R-苯乙醇高产菌株的筛选及分子生物学鉴定

以苯乙酮为底物,利用薄层色谱(TLC)和气相色谱(GC)检测,从成都某手性化工厂污水池附近土壤中分离到的224株菌中筛选R/S-苯乙醇的高产菌株.经过多次复筛,最终获得一株遗传性质稳定、可将苯乙酮不对称还原成R-苯乙醇的菌株cmq6-8.以该菌株静息细胞为催化剂进行生物转化,当底物质量分数为108 mmol/L,静息细胞量为0.25 g/mL,辅助底物葡萄糖浓度为2.0%,转化体系初始pH值为7,30℃转化48 h时,底物转化率为49.42%,产物R-苯乙醇的对映体过量值为94.81%.通过对该菌株的26SrDNADl/D2区域分析,并结合其部分生理生化特征,初步鉴定菌株cmq6-8为解脂耶氏酵母菌.     

TLC实验显色剂点加法及其混合式教学的探索

目的：探索在薄层色谱实验中采用毛细管点加法加显色剂的应用及在该实验中实施混合式教学方式。方法：分别采用滴加法和点加法在显色效果、器材、用量等方面进行对比;面向近两届制药工程专业学生分别采用传统教学与混合式教学方式,并在混合式教学方式中渗透点加法,在操作表现、实验结果、实验报告、问卷调查等方面进行对比。结果：点加法显色效果良好,更接近绿色化学的要求;混合式教学方式在培养学生兴趣、提高学生探究能力等方面优于传统教学法,有利于薄层色谱等实验教学。结论：显色剂点加法可应用于薄层色谱实验中,混合式教学方式也适于薄层色谱实验的教学。     

定向产S-1-苯乙醇菌株的筛选和发酵

以DL-1-苯乙醇为唯一碳源从土壤微生物中筛选出1株高度立体选择性还原苯乙酮为S-1-苯乙醇的产酶菌株No.XC35-8。对发酵条件进行了优化，考察了多种辅助底物对酶促反应的影响，选取异丙醇进一步研究其对酶促反应的促进作用。结果表明：5g/L葡萄糖为培养基碳源，10g/L胰蛋白胨为氮源，30℃，200r/min振荡培养30h。转化底物苯乙酮体积分数为0.1%，辅助底物异丙醇体积分数为6%，转化24h，底物转化率可达83.4%，产物的对映体过量值(ee值)为99.5%。     

通脉灵片质量标准研究

目的:建立通脉灵片的质量标准.方法:采用薄层色谱法对样品中的郁金、地黄、降香、川芎进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法对主药丹参中有效成分丹酚酸B的含量进行测定.结果:样品中均能检出郁金、地黄、降香、川芎的特征斑点;丹酚酸B在61.6～985.6ng范围内呈良好的线性关系(r=0.9999).加样回收率为98.8%,相对标准偏差(RSD)为1.70%(n=5).结论:所建立的方法可准确的进行定性、定量检测,能够用于该制剂的质量控制.     

α-苯乙醇的高效液相色谱手性拆分研究

本文用实验室自制的纤维素三(3,5-二甲基苯基氨基)甲酸酯和纤维素三(4-甲基苯)甲酸酯涂敷于硅胶上,分别制成OD柱和OJ柱.在OD柱和OJ柱上对外消旋体α-苯乙醇进行了拆分,分别考察了流动相中异丙醇的含量对α-苯乙醇手性拆分的影响,还分别考察了流动相中1%(V/V)的正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇对α-苯乙醇拆分的影响.我们选择了最佳的拆分方法,并将此方法应用于苯乙酮不对称催化还原产物的光学纯度的鉴定中,将苯乙酮在NaBH4为还原剂下,在自制的手性聚合物金属络合物PMA-QN-PdCl2催化剂作用下被还原,取得了满意的结果.     

土壤中腈水解酶产生菌的快速筛选

为了从土壤中快速筛选具有腈水解能力的微生物,建立了以苯酚一次氯酸盐比色法(又名Berthelot比色法)检测96孔板反应产物中氨离子浓度为基础的腈水解酶酶活快速分析方法.用该法从土壤样本中筛选获得了9个酶活力较高的菌株.用HPLC方法定量检测9个菌株对对羟基苯甲腈的转化率,证明苯酚-次氯酸盐比色法微孔板分光光度计的测定结果与HPLC结果对应良好,转化率最高为49.9%.经16s rDNA鉴定,菌株分别属于金黄杆菌属、芽胞杆菌属、葡萄球菌属、寡养单胞菌属等.     

TLC与GC法测定红薯叶多糖的单糖组成

去蛋白后的红薯叶多糖,经Sephadex-G100凝胶层析法纯化后,利用薄层色谱法结合酸水解,糖腈乙酰化气相色谱分析法测定红薯叶多糖的单糖组成和各组成的物质的量比.结果表明:红薯叶多糖的单糖组分有木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu),其量的比0.47:0.35:0.18.     

α-苯乙醇手性对映体气相色谱分析方法研究

建立了基于手性毛细管柱直接测定α-苯乙醇对映体含量的气相色谱法.采用日本岛津GC-2010气相色谱仪和CP Chirasil-DEX CB(25 m×0.25 mm)色谱柱,控制柱温为108℃,载气(N2)流量为1.9 mL/min,在此条件下α-苯乙醇手性对映体峰均达到基线分离.选择正十二烷作为内标物测定不同浓度α-苯乙醇,得到标准曲线,其线性(相关系数R=0.999 3)和重复性(RSD<1%)均很好.将该法用于手性催化剂Pd-CS/SiO2和Pd-CS/MCM-48催化苯乙酮氢转移反应产物α-苯乙醇手性对映体含量的分析,可进行高选择性手性催化剂的筛选,实现了对催化剂制备及反应条件的优化.     

玉米抗旱性生理指标筛选鉴定的研究

寻找简单易行、迅速可靠的鉴定方法,是植物抗旱研究的重要课题。本文试图用几个主要综合生理指标来反映玉米材料(品种)的抗旱性,直接为生产提供抗旱性强的品种,并为抗旱育种提供优良亲本和科学依据。     

放线菌生物活性物质的高通量筛选

 放线菌是产生生物活性物质最多的一类微生物.最近3年,我室从云南省采集土样,分离到3000多株放线菌、真菌,选择其中2600株,进行发酵,制备成提取物,利用自建的抗氧化、抑制乙酰胆碱酶、抑制一氧化氮合成酶、AGE等模型和高通量筛选系统进行了筛选,筛选到一些值得进一步研究的菌株.对高通量筛选的有关问题及初步筛选结果进行了讨论.     

高产脂肪酶菌株筛选

以实验室所提供的12株酵母菌菌株为试验对象,进行活化和扩大培养,通过初筛及复筛,筛选出高产脂肪酶菌株,并采用酸碱滴定法测定酶活力.经过选择培养基复筛选出6株透明圈较大的菌株,对其测定酶活.结果表明,菌株CC06具有较高的脂肪酶活性,脂肪酶活力为31.67 U/mL.     

Caspase-3抑制剂的筛选体系构建及药物筛选

Caspase-3是细胞凋亡途径中重要的靶蛋白,研究Caspase-3抑制剂或激活剂,对治疗心脑血管疾病、肿瘤等具有积极意义.利用原核表达系统高效表达Caspase-3,并以表达的粗酶构建基于Caspase-3抑制剂的体外高通量筛选模型,随后对实验室保存的960种放线菌次级代谢产物进行筛选,获得9株具备分泌Caspase-3抑制剂活性的菌株,随后进一步复筛,确认了2株具备分泌高活性的Caspase-3抑制剂的菌株pwh890和pwh891,均可抑制80%的Caspase-3活性.最后对pwh890分泌的次级代谢产物进行初步分离纯化,获得31.3mg纯度较高的抑制剂,为后续的抑制剂的结构解析和改造奠定基础.     

高通量筛选污水中的硝化细菌

为了降低污水中氮元素对环境的污染,利用分离培养基从污水中分离出94株单菌,对单菌进行富集,再利用鉴定培养基、氨氮、亚硝酸盐和硝酸盐快速测定试剂盒初筛出41株硝化细菌,通过功能验证复筛出25株高效的硝化细菌.这25株硝化细菌均可将市政污水中的COD降解到40~60 mg/L,符合污水的COD一级降解标准,氨氮的降解率为70%~90%,也符合污水中氨氮的降解标准.     

木糖发酵菌株的筛选

本实验利用传统的方法从森林土样中分离筛选出一株能有效发酵木糖生产乙醇的酵母菌株。首先通过富集培养、初筛、复筛等步骤筛选出一株（1#菌株）能够利用木糖的酵母菌株,对其进行了生理生化性能指标试验,初步鉴定为假丝酵母菌（Candida sp.）。并对其进行了利用木糖发酵乙醇试验,实验结果表明：在培养温度为30℃,pH5.0,接种量为10％左右,初始木糖浓度为40g/L时,该菌株可以利用木糖发酵生产乙醇,产乙醇量为1.06g/100mL,相当于理论转化率的56.9%。     

利用新模式—离体植物组织平皿法筛选农用抗生素杀真菌剂的研究

利用离体植物组织平皿法这一新型筛选模式,我们从3000株待测放线菌菌株中筛选出了11株产抗菌株,并对其中四株链霉菌进行了深入研究(S-64,S-113,S-683,S-921)。由这些菌株产生的抗生素,每种都能够有效地抑制20多种真菌的生长;其中大多数为植物病原真菌。温室植株—病原菌接种复筛和广泛的田间试验都已表明,这些抗生素杀真菌剂能够有效地防治玉米小斑病,棉花枯萎病,苹果树腐烂病和梨黑星病。同时,这些抗生素对酸、碱、光、热处理有效好的稳定性。各种试验结果证明了“离体植物组织平皿筛选法”是一种简便易行、高效率、高特异性的农用抗生素杀真菌剂筛选模式。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

为了建立体外蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的高通量筛选模型,筛选潜在的SHP2抑制剂,通过应用大肠杆菌系统克隆表达GST-SHP2融合蛋白,经过GST-Sepharose亲和层析分离得到纯化的GST-SHP2蛋白,建立384孔板的高通量筛选模型,对48000个有明确结构的小分子化合物进行体外筛选,筛选出75个活性化合物对SHP2的抑制作用大于50%,确定3个化合物具有较高的抑制活性。该筛选模型灵敏、稳定,对SHP2抑制剂药物研发打下了基础。     

富硒大蒜硒对蒜氨酸TLC特征图谱和含量的影响

了解不同含硒量富硒大蒜硒对载体植物大蒜蒜氨酸TLC特征图谱以及含量的影响.采用薄层色谱(TLC)方法和高压液相色谱(HPLC)方法鉴定和定量检测普通大蒜冻干粉(含硒量＜0.38 μg/g,以硒计,以下同)和富硒大蒜冻干粉(含硒量(9.52-1 329 μg/g)蒜氨酸.普通大蒜与富硒大蒜蒜氨酸TLC特征图谱相同,普通大蒜蒜氨酸含量范围在2.2%-3.1%之间,富硒大蒜蒜氨酸含量范围在2.1%-3.2%之间,两类大蒜蒜氨酸含量无统计学差异.初步证实含硒量小于1 329 μg/g富硒大蒜含硒量并不影响大蒜蒜氨酸的化学性质和含量,因此不会影响载体植物大蒜中蒜氨酸的营养和药用功能.同时,该结果在确保载体植物营养药用价值相同的前提下,为探讨不同含硒量富硒大蒜硒防控慢性疾病的量效关系提供基本的化学理论依据.     

甲胺磷农药降解菌的筛选鉴定及其降解效能研究

分别从黄冈棉田、荆州农田、沙市农药厂等长期受有机磷农药污染的不同环境土壤取样,通过富集培养,筛选分离到10株甲胺磷(MAP)降解菌.测定了各菌株的降解效能.选取降解效果较好的HS-A32菌株进行了初步研究.提取该菌总DNA进行16S rDNA PCR扩增、测序,BLAST检索及序列分析表明,HS-A32菌与不动杆菌的同源性为98%.结合生理生化实验结果,初步确定HS-A32菌为不动杆菌属(Acinetobacter).通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)对MAP降解进行了定性和定量分析.结果表明,该菌能以MAP作为唯一的碳源和氮源生长.接种该菌于500 mg/L的MAP无机盐液体培养基中,35℃、120 r/min振荡培养3 d,对甲胺磷降解率可达86%,是一株甲胺磷高效降解菌.