H2株甲肝减毒活疫苗K7的核苷酸全序列分析

应用RT-PCR获取H     

pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响，为提高疫苗的产量，在传统的氯仿抽提条件下，使用不同pH值(pH1.0～12.0)的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提，检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus，HAV)抗原滴度和感染性滴度，结果表明经氯仿抽提后，HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0～9.0时最高，相应得率也比常规处理的得率有显著的提高.说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高，成品疫苗产量的增加具有实际应用价值.     

pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响，为提高疫苗的产量，在传统的氯仿抽提条件下，使用不同pH值（pH1．0－12．0）的磷酸盐缓冲体系进行氮仿抽提，检测抽提后甲肝病毒（Hepatitis A Virus,HAV)抗原滴度和感染性滴度，结果表明：经氯仿抽提后，HAV抗原滴定和感染性滴度均在pH8．0－9．0时最高，相对得率也比常规处理的得率有显著的提高。说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高，成品疫苗产量的增加具有实际应用价值。     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

猪瘟病毒HCLV株E2核苷酸序列与结构分析

用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＣＳＦＶ ＨＣＬＶ株Ｆ４８２代感染兔脾的细胞总ＲＮＡ中分段扩增出ＣＳＦＶ Ｅ２基因特异的３个部分重叠的ＤＮＡ片段,并将之分别克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经核苷酸序列测定和片段重叠完成了包含Ｅ２全长基因的１１４４ｂｐ序列的测定,其ＧＣ含量为４９．０％,核苷酸序列与国外报道的各株病毒的Ｅ２基因同源性分别不８３．５％＿９７．５％．     

BmNPV半胱氨酸蛋白酶基因的核苷酸序列研究

对家蚕核型多角体病毒苏州株（BmNPVsu）半胺氨酸蛋白酶基因（CP）的序列分析表明，该基因读码框为972个核苷酸，编码323个氨。同源性分析表明，BmNPVsu CP的氨基酸序列与不同来源的木瓜蛋白酶超家庭的CP具有较高的同源性，特别与Trpanosomabrucei的CP具有较高的一致性，达32％。在组织蛋白酶B、H、L、S以及木瓜蛋白酶的36个保守氨基酸残基中有31种出现在BmNPUsu的CP中，BmNPVsuCP同其他杆状病毒CP一样，可看作木瓜蛋白酶超家庭成员。     

基于斑马鱼模型的鳗弧菌减毒活疫苗的生物安全性评价

利用疫苗对养殖鱼类进行疾病预防正得到逐步应用,而减毒活疫苗通过浸泡方式也能使鱼体获得较高的免疫保护力。利用模式动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的生物安全性进行了评价。首先进行了疫苗对斑马鱼毒性实验,每条鱼注射免疫的半致死量为9．26×10^4CFU;其次分析了鳗弧茵在水体中的存活情况,菌体浓度在1．0×10...     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52疫苗株S1基因的克隆与序列测定

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列。设计了一对引物并以RT-PCR特异性扩增出IBV H52疫苗株的S1基因，基因产物大小为1．62kb，与设计相符，对其进行序列测定后，与其他标准毒株H120，M4l，BEAU株的S1基因进行同源性比较，结果表明，H52株与H120，M41和BEAU株的核苷酸序列的同源性分别为91．1％，96．9％和96．8％，由此可以看出，IBVH52疫苗株与标准毒株在Sl基因上具有高度的同源性。     

轮状病毒VP7基因的克隆及核苷酸序列分析

用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，从轮状病毒感染的细胞中扩增了916bp的VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM-T上，转化至受体菌DH5a中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定，证明重组质粒pT-V7中含有轮状病毒的VP7基因片段。经核苷酸序列分析，表明正确克服了轮状病毒主要保护性抗VP7基因中抗原表位区。     

亚洲一型口蹄疫病毒YNAs1.1株结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析

提取BHK21细胞增殖的亚洲一型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus Serotype Asial)强毒株YNAs1.1的RNA,用一对引物P7,P13经反转录（RT）－PCR法扩增了约674bp的DNA片段。克隆目的基因后,采用双脱氧DNA链末端终止法测得了YNAs1.1的VP1基因36－633核苷酸序列。分析表明,病毒VP1基因的核苷酸序列与以色列以及印度已报道的Asia1型FMDV的同源性分别为82.11%与88.07%,对应的氨基酸序列同源性为87.94％与93.47％。该序列在GeneBank登陆号为AF241566。     

用加速热稳定试验筛选甲型肝炎减毒活疫苗热稳定保护剂

为筛选具有良好热稳定保护效果的甲肝减毒活疫苗（H2株）保护剂,利用正交设计和加速热稳定试验,将不同配比的保护剂和液体疫苗混合后,封入安瓿,分别置37度和45度,不同时间取样,检测其感染性滴度,结果表明无保护剂的对照疫苗在45度条件下感染性滴度仅能维持2D不变,第3天开始下降,至4天已下降1．27logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在45度条件下感染性滴度能维持5天无显著变化,在37度条件下无保护剂的对照疫苗感染性滴度仅能维持7天无显著变化,10天显著变化,下降1．0－1．1logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在37度条件下感染性滴度能维持10天无显著变化,研究表明0．1mol.L^-1MgSO4,ω=5％,乳糖,0．01mol.L^-1精氨酸,0．01mol.L^-1甘氨酸组成的保护剂具有最佳保护效果,其热稳定保护效果明显优于现在使用的对照疫苗。     

免疫沉淀法分离纯化感染细胞中的甲肝病毒RNA

本研究采用抗血清（多抗血清）沉淀甲肝病毒,并用盐酸胍酸性酚,氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ．此方法能排除非病毒ＲＮＡ的污染,操作简单,要求条件较低,ＲＮＡ的纯度和完整性都较好     

Complete Nucleotide Sequence of a Newly Avirulent Newcastle Disease Virus Hubei 92(HB92) Strain

Newcastledisease (ND )isaseriousaviandiseasewithworldwidedistributionthatcancausesevereeconomicloss esinthepoultryindustry .Thecausativeagentofthedisease ,newcastlediseasevirus(NDV)alsoknownasavianParamyxovirustype 1,isamemberoftheParamyxoviridaeandcontainsasin gle strandednegativesenseRNAgenomeencompassing 15 186nucleotides[1 3] .Theviralgenomecontainssixgenes ,whichen codetheviralnucleoprotein(NP) ,phosphoprotein(P) ,matrixprotein(M ) ,fusionprotein (F) ,hemagglutinin neuraminidase(HN…     

甲型肝炎病毒(H2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究,结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高,ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７,２ＢＳ平均ＣＣＩＤ５０／ｍＬ高１．２８ｌｏｇ和１．５９ｌｏｇ．经统计学分析,Ｐ＜０．０５,有显著性差异,证实ＭＥＫ对Ｈ２株最敏感．ＭＥＫ可能是测定ＨＡＶ感染性滴度和繁殖ＨＡＶ较理想的细胞     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

Antibodies induced by multi?epitope vaccine showed inhibitory activity against heterologous influenza A virus (H3N2)

In this study, recognition of 4 recombinant viral proteins (GST?NHA1) by the antibodies induced by multi?epitope vaccine was testified. Inhibitory activities of these antibodies were also investigated in vitro against four heterologous influenza A viruses (H3N2). Three epitope?specific antibodies purified by affinity chromatography could reduce the plaque formation. Interestingly, the three neutralizing antibodies in combination showed obvious enhancement of inhibitory activity, suggesting that the development of recombinant multi?epitope vaccine might be an effective way against viral mutation.     

从中国非甲—庚型肝炎病人中克隆到TT病毒样DNA序列

从中国非甲－庚型肝炎病人中克隆到ＴＴ病毒样ＤＮＡ序列张军１杨海杰１苏智军２张奕返２林长青１黄鹤１郭庆１王颖１曾定１夏宁邵１（１厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５２福建省泉州市第一医院泉州３６２０００）肝炎是严重危害我国人民身体健康的疾...