HMG蛋白质与人体β-珠蛋白基因5旁侧DNA序列的结合

人体β-珠蛋白基因的5′-旁侧DNA片段(-610bp→+1bp)内的两个负调控区域与HMG蛋白质(High Mobility Group Proteins)结合状况已用近代分子生物学的技术(足印分析法(DNase Ⅰ protection Assay)和凝胶电泳阻抑分析法(Gel MobilityShift Assays)加以分析。用凝胶电泳阻抑分析方法证明了HMG蛋白质(1+2)与两个负调控区域有不同程度的结合,同时也观察到这两个负调控区域的结合蛋白是各异的。为了进一步检测HMG蛋白质(1+2)与DNA序列的精确结合位点,我们又采用了足印分析的方法,观察到在第一个负调控区内HMG蛋白质(1+2)有一个专一的结合位点(-560bp→-533bp)。在第二个负调控区内,则可以检测到有两个结合位点(-272bp→-252bp和-306bp→-329bp)。另外,我们还证实了HMG蛋白质(14+17)与这两个负调控区都不能结合。上述实验结果提示HMG蛋白质(1+2)在β-珠蛋白基因表达中起着积极的调控作用。     

高效毛细管区带电泳法分离人血清蛋白质的研究

 研究了高效毛细管区带电泳分离人血清蛋白质的电泳行为及实验条件 ,建立了分离血清蛋白质的高效毛细管区带电泳法。血清样品经硼酸缓冲液 (5 0 mmol/L,p H8.80 )稀释后 ,以 0 .1 mol/L硼酸缓冲液 (p H9.3 5 ,含4g/L PEG80 0 0 )为电泳介质 ,在 5 0 μm i.d.× 3 7cm弹性石英毛细管柱 (有效柱长为 3 2 cm)中进行电泳分离 ,以2 0 0 nm紫外波长检测。方法简便、快速、重复性好 ,1 2 min内便可完成对血清中蛋白质的电泳分离。     

人类基因组和DNA序列分析新进展

0世纪 90年代世界各国纷纷将人类基因组研究列为国家重大研究项目。很多人认为这是当代也可能是整个时代最重要的科学事业[1] ,因为它是全面揭开人类自身奥秘的划时代研究 ,对人类的生命和生存具有极其重大而深远的影响。1 990年美国制定了世界上最庞大的人类基因组项目 (Ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ) ,计划在 1 5年内投资 30亿美元 ,完成人类基因组全部脱氧核糖核酸 (ＤＮＡ)测序、定位及遗传学研究。由于计划庞大 ,人们称其为“人的阿波罗”计划。英国、日本和德国都有较大的人类基因组研究项目。我国在北京和上海分别建立了人…     

四磺基锰酞菁-蛋白质体系的共振瑞利散射行为及其分析应用

在pH3．6的Clark-Lub’s缓冲溶液中，四磺基锰酞菁(MnTSPc)和蛋白质的共振瑞利散射(RRS)均十分微弱。当两者形成复合物时能使RRS信号急剧增强，在330-370nm范围内呈现较高的散射强度，其最大散射波长为344nm。各种蛋白质，包括牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、γ-球蛋白(γ-IgG)及卵蛋白(ORB)的线性范围分别为0．1—3．0,0．0—1．6,0．05—2．0及0．0—1．0mg／L；相应的检出限分别为5．7,8．3、13和13μg/L。用此法对人血清样品进行了测定，结果满意。     

氢氘交换质谱技术在蛋白质和蛋白复合物结构研究中的应用进展

蛋白质是生命功能的执行者,其功能的发挥受自身结构动态变化、与其他生物分子的相互作用及修饰等因素的调节。因此,对蛋白质及蛋白复合物结构的研究有助于揭示重要生命过程中的分子机理与机制。氢氘交换质谱(Hydrogen deuterium exchange mass spectrometry,HDX-MS)是研究蛋白质结构、动态变化和相互作用的强有力工具,也是传统生物物理手段的重要补充。该文综述了HDX-MS的基本原理、机制、实验方法和研究最新进展,并从蛋白质自身动态变化、蛋白质-小分子相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用3个方面介绍了近年来HDX-MS在蛋白及蛋白复合物研究中的应用进展。     

固绿FCF分光光度法测定血清蛋白质

在pH 1 .4的Clark Lubs缓冲介质中 ,固绿FCF与血清蛋白质作用在室温下能迅速结合形成复合物 ,其最大吸收波长为 660nm ,比固绿FCF本身红移了 3 6nm。用分光光度法研究了该结合反应的最佳条件 ,并在此基础上建立了测定蛋白质的新方法。在 660nm处各蛋白质浓度至少在 5～ 70mg L的范围内与吸光度成正比 ,对测定牛血清白蛋白 (BSA)、人血清白蛋白 (HSA)及球蛋白 (IgG)的表观摩尔吸光系数ε6 6 0 和桑德尔灵敏度s分别为 7.87× 1 0 5、9.5 2× 1 0 5、1 .60× 1 0 6 L·mol- 1 ·cm- 1 和 0 .0 83、0 .0 72、0 .0 93 μg·cm- 2 。除阴、阳离子表面活性剂外 ,其余大部分物质不干扰蛋白质的测定。所拟方法具有简便、快速、选择性好、灵敏度高等特点 ,应用于尿液、人血清及含乳饮料中总蛋白的测定 ,结果与考马斯亮蓝G 2 5 0法基本一致。     

高效亲和液相色谱法纯化基因重组人白细胞介素-2

1 引言高效亲和液相色谱(HPAC)是将经典亲和色谱的高特异性同高效液相色谱的快速、高效相结合产生的一种蛋白质的分离技术.它使经典亲和色谱原来需要几个小时才能完成的纯化工作缩短为十几分钟或更短,而且纯化倍数高,分离效果好.因此,HPAC在近年基因重组蛋白质的纯化方面得到了广泛的应用.基因重组人白细胞介素-2(rhIL-2)是生物体内具有重要生物学功能的细胞因子,目前已成功地进行了基因表达.本文以自制的rhIL-2单克隆抗体(McAb)的HPAC填料纯化了大肠杆菌(E.coli)表达的rhIL-2.     

人体β-珠蛋白基因5′-旁侧DNA序列内的负调控区域1(NCR1)与HMG蛋白质(1+2)的相互作用

利用分子生物学技术和扫描隧道显微镜方法首次观察到HMG蛋白质(1+2)和人体β-珠蛋白基因的5′-旁侧DNA序列内的一个负调控区域(NCR1)相互作用的构象,这类蛋白质能将线状的DNA片段(～200bp)折叠起来,形成一个环状结构(直径70±6A)和°一条似乎呈现左手螺旋(z-from)的线状DNA尾巴。     

蛋白质相互作用预测、设计与调控

蛋白质相互作用是生命活动在分子水平上的基本事件. 蛋白质相互作用的三维图像可以给出关键生命活动过程的分子细节. 了解蛋白质相互作用的原理有助于揭示生命活动的机制, 并在此基础上开展有重要价值的蛋白质设计. 本文对于蛋白质相互作用预测、设计和调控研究的近期进展进行了总结归纳, 介绍了作者实验室在相关领域的研究进展, 并对今后的研究方向进行了展望. 主要包括: (1) 蛋白质相互作用网络、蛋白质相互作用机制和蛋白质复合物结构计算分析; (2) 基于序列、结合位点以及复合物结构的蛋白质相互作用预测; (3)蛋白质相互作用设计方法; (4) 利用化学分子调控蛋白质相互作用的方法; (5) 针对蛋白质相互作用的蛋白质药物设计方法.     

吖啶橙-罗丹明6G荧光共振能量转移及其罗丹明6G荧光猝灭法测定蛋白质

研究了吖啶橙(AO)与罗丹明6G(R6G)之间能量转移的最佳条件。在pH=7．20的Tirs-HCl缓冲溶液,十二烷基苯磺酸钠介质中,AO-R6G能够发生有效能量转移,使R6G荧光增强。蛋白质的加入使R6G荧光猝灭,以此建立了利用AO-R6G荧光共振能量转移间接测定蛋白质的新方法。牛血清白蛋白、人血清白蛋白工作曲线线性范围分别为1．0～31和1．0—30mg／L;检出限分别为0．32和0．33mg／L;平行6次测定相对标准偏差为1．1％～2．0％;回收率为96．7％～103．2％。此方法的稳定性好,选择性高,用于人血清试样中总蛋白含量的测定,与常用的双缩脲法基本一致。     

分子通道带我们进入了细胞化学--2003年诺贝尔化学奖介绍

瑞典皇家科学院于 1 0月 8日公布 2 0 0 3年诺贝尔化学奖授予美国化学家彼德·阿格雷 (PeterAgre)和罗德里克·麦金农 (RoderickMacKinnon) ,以褒奖他们在细胞粘膜研究方面取得的开创性成就。他们分别在“水通道”和“离子通道的结构与机理”研究中的发现 ,使人们搞清了盐 (离子 )和水是如何传进和传出人体细胞的。此发现可以使人们在分子水平上了解诸如肾如何从原尿中回收水及神经细胞如何产生和传输电信号的问题 ,这对人们了解许多疾病 (比如肾、心脏、肌肉和神经系统疾病 )是极其重要的。为使广大读者了解他们的巨大贡献 ,特把瑞典皇家科学院在网上公布的综合评述译成中文 ,予以转载。     

Zn（Ⅱ）—锌试剂络合物与蛋白质的显色反应及其应用研究

在 pH 2 .8的氯乙酸缓冲溶液中 ,有TritonX 10 0存在下 ,Zn(Ⅱ ) 锌试剂络合物与蛋白质结合生成玫瑰红色复合物 ,最大吸收波长在 32 8nm ,蛋白质浓度在 0～ 8.0及 10 .0～ 130 .0mg·L- 1范围符合比耳定律 ,复合物的表观摩尔吸光系数分别为 2 .31× 10 5和 6.63× 10 5L·mol- 1·cm- 1。方法用于麦片、花生、豆类及牛奶中蛋白质的测定 ,结果满意     

聚酰胺-胺型树枝状化合物与细胞色素C的结合作用

制备具有分子识别功能的材料 ,特别是设计合成某种分子 ,使其能够识别蛋白质表面 ,并干扰或促进蛋白质的特定生理功能 ,是生物有机化学中一个尚待解决的重要问题 ,也是揭开蛋白质分子识别与相互作用机理的重要问题 .人们对生物大分子———蛋白质分子之间的识别和相互作用进行了广泛的研究 ,总结出了一些规律 .( 1 )蛋白质复合物中最直接相互作用的残基数目共为 2 7～44个 ,相对与总的残基数来说很少 ,但是对分子间的识别和稳定作用却起决定性作用 ;( 2 )蛋白质复合物的接触面积为 6～ 1 0ｎｍ2 ,既需要比较大的接触面积 ,复合物才比较稳定 …     

蛋白质-四羧基铜酞菁体系的共振散射行为及其分析应用

在pH 3.0的Clark-Lub's 缓冲溶液中,蛋白质与四羧基铜酞菁(CuPc(COOH)4)作用,使体系的共振光散射增强,在λ=389 nm处光散射强度最大.增强作用的强弱与蛋白质的含量成正比,据此建立了共振光散射测定蛋白质的新方法.此方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、免疫球蛋白G(IgG)、鱼精蛋白(Protamine)、血清总蛋白(TP)的测定范围分别为0.05～1.60 mg/L、 0.025～1.60 mg/L、 0～1.45 mg/L、 0.1～1.50 mg/L、 0～1.60 mg/L,相应检出限分别为1.12×10-2 mg/L、 1.11×10-2 mg/L、 1.95×10-2 mg/L、 3.61×10-3 mg/L、 4.34×10-3 mg/L.方法应用于实际人血清样品中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝法基本一致.     

直接蒸馏法快速测定甘薯中蛋白质

1　引　　言直接蒸馏法是间接测定蛋白质的方法。原理是样品在强碱溶液中消煮 ,使蛋白质的不稳定氮素以氨的形式释放出来 ,释放的氨被接收到硼酸溶液中 ,用标准的盐酸滴定 ,测定样品中不稳定的氮素 ,然后用特定的回归方程计算样品中蛋白质含量。2　材料与方法2 .1　甘薯粉　取具有代表性试样 ,粉碎 ,烘干。2 .2　实验方法　称取甘薯试样 1ｇ于 5 0 0ｍＬ的凯式瓶中 ,加入 30ｍＬ的水充分混合。向凯式瓶中加 15ｍＬ 10 %氯化钡溶液 ,振摇 ,再加 40～ 5 0ｍＬ 45 %氢氧化钠溶液 ,立即连接蒸馏装置 ,蒸馏装置冷凝管的末端浸入盛有 40ｍＬ 2 %硼…     

蛋白质在表面活性剂与高分子共组双水相体系中 的分配

高分子和正负离子表面活性剂混合物可形成一种新型双水相体系。研究蛋白质在溴化十二烷基三乙铵/十二烷基硫酸钠与聚氧乙烯(EO)-聚氧丙烯(PO)嵌段共聚物(EO~2~0PO~8~0)共组双水相体系中的分配。通过在高分子接上亲和配基,研究蛋白质在带有亲和配基高分子的双水相体系中的分配。将表面活性剂富集相稀释或加热高分子富集相,又可形成新的双水相体系,由此可进行蛋白质的多步分配。在蛋白质的分配完成之后,通过将表面活性剂富集相进一步稀释或将高分子富集相加热至高分子浊点以上可将表面活性剂和高分子与目标蛋白质分离。正负离子表面活性剂和高分子还可以循环使用。     

用共振光散射技术研究蛋白质与丽春红2R的相互作用

在pH3．50的Britton-Robinson缓冲溶液中，丽春红2R与蛋白质发生结合反应，使最大波长为352．5nm的共振散射光谱得到加强。据此建立了利用丽春红2R作探针，用共振散射光谱技术测定蛋白质的新方法。散射光强度与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)和免疫球蛋白(IgG)的浓度在0．25～17．5μg／mL范围内成正比。方法的稳定性好，快速、简便，绝大多数氨基酸、金属离子均不产生干扰，用于人血清样品中蛋白质的测定，获得了满意的结果，加标回收率为93．4％～100．1％。     

微重力下的蛋白质晶体生长

空间微重力环境是研究复杂的蛋白质结晶过程和生长高质量蛋白质晶体的理想地方。于1992年8月应用国内研制的装置,在返回式卫星FSW-2上完成了空间蛋白质晶体生长实验。有6种蛋白质在空间长出了晶体,其中蛇毒酸性磷脂酶A_2和鸡蛋清溶菌酶的晶体明显优于地面对照实验长出的晶体,表明空间的微重力利于改进蛋白质晶体的大小、完整性、形态及内部有序性。     

傅里叶变换红外光谱法同时测定奶粉中蛋白质和脂肪含量

利用傅里叶变换红外光谱法同时测定奶粉中蛋白质和脂肪含量.以硫氰化钾为内标物,其特征峰2 061.8 cm-1为参比峰,蛋白质和脂肪的特征峰为分析峰,分别将蛋白质和脂肪的分析峰的校正面积(As)与参比峰的校正面积(AKSCN)比(R=As/AKSCN)对蛋白质和脂肪含量作工作曲线.确定酰胺Ⅰ带1 654.8 cm-1(1 600.0～1 733.3 cm-1)与参比峰(1 981.0～ 142.9 cm-1)的组合A1654.8/AKSCN最适合进行蛋白质定量分析,其线性回归方程C=3.871 R+10.88,相关系数为0.992 3;脂肪的C=0伸缩振动1 747.4 cm-1(1 719.0～1 766.7 cm-1)与参比峰(1 985.7～2 133.3 cm-1)的组合A1 747/AKSCN最适合脂肪定量分析,其线性回归方程C=29.13 R+3.531,相关系数为0.986 6.此方法的测定结果与凯氏定氮法和碱性乙醚提取法测定结果相比相对误差均小于±2.4%.     

提高MALDI-MS测量溶菌酶分子量灵敏度的研究

近 1 0年来 ,基质辅助激光解吸质谱 (MALDI- MS)作为一种新兴的“软电离”质谱技术 [1,2 ] ,已很快地应用于生物大分子特别是蛋白质研究领域 [3 ] .MALDI- MS可在 1 0 - 12 mol甚至 1 0 - 15mol的水平上 ,准确地测定分子量高达几万到几十万的生物大分子 ;还可通过改变基质、溶液条件和样品的制备方法等实现大分子蛋白质非共价复合物的质谱检测 [4 ] .MALDI- MS能够得到如此广泛的应用 ,在很大程度上要归功于基质的辅助效应 .基质的作用主要可以概括如下 [5～ 7] :(1 )削弱样品分子间的相互作用 ;(2 )与样品分子结合并使之快速结晶 …