稻瘟病菌限制酶介导整合(REMI)转化的致病性诱变

应用提高直菌转化率的技术－限制酶介质整合（restriction enzyme mediated integration,REMI)技术转化稻瘟病菌株Magnaporthe grisea131原生质体，在限制酶HindIII,KpnI介质下转化效率化效率分别提高6.5,10,3.7倍，通过300μg/mL潮霉素筛选获得1000个以上转化子，用突变体接种水稻鉴别品种，发现其中M25和M36与M131比较其致病性发生了改变，另外还发现产孢缺陷型变体和培养性状发生改变的突变菌株，rep-RCR试验表明REMI突变菌株由于质粒插入而与M131指纹有差异。     

稻瘟菌致病性变异突变体的筛选及共分离分析

通过筛选稻瘟菌(Magnaporthe grisea)P131小种的REMI(Restriction Enzyme MediatedIntegration)转化体库获得对水稻品种梅雨明致病性变异的突变体,命名为PX1.与野生型菌株P131相比,该突变体对水稻品种梅雨明致病性丧失,在洋葱表皮上侵染钉形成率显著降低,而孢子萌发率和附着胞形成率差异不显著.遗传分析表明,该突变体的突变表型和潮霉素抗性标记共分离,说明突变是由于外源质粒插入引起的,因此,可以此为标记克隆控制该表型的基因.     

贵州省稻瘟病菌对春雷霉素和稻瘟灵的抗药性监测

采用生长速率法分别测定2013年从贵州省不同3个稻区分离的30个稻瘟病菌株,并测定分离出的菌株对稻瘟灵与春雷霉素的敏感性及抗药性水平。实验结果表明:春雷霉素、稻瘟灵对供试30个稻瘟病菌株的EC50值范围分别为1.60⁶.42μg/mL,1.936.42μg/mL,1.93⁶.26μg/mL,其平均值分别为3.69μg/mL,3.54μg/mL,且敏感菌株都为30个,都没有抗性菌株,表明贵州省稻瘟病菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性均表现为较低水平。从菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性分析表明贵州省稻瘟病菌对春雷霉素与稻瘟灵未产生交互抗药性或多抗性。     

稻瘟菌产孢和生长基因的鉴定

利用稻瘟菌131株系的一个突变体H6鉴定出一个控制产孢和生长的基因,突变表型测定结果表明H6为产孢缺陷兼生长缓慢型突变体。Southern 分析表明,此突变是由转化质粒单拷贝插入的结果。将H6与相反交配型蓖株1528有性杂交,分离出21个子囊孢子,突变表型与野生表型比例为1：1,表明此突变表型由单基因控制,潮霉素,抗性与突变表型共分离表明外源质粒手稿到基因的编码区,通过质粒拯求获得插入位点侧翼基因组序列,部分测序和同源性比较显示其与其他已经报道的基因没有同源性。     

泸州杂交水稻稻瘟病菌生理小种变化品种抗稻瘟性鉴定

对近年来泸州稻瘟病生理小种的变化及50个生产应用的杂交稻组合的抗病性进行了监测,结果表明：泸州稻瘟病菌生理小种组成以ZA及ZB群为主,从2004年起ZA群呈逐年上升趋势;ZA群的毒力频率高于ZB群;稻瘟病常发区稻瘟病菌生理小种组成比非常发区更复杂,致病力更强;供试50个杂交稻中,有17个组合的抗病频率在50％以上,占34．0％,其中,抗病频率在70％以上的组合仅有4个;中、高抗颈瘟的组合19个,占38．0％,其中,高抗颈瘟的组合有川香8号、内香优1号、内香优3号、冈优94—14、Q优5号．最后根据研究结果提出了今后泸州稻瘟病防控策略．     

抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系的建立

以稻瘟病菌粗毒素提取液为选择压,选取籼稻材料缙2B、缙恢36和缙恢10进行抗稻瘟病突变体的筛选．结果表明：1）在成熟胚诱导产生愈伤组织过程中,2,4-D是诱导愈伤的关键因子,3种材料在附加2mg／L2,4-D的NB培养基（NBD2）上诱导产生的愈伤较好．2）粗毒素对3种材料的胚根、胚芽、愈伤组织的生长都有着明显的抑制作用,表明粗毒素具有一定的致病力,其毒性并不与浓度完全成正比关系,而是在一定范围内随浓度的增加而增加．在毒素浓度为45％时,缙2B胚根和胚芽生长受到抑制的程度最大,而缙恢36和缙恢10则在30％浓度中生长受到明显抑制．3）粗毒素对3种材料的愈伤组织成活率及再生频率有着明显的抑制作用,其程度随浓度的增加而增大,当稻瘟病粗毒素浓度为60％时,愈伤组织不生长,并变褐死亡,最终选择45％的毒素浓度进行2次继代抗性筛选并获得再生植株．     

限制性内切酶介导的整合技术

限制性内切酶介导的整合技术是近年发展起来的一种研究基因的新方法,与质粒拯救相结合,可快速分离质粒两侧的DNA序列,进而对该序列做进一步分析和研究．该技术已应用于基因突变、基因标记、寻找新基因等研究领域．本文重点介绍了限制性内切酶介导的整合技术的原理、影响因素及应用现状．     

基于荧光标记双向筛选的拟南芥CRISPR基因编辑突变体库构建

突变体库是研究基因功能的重要工具。拟南芥种质资源库(ABRC)储藏了几乎涵盖所有基因的突变体材料,其中T-DNA插入突变体占绝大多数。然而,当在T-DNA插入突变体中进行遗传转化或与其他转基因报告系统进行杂交时容易引起转基因沉默,阻碍了相关研究的开展,甚至产生错误结论。甲基磺酸乙酯(Ethyl Methane Sulfonate, EMS)诱变和快中子诱变技术可获得非转基因突变体,但这两种方法均为随机诱变技术,需要通过基因定位来确认突变位点,无法实现基因靶向敲除。CRISPR/Cas9可以对目的基因进行靶向编辑,获得不携带转基因的突变体。拟南芥中尚无利用CRISPR/Cas9进行高通量突变体库构建的报道。本研究共设计900条sgRNAs靶向300个RNA通路相关基因,通过合成sgRNA混池文库、引入DsRed2荧光筛选标记、将DNA条形码和二代测序技术相结合,实现了对转基因阳性苗的高通量鉴定和分型,并对T2代具有发育缺陷的无荧光植株进行负向筛选,成功鉴定到了不含转基因的smd3-b和rlua4突变体。     

应用溴甲酚紫指示剂检测贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性

采用加溴甲酚紫生长速率抑制法测定采自于贵州省的63个稻瘟病菌株对稻瘟灵的敏感性.结果表明:稻瘟灵作用一定时间后,在含有指示剂和稻瘟灵的培养基中稻瘟病菌饼周围呈现的颜色跟稻瘟灵的浓度有一定的关系,在4μg·mL-1以下呈现出紫色且颜色的深浅随着稻瘟灵浓度的增加而逐渐变淡,4μg·mL-1处呈现橙红色,此浓度下稻瘟灵对稻瘟病菌的抑制率可达到80%左右.贵州省三地稻瘟病菌对稻瘟灵的EC50值为1.41~6.26μg·mL-1,稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感基线定为3.283 33μg·mL-1,大部分稻区的稻瘟病菌株均表现为敏感或低抗水平,同时三地稻瘟病菌对稻瘟灵的抗性水平存在一定程度上的时空差异.     

稻瘟病抗性基因Pi36的表达分析

为研究稻瘟病抗性基因Pi36的表达模式,利用半定量RT-PCR对抗病亲本Kasalath和感病亲本丽江新团黑谷(LTH)进行了接种前和接种后24 h和48 h的表达分析.结果表明:Pi36无论在接种前还是接种后以及无论在抗病亲本Kasalath还是感病亲本LTH中均有表达,并且各个时间段的表达量没有大的差别.由此说明,Pi36属于组成型而不是诱导型表达的基因.     

利用限制性内切酶技术获得木霉菌插入变异

利用限制性内切酶介导整合（REMI）技术,通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病（Botrytis cinerea）效果优于初发菌Trichoderma viride T21菌株（初发菌）的3个变异株Ttrm31、Ttrm34和Ttrm55．变异株本身产生的和诱导番茄植株产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均比初发菌高,因此,通过REMI技术可以获得新的有益变异株,在一定程度上提高了生物菌株防治番茄灰霉病的水平,尤其是提高诱导番茄抗病水平．对侵染花器和叶片的灰霉病防效分别比原生物防治木霉菌株提高了16．9％和89／6,说明REMI技术可以用于改良生防木霉菌株的功能,提高生物防治效果．     

抗稻瘟病水稻BAC文库的构建与鉴定

水稻是一种重要的粮食作物,同时也是一种重要的单子叶植物模式.稻瘟病是水稻生长中的一种严重病害,因此分离和克隆新的稻瘟病抗病基因具有重要的应用价值.以一个抗稻瘟病农家种水稻为材料,以plndigoBAC5为载体,构建了细菌人工染色体（BAC）文库.该文库共有90 000个转化子,插入频率99％,插入片段平均长度为105 kb,由此推测这个文库覆盖水稻基因组约20倍.利用其中的45 000个转化子建立了4维PCR筛选体系,并且通过4维PCR筛选体系,筛选获得了7个含水稻分蘖基因（MOC1）的阳性克隆.因此该文库是一个高质量、高覆盖率的水稻BAC文库,能有效用于目的基因的分离.     

水稻稻瘟病SIRS模型研究

建立了具有常数迁入的SIRS稻瘟病模型,分析了模型有界解的稳定性,发现具有常数迁入的SIRS稻瘟病模型的每一个有界解都趋于稳定集.     

浅论我国数字图书馆建设的标准化

从数字图书馆定义入手，分析了我国数字图书馆发展现状，进而在阐述标准化对数字图书馆建设的重要意义的基础上，提出了数字图书馆标准化建设的主要内容以及我国数字图书馆标准化建设的方法与策略。     

构建学习型图书馆

简要阐述了学习型图书馆的概念,论述了构建学习型图书馆的必要性,提出了构建学习型图书馆的措施与途径。     

浅谈绿色图书馆建设

阐述了时代对于建设绿色图书馆的迫切要求,并对绿色图书馆的特征、功能及实现方式进行了探讨,指出图书馆的"绿色化"与"虚拟化""数字化"并不矛盾。     

图书馆RFID系统模型构建研究

随着信息技术的发展,RFID技术使图书馆实现了大流通模式,极大地节省了人力资源,拓展了图书馆的功能,以RFID技术为基础的图书RFID系统架构已成为现代先进图书馆平台建设的发展趋势。本文基于RFID技术平台,以福州职业技术学院图书馆为例,详细阐述了RFID系统的构建目标、基本思路、系统运作功能以及其应用效果评估,并提供了科学数据,印证了RFID技术在现代图书馆平台建设中美好的应用前景。     

数字图书馆FAQ服务的探讨

探讨了在数字图书馆中逐渐普及FAQ服务的意义 .通过对国内部分图书馆主页的访问调查 ,剖析了目前国内的数字图书馆FAQ服务存在的问题 ,如缺乏对用户的深入研究 ,缺乏对问题的分析选择 ,还有设计上存在的问题等 .主张要在充分研究用户的心理和行为的基础上开发和开展FAQ服务 ,并对FAQ的开发步骤做了简要的介绍     

高校复合图书馆建设之探讨

阐明了复合图书馆的概念,探讨了高校图书馆向复合图书馆转变的必然性,论述了复合图书馆建设的主要内容,指出了高校复合图书馆建设中遇到的障碍。