和丙氨酸突变扫描等方法研究了苯甲酸与人血清白蛋白(Human Serum Albumin, HSA)相互作用机理。结果表明:苯甲酸和HSA的结合为静态猝灭过程,不同条件下结合常数K_A均大于1.0×10⁴ L/mol,结合位点数约为1,结合位点为Site II;根据Van′t Hoff方程和分子动力学模拟发现两者结合主要促进作用力是静电作用力,抑制力是极性溶剂化能,且是自由能降低的自发反应;分子对接结果显示复合物中苯甲酸与ARG186形成1个氢键,丙氨酸突变扫描计算显示ASP108、GLN425和GLV459是结合的关键氨基酸。     

洛美沙星与人血清白蛋白的相互作用机理

利用荧光及紫外光谱法研究了水溶液中洛美沙星(LMX)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用机理. 结果表明洛美沙星对人血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用, 其猝灭类型主要为静态猝灭. 在不同温度下求得了洛美沙星与人血清白蛋白的结合常数K, 发现随反应温度上升K值下降. 由热力学参数确定了洛美沙星与人血清白蛋白的结合作用主要为色散力. 用同步荧光技术考察了洛美沙星对人血清白蛋白构象的影响, 又根据Fōrster理论, 测得了洛美沙星与人血清白蛋白之间的能量转移效率, 相互结合距离. 进一步证明了该反应是单一静态猝灭过程, 阐述了其猝灭机理是通过能量转移产生的.     

MALDI－TOF－MS法分析人血清白蛋白

用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）法分析测定了人血清白蛋白。结果表明，全军血液制品研究中心应用Ｒｉｖａｎｏｌ和Ｃｏｈｎ＇ｓ两种方法分离提取的人血清白蛋白，其分子量与理论计算值相吻合，其纯度与市售标准人血清白蛋白相一致，用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ法分析鉴定人血清白蛋白，准确、简便和灵敏（仅需ＰＭ浓度样品），且重复性好，日内和日间差的变异系数均小于０．０３％，是ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳法所无法比拟的。     

应用电喷雾质谱研究七叶皂苷钠与人血清白蛋白间的非共价结合特性

采用电喷雾离子阱质谱研究了七叶皂苷钠(SA)与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。研究结果表明,七叶皂苷钠与人血清白蛋白形成的复合物的稳定常数K为6.18×104mol/L,最大表观化学结合计量比为5∶1。考察了进样液pH值以及质谱仪毛细管温度、锥孔电压对药物与蛋白质相互作用的影响,以及根据温度变化对复合物热力学常数ΔH、ΔS的影响。实验结果表明,七叶皂苷钠与人血清白蛋白间的作用力主要为疏水作用。     

Characterization of Metallo-Supramolecular Systems by MALDI-TOF Mass Spectrometry

MALDI-TOF mass spectrometry was used for the characterization of metallo-supramolecular coordination arrays with molecular weights between 500 and 4000 g/mol. The stepwise loss of the counterions was used as an additional fingerprint for the investigated species. The isotope pattern yielded further information, especially in combination with simulations.     

以Nafion修饰的镀铂玻碳电极为基底的半乳糖传感器的制备

在镀铂的玻碳电极表面,修饰一层全氟代磺酸酯(Nafion)膜,制成基底电极。用化学交联法将半乳糖氧化酶(GAD)固定在基底电极表面,即制成半乳糖传感器。和光亮铂相比,镀铂电极对过氧化氢有更高的响应,而Nafion膜可以消除抗坏血酸,尿酸等电活性物质对测定的影响,提高了酶电极测定的选择性。D-半乳糖测定的线性范围为0.25～4.25 mmol/L,响应时间小于30s。电极连续使用300次,没有明显的电流变化。该电极具有快速、准确,选择性高的特点。     

高效液相色谱串联质谱法测定血清中内美通

研究了高效液相色谱串联质谱联用测定人血清中内美通的方法。用乙醚提取血清中的内美通,米非斯酮做内标,电喷雾离子化,选择内美勇母、子离子对m/z309-m/z241;内标的母、子离对对m/z430-m/z372;串联质谱采用多反应扫描监测方法,定量测定人血清的内美通。该方法测定速度快,灵敏度高,选择性好。方法的标准曲线线性范围3.5-177μg/L（r^2=-0.999);检出限0.8μg/L;进行6次平行测定,日间RSD=2.3%-13.7%,RD=4.8%-3.0%;日内RSD=5.5%-14.8%,RE=3.1%-6.7%;回收率内美通是91.0%,内标米非斯酮是90.6%。4min完成一个样品测定。     

Possibilities of Mass Spectrometry and Tandem-Mass Spectrometry in the Analysis of Cellulose Ethers

The investigation of the substituent pattern of cellulose and starch ethers and esters on various structural levels as in the glucosyl unit, along the polymer chain, and over the polymer molecules, still is a very challenging task. By means of mass spectrometric methods as ESI-MS or MALDI-TOF-MS the composition of oligosaccharide mixtures which represent the substituent distribution in the original polymer can principally be determined. However, to obtain reliable quantitative data mass spectra must be recorded under appropriate instrumental conditions and after special sample preparation While O-methyl/O-methyl-d₃-oligosaccharides give representative data with the mentioned MS techniques and FAB-MS as well, hydroxyalkyl ethers require labelling with a quaternary ammonium tag and MALDI-TOF-MS to prevent discrimination of lower substituted oligosaccharides. In this way, information on the neighbourhood of glucosyl units in the polymer chain is available which – together with the monomer composition – is a valuable parameter to describe a random or a heterogeneous pattern with regions of local higher densities of substituents compared to the random model, a regular distribution, or a block-like substituent pattern, i.e. a more clustered localisation of substiuents in the polymer chain. In addition, tandem-mass spectrometry (ESI-MSⁿ) allows to gain further insight in the composition of isomeric oligosaccharide derivatives of the same m/z ratio and to calculate the complete monomer composition of methyl celluloses.     

Characterization of Galactosyl-neoglycoalbumin~1 by MALDI-TOF-MS

It was reported there was a membrane receptor, hepatic binding protein (HBP), which resides only at the cell surface of mammalian hepatocytes, selectively bind galactose- terminated glycoprotein for transporting to hepatic lysosomes1. According to this discovery, a special analog ligand, galactosyl-neoglycoalbumin(NGA), was prepared as hepatic targeting drug carrier and hepatic screening agents. The ligand was synthesized by covalent coupling of carbohydate bifunctional reagent, 2-imino-2-et…     

化学改性纤维素亲和膜色谱用作人血清白蛋白中杂质的去除

用环氧法对纤维素微孔滤膜进行了化学改性，并在经改性的膜上共价结合了活性红染料配基Ｋ－２ＢＰ，设计并制作了特殊的膜分离器，利用所制备的亲和膜分离器成功地去除了人血清白蛋白中的杂质。