上转换纳米粒子NaYF_4:Yb,Er的免疫荧光淬灭法测定中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白

采用上转换纳米粒子(UCP)NaYF+4:Yb,Er和量子点(QDs)CdTe分别标记中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的两株抗体,标记抗体与NGAL通过免疫反应形成双抗夹心体,无须洗涤分离直接测定。结果表明:UCP在540nm处的荧光可有效淬灭。NGAL的质量浓度在40~750μg·L~(-1)内与UCP的光强比呈线性关系,检出限(3s/k)为23.3μg·L~(-1)。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为94.6%~108%,测定值的相对标准偏差(n=6)为5.5%~9.1%。     

背景荧光猝灭-免疫层析法检测C-反应蛋白

采用背景荧光猝灭-免疫层析法(b FQICA),基于双抗体夹心法原理,将合适浓度的捕获抗体、示踪抗体分别固定在试纸条和微孔内,层析时与样本形成抗体-抗原-抗体的夹心结构,建立了一种操作简便、灵敏度高、抗干扰性强且能快速定量检测C-反应蛋白(CRP)的方法.结果表明,CRP在0.0~100.0 ng/m L浓度范围内与相对荧光强度值(F1/F2)呈现良好的相关性,最低检出限为0.0939 ng/m L,加标回收率为87.69%~111.0%,检测3批试剂的批间和批内相对标准偏差均小于15%,与降钙素原(PCT,20.0 ng/m L)及人血清淀粉样蛋白A(SAA,10.0μg/m L)均无交叉反应.采用该方法与免疫透射比浊法同时测定41例临床血清样本,检测结果相关性良好(r=0.9585,P0.01),2种方法无显著性差异(P0.05).     

基于CdTe量子点测定中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白的免疫荧光层析法

建立了一种基于CdTe量子点标记技术测定中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的免疫层析法。用水相法制备的CdTe量子点作为荧光探针标记于NGAL的一株单抗,采用双抗体夹心法,制备了检测NGAL的层析试纸条,用于测定NGAL的含量。NGAL的线性范围为41~2 050μg·L-1,检出限为27.35μg·L-1。对NGAL不同浓度的质控品连续测定10次,测定值的相对标准偏差在3.6%~9.7%之间。方法应用于尿液样品的分析,结果与酶联免疫吸附测定法对照,两种方法所得结果间无显著偏差。     

粮食中百草枯残留的金标免疫层析检测方法研究

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,研究胶体金与抗体蛋白的作用过程,确定稳定标记1.0 mL胶体金需8.10μg抗体蛋白,标记体系的最佳pH值为8.5。以金标抗体为分析探针,PQ-h-OVA为竞争抗原,羊抗兔IgG为控制抗体,构建直接竞争胶体金标免疫层析检测体系(GICA)。确定膜上包被抗原的质量浓度为0.50 g/L,点样量为1.0μL/条;金标点样量:5.0μL/条;羊抗兔二抗的最佳包被质量浓度为0.11 g/L,点样量为1.0μL/条。金标试纸条的目测检出限为10μg/L,检测时间约5 min,交叉反应率小于0.10%。方法的重复性和稳定性较好,该试纸条在室温下至少可保存5个月。     

水溶液直接进样-气相色谱法测定饮用水中的三卤甲烷和四氯化碳

采用苯乙烯-二乙烯苯多孔共聚物为填料的PLOT柱和电子捕获检测器(ECD),通过水溶液直接进样,用气相色谱法实现了对饮用水中三卤甲烷和四氯化碳的分离与测定。该方法分离效果较好,大量的水对测定无不良影响。三氯甲烷的线性范围为10~500μg·L~(-1),检出限(3S/N)达2.1μg·L~(-1);四氯化碳和其他三卤甲烷的线性范围为1~50μg·L~(-1),检出限(3S/N)在0.2~0.7μg·L~(-1)之间。加标回收率在90.0%~106%之间,测定值的相对标准偏差(n=7)在2.9%~12%之间。方法用于分析实际水样,测定结果与顶空-气相色谱法的结果一致,但测定时间缩短1h以上。     

量子点荧光微球免疫层析试纸条定量检测恶性疟原虫

以羧基化Cd Te/Zn Se量子点荧光微球为荧光标记物,采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)法偶联抗恶性疟原虫富组氨酸蛋白(Pf)单克隆抗体制备荧光探针;以羊抗恶性疟原虫组氨酸多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线和质控线,建立了免疫层析试纸条定量检测血清中恶性疟原虫的方法。所使用的羧基化量子点荧光微球的荧光强度为单个量子点的2800倍。实验结果表明,该荧光试纸条定量检测血清中恶性疟原虫线性范围为5.8~8010 Parasite/μL,最低灵敏度达到5.8 Parasite/μL,单个样品检测时间只需15 min。加标回收实验显示,试纸条批内回收率为93.0%~111.8%,批间回收率为98.3%~115.1%,且批内、批间的相对标准偏差均小于5%。     

基于量子点荧光微球的噻虫嗪快速定量免疫层析试纸条的研制

构建了一种基于量子点荧光微球的噻虫嗪快速测定免疫层析试纸条。该试纸条以偶联噻虫嗪单克隆抗体的量子点微球为荧光探针,噻虫嗪完全抗原(TMX-BSA)为T线,山羊抗小鼠IgG为C线。结果表明,抗体在探针合成中的最佳添加量为16μg、缓冲液pH 6.0、 N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)浓度为0.1 mg/mL。试纸条对噻虫嗪检测在1～200 ng/mL范围内呈线性关系,标准曲线方程为y=-0.42x+0.99 (R²=0.989),检出限为1.64 ng/mL。将构建的试纸条应用于粮食样品中噻虫嗪的检测,加标回收率为79.5%～110.2%,相对标准偏差(RSD)为0.58%～12%,表明其可以满足粮食样品中残留的噻虫嗪检测。     

铁纳米线/壳聚糖/抗体生物探针的制备和层析检测

以戊二醛为交联剂制备Fe纳米线/壳聚糖复合物,研究其对牛血清白蛋白的吸附性能:缓冲液pH为6.0时,达到最大平衡吸附量,为148.40 mg/g;以Fe纳米线/壳聚糖交联吸附α-HCG抗体制备生物探针,组装层析试纸条,进行免疫层析实验,结果表明:其检测灵敏度为10 IU/L,与市场上销售的胶体金早孕试纸条相比,可以将早孕检测时间提前2～3 d.     

胶束增敏荧光法测定大鼠血清中荜茇宁

蒙药荜茇有效成分荜茇宁具有荧光,且荧光可被表面活性剂吐温-20增敏,同时,其同步荧光光谱能消除血清样品的背景荧光对荜茇宁荧光光谱的干扰,据此建立了直接测定大鼠血清中荜茇宁浓度的新方法。荜茇宁的线性范围为5.47×10~(-3)~3.28μg·m L~(-1),检出限为1.20×10~(-3)μg·m L~(-1),样品回收率为100.6%,相对标准偏差为2.7%。方法可用于大鼠血清样品中荜茇宁浓度的直接测定。     

集成免疫磁珠富集和免疫层析的黄曲霉毒素M1快速检测法

以喷涂了检测抗原黄曲霉毒素M1-BSA和驴抗鼠二抗形成检测线和质控线的硝酸纤维膜制备免疫层析试纸条,采用EDC/NHS法制备偶联了抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的免疫磁珠。免疫磁珠与待检样本混合,经捕获、磁分离后,浓缩重悬液直接用免疫层析试纸条检测,首次建立了集浓缩样本与免疫层析于一体的黄曲霉毒素M1快速检测法。该方法用于检测原料乳中黄曲霉毒素M1,检出限为0.1μg/L,低于我国制定的黄曲霉毒素M1限量标准(0.5μg/L),与其它真菌毒素和原料乳中常检违法添加物无交叉反应,分析结果与酶联免疫吸附法(ELISA)结果一致。本方法适合现场快速检测原料乳中黄曲霉毒素M1。     

量子点标记免疫层析技术检测血液中的降钙素原

为了快速定量检测血液中降钙素原( Procalcitonin,PCT)含量,首先制备CdSe/ZnS量子点,再将量子点标记抗抗钙素单抗,标记单抗后量子点荧光发射峰从620 nm红移至625 nm,峰形保持良好。以制作的量子点标记免疫层析试纸条及其相应荧光测定系统。因减少单抗用量可降低试纸条成本,本研究采用结合垫上喷涂适量量子点,标记单抗并仅有检测线的结构。通过检测信噪比,优化此试纸条的参数。本研究的量子点荧光标记试纸条及其配套测定系统可在20 min内快速检测PCT,定量检测线性范围0.2~100μg/L,灵敏度达到0.1μg/L。22份血液样本检测结果与目前商品设备检测结果的Pearson相关系数为0.9995,K-S检验的Sig为1.0,说明两种检测方法的一致性。快速定量检测PCT具有定量测量细菌性感染、临床指导抗生素合理应用的重要意义。     

免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生-高效液相色谱法测定柏子仁中的黄曲霉毒素

采用免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生-高效液相色谱法测定中药材柏子仁中的黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2和B_1。样品经甲醇(7+3)溶液提取,提取液经免疫亲和柱净化,用甲醇洗脱,洗脱液经黄曲霉毒素专用C18色谱柱分离,以甲醇(45+55)溶液为流动相进行洗脱,柱后光化学衍生波长为254nm,荧光检测器的激发波长为365nm,发射波长为440nm。黄曲霉毒素G2、B2的线性范围均为0.125~5.0μg·L~(-1),黄曲霉毒素G_1、B_1的线性范围均为0.50~20μg·L~(-1),检出限(3S/N)在0.012~0.047μg·L~(-1)之间。加标回收率81.4%~105%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在1.6%~6.9%之间。     

催化动力学光度法测定栗子和香菇中痕量Se(Ⅳ)

探讨了Se(Ⅳ)在HNO_3介质中催化KBrO3氧化罗丹明B的褪色反应及最优的动力学条件,由此建立了动力学荧光光度法测定痕量Se(Ⅳ)的新方法。测定Se(Ⅳ)的线性范围为0.2~2.2μg·L~(-1),检出限为0.004μg·L~(-1)。方法用于测定栗子和蘑菇中的痕量Se(Ⅳ),获得了满意的结果。     

原子荧光光谱法测定煤矿复垦区土壤中砷

取土壤样品0.5g,加入硝酸-盐酸-水(1+3+4)混合酸15mL,先在室温放置过夜,然后在沸水浴上加热2h,冷却,加入50g·L~(-1)硫脲-50g·L~(-1)抗坏血酸(1+1)混合溶液5mL后,用盐酸(5+95)溶液定容至50mL,用原子荧光光谱法在选定的仪器工作条件下测定试样溶液中砷量,所采用的硼氢化钾溶液的质量浓度为25g·L~(-1)方法的检出限(3s/k)为0.05μg·L~(-1),用标准加入法测得的回收率在93%～101%之间。按所提出的方法分析了土壤标准物质(GBW07403),测得其砷量与认定值一致。     

离子液体为电解质背景毛细管电泳法同时测定四种注射用头孢药物的含量

文章建立了[Bmim][BF_4]离子液体作为背景电解质高效毛细管电泳同时测定注射用头孢噻肟(CTX)、头孢唑啉(CFZ)、头孢曲松(CRO)和头孢米诺(CMN)四种头孢类药物的方法。将头孢拉定(RAD)作为内标,背景电解质的浓度为30mmol/L[Bmim][BF_4](pH=10.50),分离电压为15kV,进样时间为10s,检测波长为250nm。结果发现,CTX、CFZ、CRO和CMN在10min内得到有效分离,在0.005~100.0 mg·L~(-1)范围内有良好的线性关系(r0.999),检出限分别为0.56μg·L~(-1)、0.43μg·L~(-1)、0.34μg·L~(-1)和0.75μg·L~(-1),定量限分别为2.35μg·L~(-1)、1.85mg·L~(-1)、1.43μg·L~(-1)和2.56μg·L~(-1),精密度(RSD)3.47%。该方法用于注射用头孢药物的分析,回收率在98.12~101.88%。离子液体经CH_2Cl_2萃取回收,可重复使用。     

聚丙烯酸钠-Nafion包覆三联吡啶钌掺杂SiO_2纳米粒乙肝表面抗原的检测

利用Nafion与聚丙烯酸钠的混合膜包覆三联吡啶钌(Ru(bpy)_3~(2+))掺杂SiO_2纳米粒制备了用于生物标记的电化学发光纳米粒,并构建了信号放大的免疫检测探针。结合免疫磁珠构建的捕获探针,建立了乙肝表面抗原的双抗体夹心电化学发光免疫检测方法。该方法的线性范围为5.0~1000pg·m L~(-1),相关系数R~2为0.9959,最低检测限为1.73 pg·m L~(-1)(S/N=3),表现出了高达200倍浓度差的宽线性检测范围和高灵敏度。     

气相色谱-质谱法测定聚对苯二甲酸乙二醇酯瓶装水中乙醛的迁移量

提出了测定聚对苯二甲酸乙二醇酯(PEGTP)瓶装纯水中乙醛迁移量的气相色谱质谱法。水样(100mL)中乙醛用2,4-二硝基苯肼在pH 3柠檬酸盐缓冲溶液10mL中,于40℃水浴上振荡1h加热使之衍生化。冷却后用二氯甲烷萃取3次,每次10mL。萃取液于40℃旋转蒸发至1.0mL,分取1分L进样分析。采用DB-5MS毛细管柱及在70℃～280℃范围内程序升温进行分离。线性范围在300μg·L~(-1)以内,检出限(3S/N)为1μg·L~(-1),加入50μg·L~(-1)及100μg·L~(-1)标准溶液做回收试验及精密度试验,测得平均回收率为88%,相对标准偏差(n=5)依次为5.4%及4.5%。     

顶空固相微萃取-气相色谱法测定饮用水中氯酚

提出了应用气相色谱法与顶空固相微萃取样品预处理技术相结合的方法测定饮用水中2,4,6-三氯酚(TCP)和五氯酚(PCP)。选用20mL顶空瓶,其中预置0.1mol·L~(-1)盐酸溶液0.5mL及氯化钠4.0g,加入水样10.0mL,立即封盖。插入85μm聚丙烯酸酯萃取头,在500r·min~(-1)转速振荡条件下于60℃萃取40 min,随之进入色谱仪解吸并测定。测定中采用HP-5毛细管柱和程序升温(40℃～280℃)条件,并用载气流量为3mL·min~(-1)。测得2,4,6-TCP及PCP的线性范围依次为55μg·L~(-1)和12μg·L~(-1)以内,其检出限(3S/N)依次为0.15μg·L~(-1)和0.13μg·L~(-1),加入3个浓度水平的标准溶液对方法的回收率及精密度作了试验,测得回收率在90.0%～112.8%之间,相对标准偏差(n=6)在3.0%～4.9%之间。     

基于纳米颗粒构建的酶联增敏生物传感器测定水中Cd2+

以Fe_3O_4磁纳米颗粒和金纳米颗粒为载体,利用抗原-抗体的特异性识别作用,构建了乙酰胆碱酯酶(AChE)酶联增敏的生物传感器,并用于测定水中Cd~(2+)含量。对Fe_3O_4磁纳米颗粒进行镉-抗原功能化,对金纳米颗粒进行镉-抗体功能化和AChE修饰,功能化Fe_3O_4磁纳米颗粒和功能化并修饰了 AChE的金纳米颗粒发生竞争性自组装形成组装体,组装体催化底物乙酰胆碱(ACh)水解产生乙酸进而引起反应体系的酸度变化,实现了 Cd~(2+)的测定。Cd~(2+) 的线性范围为0.001～10.0μg·L~(-1),检出限(3s/k)为0.24 ng·L~(-1)。在0.010,0.100,1.00μg·L~(-1)等3个浓度水平下进行加标回收试验,回收率为91.2 %～107%,测定值的相对标准偏差(n=10)为3.5%～5.4%。     

基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌

建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法,检测猪霍乱沙门氏菌.待检样品经免疫磁分离富集和热洗脱处理后,用荧光微球免疫层析试纸条进行检测.每毫克纳米磁珠标记30μg抗体制备的免疫磁珠,对浓度为102 ～ 106 CFU/mL的猪霍乱沙门氏菌的捕获率均大于90％,特异性好;在pH=6时,以300μ,g/mg猪霍乱沙门氏菌单抗11D8-D4标记荧光微球,制备免疫荧光微球;以2.0 mg/mL猪霍乱沙门氏菌单抗5F11-B11喷涂检测线(T线),以1.0 mg/mL驴抗鼠IgG喷涂质控线(C线),制备免疫层析试纸条.采用建立的基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌,在PBS缓冲液中检出限为1.5×105 CFU/mL,牛奶中检出限为7.6×105 CFU/mL,与直接采用荧光微球免疫层析方法检测相比,检出限分别降低了10倍和200倍.本方法可有效富集牛奶中的沙门氏菌,避免了基质干扰,灵敏度大大提高,具有较好的应用前景.