ELMO3在结肠癌组织中的表达

为了检测吞噬和运动蛋白家族中的ELMO3在结肠癌组织中的表达情况,并探讨其与结肠癌临床病理参数间的相关性及意义,本研究应用免疫组化法检测了组织芯片中75例结肠癌及相匹配的癌旁正常结肠组织中ELMO3蛋白的表达水平。结果显示,ELMO3在结肠癌组织中的阳性表达率显著高于对应的癌旁组织(P<0.001);不同性别、年龄和肿瘤部位的ELMO3表达水平均无显著性差异(P>0.05);不同肿瘤大小、结肠癌分化程度、浸润深度和远处转移的结肠癌组织中的ELMO3表达水平存在显著性差异(P<0.05)。且ELMO3的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床TNM分期均呈正相关性(R=0.386、R=0.608和R=0.760,P<0.05),即随着肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床分期的增高,ELMO3的表达水平也增高。尤其是ELMO3在发生淋巴结转移的结肠癌组织中细胞染色强度显著高于未发生淋巴结转移的结肠癌组织中细胞染色强度,其差异具有统计学意义(P<0.05)。这些结果表明,ELMO3在结肠癌组织中高表达,其表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床TNM分期相关,提示ELMO3表达水平与结肠癌生物学行为密切相关,有望成为结肠癌侵袭转移治疗的有效靶点。     

喉癌患者血浆及组织中长链非编码RNA的检测及临床意义

为研究长链非编码RNA(Long non-coding RNA,Lnc RNA)RP11-552E20.1-001在喉鳞状细胞癌患者血浆和组织中的表达水平及临床价值,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法,检测67例喉癌患者手术前后一周的血浆,以声带息肉患者血浆作对照,观察喉癌组织、转移的淋巴结和癌旁正常黏膜组织的表达情况,分析其与喉癌临床病理学特征的联系,构建受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC),探讨其诊断价值.研究发现,喉癌患者血浆Lnc RNA表达水平高于声带息肉患者,且术后较术前显著降低;喉癌组织中该链表达较癌旁组织上调,转移的淋巴结比原发病灶表达水平更高;术前血浆及喉癌组织中该链表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期显著相关.ROC曲线下面积为0.734,其敏感性为80.6%,特异性为67.2%.提示该Lnc RNA可能是喉癌诊断的潜在标记物,并在喉癌的侵袭、转移过程中起重要作用.     

重组溶瘤单纯疱疹病毒抑制小鼠结肠癌肺转移瘤的实验研究

探讨携载p53和IL-12的重组溶瘤单纯疱疹病毒(Oncolytic Herpes Simplex Virus-1,oHSV) MH1004和MH1006对小鼠结肠癌皮下移植瘤和肺转移瘤的治疗作用.蚀斑法和MTT法分析重组oHSV对结肠癌细胞CT26的感染和溶瘤特性;小鼠背部皮下注射CT26建立皮下移植瘤模型,瘤内注射重组oHSV后分析小鼠血清中IL-12含量,观察肿瘤大小和小鼠生存率;小鼠尾静脉注射CT26建立肺转移模型,尾静脉注射重组oHSV后显微观察肺组织中肿瘤细胞浸润,观察肺脏肿瘤结节和小鼠生存率.重组oHSV能够感染CT26并高效复制和抑制肿瘤细胞.皮下移植瘤小鼠治疗12 d后观察到抑瘤效应,MH1004和MH1006组21 d时肿瘤体积(2 477.31±2 017.02 mm~3和1 414.36±1 639.19 mm~3)均极显著小于Mock组(7 682.92±2 648.74 mm~3)(P 0.01),42 d时生存率(均为100%)明显高于HSV-wt和Mock组(均为50%);MH1006组小鼠血清中IL-12含量增加,第16 d时极显著高于Mock组(P 0.01);治疗后肿瘤消失小鼠血清中IL-12含量明显增高.肺转移瘤小鼠治疗后,MH1004和MH1006组小鼠肺脏肿瘤结节数在治疗5 d、9 d和13 d时均极显著低于Mock组(P 0.01),13 d极显著低于HSV-wt组(P 0.01),且o HSV治疗小鼠肺组织浸润的肿瘤细胞明显减少;60 d时MH1004组、MH1006组、HSV-wt组和Mock组的生存率依次为83.3%、66.7%、66.7%和50%,MH1004组和MH1006组死亡小鼠肺脏肿瘤结节少于Mock组和HSV-wt组.携载IL-12和p53的重组o HSV经尾静脉注射治疗小鼠结肠癌肺转移瘤效果显著,该研究为转移瘤治疗提供了新的思路.     

人乳头瘤病毒16及18型E6与p53表达的关系

采用 SP免疫组织化学方法 ,比较了 6 8例宫颈癌组织中 HPV- 16、18E6和 p5 3蛋白的表达及其相互关系 .结果表明 ,6 8例宫颈癌中有 6 0例 HPV - 16、18E6蛋白和 17例 p5 3蛋白呈阳性表达 ,阳性率分别为 88.2 %和2 5 .0 % ;在 5 9例 HPV- 16、18E6蛋白过度表达的宫颈癌中有 5 4例 p5 3蛋白为阴性或弱阳性表达 ,二者呈负相关(P <0 .0 1) .p5 3蛋白阳性表达与组织学类型有关 ,其阳性率在宫颈腺癌中为 83.3%和宫颈鳞癌中为 17.2 % ,差异有极显著意义 (P <0 .0 1) .p5 3蛋白阳性表达随着临床分期上升而增高 .     

RAD51C蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义

探讨RAD51C蛋白在人卵巢癌组织中的表达情况及临床意义。运用免疫组化方法分别检测RAD51C蛋白在恶性卵巢肿瘤52例(高级别浆液性卵巢癌30例、粘液性卵巢癌22例)和良性卵巢肿瘤50例(浆液性囊腺瘤25例、粘液性囊腺瘤各25例)组织中表达情况,比较良恶性卵巢肿瘤、不同临床分期及不同病理类型的恶性卵巢肿瘤之间RAD51C蛋白的表达差异,分析RAD51C蛋白表达与卵巢癌的的发生发展及预后的相关性。结果显示RAD51C蛋白主要在细胞浆中表达,细胞核中表达不明显,RAD51C蛋白的表达与年龄无明显相关性,RAD51C蛋白表达在恶性卵巢肿瘤高于良性卵巢肿瘤组织中的表达(P<0.05),在恶性卵巢肿瘤组织中,RAD51C蛋白表达与病理类型、临床分期及预后有关(P<0.05)。提示RAD51C蛋白在卵巢癌组织中高表达,可能在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。     

TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨

探讨TEAD4表达与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系。用免疫组化MaxVision法结合光密度分析检测目标蛋白的组织表达。通过真核表达质粒pCMV3-TEAD4转染子宫颈鳞癌SiHa细胞以获得TEAD4基因过表达;应用Western blotting法检测细胞中目标蛋白的表达。分别利用CCK-8实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖和侵袭能力。子宫颈鳞癌组织中TEAD4平均表达水平(0.186±0.0355)显著高于正常宫颈上皮组(0.0494±0.0105,P<0.001),且TEAD4的表达与子宫颈鳞癌的淋巴结转移、脉管浸润和宫旁浸润有关(P<0.05),与子宫颈鳞癌的患者年龄、肿瘤大小、和分化程度无关。TEAD4的表达与MMP9的表达呈正相关关系(r=0.394,P<0.01)。TEAD4基因转染后的宫颈鳞癌细胞的增殖能力和侵袭能力显著增强。TEAD4基因转染诱导宫颈鳞癌细胞P-ERK1/2和MMP9蛋白表达上调,而ERK抑制剂(U0126)能显著抑制TEAD4诱导的MMP9上调。TEAD4高表达于子宫颈鳞癌,促进子宫颈鳞癌增殖和侵袭能力,其机制可能与TEAD4激活ERK1/2-MMP9信号通路有关。     

人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白His6融合表达及一步纯化

将人γ干扰素 /β肿瘤坏死因子融合蛋白 ( hγTNF-β)重组基因克隆于表达载体 p ET2 8,构建成T7lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E.coli BL 2 1 ( DE3 ) .经 IPTG( 1 m M)诱导表达 ,阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗表达带 ,其分子量 ( 3 2 k Da)与目的蛋白 His6-γ TNF-β)理论分子量相符 .薄层扫描与溶解性分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 4 5%以上 ,主要为不溶性的包涵体( IBs) .离心分离 IBs产物 ,溶于 7M尿素中 ,然后通过 Ni柱进行亲和层析 ,即可获得一步纯化的表达产物(纯度为 96%、回收率为 91 % ) .纯化产物再经复性缓冲液稀释复性 ,其细胞毒比活性与抗病毒比活性分别达到 1 .2× 1 0 7～ 2 .0× 1 0 7u/m gp和 6.6× 1 0 5～ 7.2× 1 0 5u/mgp     

P53蛋白在胃肠道恶性肿瘤切缘组织中表达的临床研究

目的：探讨了以P53蛋白为代表的分子切缘与常规细胞病理切缘的关系以及切除肿瘤各边缘5．0cm的组织是否安全可靠,方法：对49例胃肠道恶性肿瘤的瘤中心组织及肿瘤边缘每隔0．5cm取材至上,下切缘5．0cm处,采用免疫组织化S－P法检测P53蛋白,并对应位点的病理切片相比较,结果：距肿瘤切缘愈远,P53蛋白表达率愈低,P53蛋白阳性表达与细胞病理切缘阳性在各位点上相一致,在胃癌中,上切缘阳性范围不超过2．5cm,下切缘不超过3．0cm;在大肠癌中,上切缘阳性不超过1．0cm,下切缘阳性不超过1．5cm,结论：以P53为代表的分子切缘的概念可补充细胞切缘的概念,两者结合有助于提高病理诊断的准确性和可信度,距胃肠道恶性肿瘤各边缘5．0cm的切缘范围是安全可靠的。     

人γ干扰素 /β 肿瘤坏死因子融合蛋白 His6融合表达及一步纯化

将人 V干扰素 /U肿瘤坏死因子融合蛋白 (hVTNF-U )重组基因克隆于表达载体 pET28,构建成 T7 lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E. coli BL21( DE3).经 IPTG(1mM )诱导表达 , 阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗表达带 ,其分子量 (32kDa) 与目的蛋白 H is6-V TN F-U ) 理论分 子量相符. 薄层扫描与溶解性分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 45% 以上 ,主要为不溶性的包涵体 ( IBs).离心分离 IBs产物 ,溶于 7M尿素中 ,然后通过 Ni柱进行亲和层析 ,即可获得一步纯化的表达产物 (纯度为 96%、回收率为 91% ).纯化产物再经复性缓冲液稀释复性 ,其细胞毒比活性与抗病毒比活性分 别达到 1. 2× 10 7～ 2. 0× 107u /mgp和 6. 6× 10 5 ～ 7. 2× 105 u/mgp.     

结肠癌淋巴转移时细胞间粘附分子(ICAM-1)表达和树突状细胞分布

用ICAM—1(Intercellular adhesion molecule—1)和S—100免疫组织化学技术，Ishigami分级记数和统计学分析方法，研究结肠癌淋巴转移时细胞间粘附分子—1在淋巴管内皮细胞中的表达和树突状细胞(Dendritic cells,DCS)的分布．正常结肠组织淋巴管内皮细胞ICAM—1表达阴性，癌组织淋巴管内皮细胞ICAM—1表达呈阳性．随着癌组织浸润深度的增加，ICAM—1阳性淋巴管数目逐渐增多(P＜0．01)．当肠周淋巴结有癌转移时，ICAM—1阳性淋巴管明显多于无癌转移组(p＜0．01)；与ICAM—1的表达相反，树突状细胞(DCs)局部浸润强度与癌组织浸润深度里负相关(r＝-0．62，p＜0．01)，肠周淋巴结无癌转移组DCs数目多于有淋巴结转移组(p＜0．01)．ICAM—1的表达和DCs的分布与结肠癌的浸润和淋巴转移有密切关系，并对结肠癌的治疗和预后均有重要的临床意义．     

Taura 综合征病毒主要结构蛋白的表达与纯化

根据Taura综合征病毒(TSV)基因组,设计特异性引物,从感染病毒组织中提取组织总RNA后扩增,分别将3个主要结构蛋白基因VP1、VP2和VP3克隆到pGEM TEasyVector.与表达载体连接后,导入大肠杆菌中诱导表达,并纯化目的蛋白.诱导表达的融合蛋白分子量分别为54.2×103、43×103和57.1×103,在变性条件下过柱纯化VP1和VP2,一次可以纯化10mg以上纯度较高的蛋白.     

胃肠道恶性肿瘤及其切缘组织中c—myc基因mRNA和端粒酶活性的表达

探讨胃肠道恶性肿瘤及其切缘组织中c-myc基因mRNA和端粒酶活性表达与手术切缘的安全性关系。方法：用RT－PCR和TRAP方法检测12例胃癌和19例肠癌标本和切缘组织中c-myc基因mRNA和端粒酶活性的表达,结果：（1）胃肠道恶性肿瘤组织中c-myc基因mRNA和端粒酶活性有很高的表达率。（2）肿瘤的上下切缘组织中c-myc基因mRNA和端粒酶活性表达无明显差异。（3）在中心表达阳性的肿瘤中,距中心4厘 上端粒酶均为阴性表达,而c-myc基因mRNA在距4cm处仍有小部分呈阳性表达,5cm处则呈阴性,结论：就c-myc基因mRNA表达和端粒酶活性表达而言,距离肿瘤5cm可定为肿瘤的分子切缘。     

AEs蛋白在心肌细胞急性损伤与保护的差异性表达

以原代培养的SD新生乳鼠心肌细胞为研究对象,建立缺氧/复氧(A/R)损伤和缺氧预适应(APC)保护模型.通过RT-PCR法和Western blot法检测阴离子交换蛋白(AEs)各亚型AE1、AE2和AE3在A/R损伤与APC保护中表达是否存在差异.结果发现,A/R损伤后AE2表达增加,APC可抑制其增加;但AE1和AE3经APC处理后,表达却明显上调;提示:AE2可能参与心肌细胞A/R损伤,AE1和AE3则可能参与了心肌细胞APC的保护作用.     

《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 Vol.10 No.6 2005摘要选登

●抑制PP2A诱导Tau过度磷酸化和大鼠空间记忆障碍(Spatial Memory Deficit andTau Hyperphosphorylation Induced by In-hibiting PP2Ain Rat Brain)P.1030~1034田青1,2,郑红云1,陈绢1,李宏莲1,龚成新3,王建枝1(1.华中科技大学同济医学院,湖北武汉430030;2.黄石理工学院医学院,湖北黄石435003;3.纽约州立基础研究所,纽约10314)摘要:阿尔茨海默病(AD)患者脑内Tau蛋白过度磷酸化与磷酸酯酶2A(PP2A)活性下调有关.本研究向大鼠基底核注射PP2A抑制剂———0.4 pmol冈田酸(OA),注射后24 h PP2A活性被抑制60%、48 h PP2A活性被抑制13…     

髓芯减压联合陶瓷骨植入治疗中早期股骨头坏死的临床研究

本文旨在评估髓芯减压联合陶瓷骨植入治疗股骨头坏死的临床疗效, 并与单纯髓芯减压手术进行对比. 纳入第一作者所在医院骨科自2015年1月至2017年8月收治的早期股骨头坏死患者32例(40髋). 采用随机数表法将患髋随机分为A、B两组: A组20例, 行单纯髓芯减压术; B组20例, 行髓芯减压联合陶瓷骨植入手术. 术后每3个月通过影像学检查及查体对患者进行随访, 依据X线片结果将影像学分为进展及稳定两个等级. 髋关节功能评分采取Harris评分(Harris Hip Score, HHS). 记录两组数据并进行对比分析. 所有手术均顺利, 无围手术期严重并发症发生. 单纯髓芯减压组12髋(60.0%）影像学稳定, 髓芯减压联合陶瓷骨植入组18髋(90.0%)影像学稳定, 二者具有统计学差异(p=0.032). 两组术后HHS均较术前明显提高, 髓芯减压联合陶瓷骨植入组术后平均HSS为92.1分, 显著优于单纯髓芯减压组(HHS: 82.2, p=0.008). 按照HHS评分等级, 髓芯减压联合陶瓷骨植入组髋关节功能优良率为95.0%, 显著高于单纯髓芯减压组(70.0%, p=0.046). 髓芯减压联合陶瓷骨植入手术的临床疗效优于单纯髓芯减压手术, 可以作为治疗早中期股骨头坏死的有效方法.     

蛙虹彩病毒cop基因的克隆表达及亚细胞定位

从蛙虹彩病毒(Rana gryliovirus,RGV)基因组中克隆了含凋亡相关结构域的新基因-cop(Caspaserecruit ment domain only protein,COP)基因的全部编码区,成功构建了重组表达载体,进行了原核表达,并在鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosumcyprini,EPC)中进行了亚细胞定位.序列分析表明,RGVcop基因全长288 bp,编码一个长为95 aa,分子量为10.4×103的推定蛋白.二级结构预测表明其含有5个α螺旋.同源性比对分析显示,RGVcop与其他6株虹彩病毒及人类cop相关蛋白同源性最高为94%,最低为33%.重组原核表达质粒pET28a-COP转化大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导表达,获得一条约14×103的融合蛋白.重组真核表达质粒pEGFPN3-COP转染EPC细胞,经DAPI染色后,在荧光显微镜下观察显示重组蛋白在整个细胞中均有分布.     

石蒜碱对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制

建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型,以10、14、20、28、40 mg/kg 5个剂量组给药,探讨石蒜碱的抑瘤作用及机制,采用HE染色法观察肿瘤细胞的形态学变化,通过免疫组化实验观察石蒜碱对瘤体细胞凋亡相关因子Fas-L、Caspase-9、Bax、Bcl-2表达的影响。石蒜碱对Lewis肺癌小鼠的抑瘤率随着剂量的增加而增大,高剂量组(40 mg/kg)石蒜碱对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用最明显,抑瘤率达56. 8%(p0. 01);HE染色结果显示高剂量组(40 mg/kg)小鼠瘤组织细胞间隙增大,细胞数目明显减少;免疫组化实验结果表明石蒜碱可通过上调促凋亡蛋白Fas-L、Caspase-9、Bax,下调抑凋亡蛋白Bcl-2,促进肺癌Lewis细胞凋亡。     

MLH1、MSH2基因在散发性左、右半结肠癌中的表达差异及对临床特征的影响

探讨错配修复基因MLH1、MSH2在散发性左、右半结肠患者中的表达差异, 并分析这种差异与结直肠癌临床病理特征的相关性. 收集2015年12月至2018年12月期间, 在宁波市第一医院就诊的133例结直肠癌患者的病例资料, 分析左、右半结肠癌中MLH1、MSH2基因的表达差异, 以及这种差异与结直肠癌临床病理特征的相关性. 结果表明, 在结直肠癌病例中, MLH1、MSH2的表达缺失率与肿瘤的发病部位和分化程度有关(P＜0.05), 右半结肠癌的病例与总体样本表现更相近. 在散发性结直肠癌中, MLH1、MSH2的表达缺失率方面, 右半结肠癌高于左半结肠. 在右半结肠癌病例中, MLH1、MSH2的表达缺失患者相对发病年龄早, 分化程度低, 不容易发生神经浸润; 而在左半结肠癌MLH1、MSH2的表达缺失病例中, 无明显相关表现.     

顺铂对肝癌SMMC-7721干细胞标志物的影响

目的探讨顺铂(cisplatin,DDP)对肝癌SMMC-7721细胞增殖、周期和干细胞标志物ABCG2、CD133及ICAM-1蛋白的影响.方法不同浓度(32 mg/L、16 mg/L、8 mg/L、4 mg/L、2 mg/L)DDP作用于SMMC-7721,采用MTT比色法测定细胞增殖能力;PI染色后流式细胞仪检测细胞周期;免疫荧光法检测三种干细胞标志物表达水平.结果不同浓度DPP均对SMMC-7721细胞增殖产生抑制作用(P0.05).4 mg/L和2 mg/L DPP作用48 h使处于G0/G1期SMMC-7721细胞明显减少,S期细胞显著增多(P0.05).DPP作用后残存细胞中三种干细胞标志物(ABCG2、CD133及ICAM-1)表达增多.结论 DPP抑制SMMC-7721细胞增殖,阻滞细胞于S期.提示可能存在逃避DPP作用的肿瘤干细胞,为有效降低临床肿瘤复发率提供一定的理论基础.     

草果挥发油对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用

建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,探讨了草果挥发油对肿瘤质量、胸腺指数和脾脏指数的影响,采用HE染色法观察肿瘤细胞形态变化,免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果发现,草果挥发油各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p0.05);高剂量组(300 mg·kg-1)有些微毒副作用,各剂量组胸腺指数和脾脏指数较环磷酰胺(CTX)组有明显升高(p0.05);推测草果挥发油能够抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞生长的机制是通过上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达来诱导细胞凋亡.