盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因克隆及序列分析

为了克隆盘羊与巴什拜羊杂交后代短鄂、肺及鼻咽上皮细胞克隆1(SPLUNC1)基因cDNA全长序列,本研究根据GenBank上已公布的牛、山羊的SPLUNC1基因序列来设计简并引物,以盘羊与巴什拜羊杂交F1代为材料,克隆出盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因的片段序列,再利用RACE法克隆其SPLUNC1基因3′端和5′端,测序后拼接获得SPLUNC1基因全长cDNA序列。结果显示,盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因的cDNA全长为1117 bp,5′非编码区(UTR)为84 bp,3′UTR为265 bp,开放阅读框(ORF)为768 bp,编码255个氨基酸。预测该基因编码蛋白的等电点5.006,分子量26.57 kDa。系统进化分析表明,盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1氨基酸序列与绵羊的氨基酸序列同源性最高。本研究克隆了盘羊与巴什拜羊杂交后代SPLUNC1基因全长cDNA序列,为后续深入研究该杂交后代SPLUNC1基因的功能奠定基础。     

亚洲巨野羊——盘羊

中国人自古就将每一种生肖动物引申出美妙的联想和塑造出可爱的形象。关于羊的联想和形象我们知道的太多太多了——绘画、音乐、文学……几乎所有载体都涉及了羊的形象和羊的精神,似乎是羊的话题已经穷尽了。不,关于那些所有羊的形象和羊的联想的源头,世界所有家羊的祖先——那些数千年生活在莽莽自然之中,经历了复杂的进化历史延续到了今天——那些最早被人类驯化成家畜,确为早期的人类提供食肉和皮衣,那些一直与我们相依相伴而现在被我们现代人忽略、忘却甚至大肆屠杀的野羊们,在今天我们对自然环境有了新的认识之后,该走进它们的世界,了…     

猪Motilin和Ghrelin基因克隆及其真核载体的构建与体外表达

目的:克隆Motilin和ghrelin基因,构建表达Motilin的pDsRed-Express-motilin载体和表达ghrelin的pEGFP-ghrelin载体,并检测它们能否在真核细胞中表达及表达量的变化。方法:用RT-PCR方法分别从猪小肠和胃的cDNA上扩Motilin和ghrelin基因片段,并分别克隆到pDsRed-Express-N1载体和pEGFP-N1载体上,用脂质体法转染RIBS2细胞系(来自于肾),并用半定量RT-PCR和荧光成像法检测目的基因的表达。结果:构建了表达Motilin的pDsRed-Express-motilin和表达ghrelin基因的pEGFP-ghrelin载体,并能在真核细胞中超表达目的基因,为进一步相关研究提供了实验基础。     

中国美利奴羊BMP4基因的克隆、序列分析与真核表达

本实验利用RT-PCR技术获得妊娠105 d胎羊皮肤组织c DNA,PCR扩增获得中国美利奴羊BMP4基因全长编码区序列(CDS),将其克隆到zero PCR@TM-Blunt载体进行测序验证。获得的BMP4基因亚克隆至pc DNA3.1载体,构建绵羊BMP4真核表达载体,经脂质体2000转染293T细胞进行BMP4重组蛋白表达,Western blot鉴定表达产物。结果表明:中国美利奴羊BMP4基因编码区包含1227 bp,编码409个氨基酸,与其它哺乳动物氨基酸相似性达到92%,其成熟肽羧基末端区域具有TGFβ家族保守区结构。Western blot结果显示,重组蛋白分子量约为47KD,与预期一致,并证实人源BMP4单克隆抗体能够应用于羊BMP4研究。这为进一步的研究奠定了必要基础。     

结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及真核表达质粒pIRES-Ag85B的构建

目的:克隆并构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒,为进一步研究其在开发新型的结核病疫苗和结核病免疫诊断试剂奠定了基础。方法:采聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85B基因,然后用双内切酶消化PCR产物和pIRES质粒,用T4 DNA连接酶连接后,转化入感受态E.coli DH5a,产物铺AmpR抗性的平板,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定并进入blast网页比对测序的序列。结果:酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序比对后结果与目的基因完全一致,证实符合表达框架。结论:成功地克隆并构建Ag85B基因的真核重组表达质粒pIRES-Ag85B。     

昆虫抗菌肽的基因克隆与表达

介绍有关抗菌肽基因工程国内，国外的最新进展。     

欧美杨PdMODD基因克隆与表达特性分析

[目的]研究杨树重要胁迫响应新基因,为揭示杨树抗逆分子机制、培育优良抗逆杨树新品种提供理论依据.[方法]基于水稻MODD氨基酸序列,通过BLAST在美洲黑杨基因组中筛选得到3条基因(Podel.08G114100、Podel.10G158900和Podel.17G098500),并以其序列为参考,以'渤丰3号'杨cDN...     

昆明鼠乙酰胆碱酯酶基因克隆与表达

乙酰胆碱酯酶（ACHE）作为有机磷和氨基甲酸酯类农药的最适反应底物,在农药残留的快速检测中得到广泛应用,本实验根据家鼠AChE全基因序列设计并合成一对特异性引物,对昆明鼠脑组织AchE进行RT-PCR扩增,扩增产物经T-载体克隆、酶切鉴定和测序分析,结果表明：昆明鼠AChE编码序列长1845bp．经BLAST比对发现该序列与已报道序列（No．BC046327）的同源性为99．78％．构建原核重组表达质粒pET-AChE,并在E．coli中得到高效表达,表达蛋白的分子量约为68000．运用改进的Ellman法成功检测到重组表达蛋白的活性．     

山羊KLF17基因克隆与组织表达

克隆山羊Krüppel样因子17基因(KLF17)的c DNA序列,并检测其组织表达水平,为KLF17基因的功能研究奠定基础.随机选取2~3周岁的健康简州大耳羊和藏山羊羯羊各4只,屠宰采集山羊不同组织样品(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪),提取组织总RNA,利用RT-PCR法克隆山羊KLF17基因序列,进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测KLF17基因mRNA的表达水平.结果表明,克隆得到山羊KLF17基因c DNA序列1 450 bp,包含CDS区全长858 bp,5'UTR序列12 bp,5'UTR序列580 bp,编码285个氨基酸残基.其CDS区与牛、绵羊相比在5'端少99 bp,而在531位多出361 bp,这导致其编码区在858位提前终止.山羊蛋白序列较牛、绵羊少113个氨基酸残基.组织表达结果显示,KLF17基因在藏山羊肺中具有最高的表达水平,而在简州大耳羊皮下脂肪中具有最高的表达水平.两种山羊均在背最长肌中具有最低的KLF17表达量.这些结果表明KLF17可能在山羊脂质代谢过程中具有重要调控作用.     

鲤鱼LGP2的基因克隆与表达

利用反转录-聚合酶链式反应和互补脱氧核糖核酸(cDNA)末端快速扩增技术克隆得到鲤鱼的遗传和生理学实验室蛋白2(LGP2)基因的cDNA全长,并对其在鲤鱼抵抗病毒和细菌感染过程中的免疫作用进行研究。结果表明:鲤鱼的LGP2的cDNA全长共2 978 bp,开放阅读框为2 037 bp,编码679个氨基酸;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测鲤鱼的LGP2的信使核糖核酸(mRNA)表达于所有被测组织中,且在鳃和脑中的表达量较大,而在性腺和血液中的表达量较小;采用poly I:C和嗜水气单胞菌腹腔注射刺激鲤鱼后,各组织中LGP2的mRNA表达量均有所增大;LGP2是鲤鱼以依赖维甲酸诱导基因I样受体(RIG-like receptors,RLR)信号通路的方式进行抗病毒和抗细菌天然免疫过程中的重要调节因子。     

TePPO基因克隆及表达分析

万寿菊(Tagetes erecta L.)作为一种兼具观赏和经济价值的优质植物资源,在世界范围内广泛种植.文章依据万寿菊转录组数据,通过RNA提取、反转录克隆了万寿菊原卟啉原氧化酶(Tagetes erecta protopor-phyrinogen oxidase,TePPO)基因.PPO作为催化叶绿素合成的关键酶...     

大肠杆菌RsmH基因克隆及表达

以大肠杆菌全基因组DNA为模版,PCR扩增目的基因rsmh,构建pMD18-T-RsmH重组克隆载体和pET-28aRsmH重组表达载体,转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导表达RsmH蛋白,利用重组His-tag,通过Ni-NTA亲和层析对RsmH蛋白进行纯化。SDS-PAGE对RsmH蛋白进行定性分析,考马斯亮蓝法测定RsmH蛋白含量,确认获得质量浓度为3.91 g/L纯化的rsmh表达蛋白。     

神经营养素-3的克隆与真核表达

目的　构建人神经营养素 - 3(NT 3)的真核表达质粒 .方法　由于NT 3基因中无内含子 ,因此直接运用PCR技术从人基因组DNA中分离出人NT 3完整基因 ,与 pcDNA3.1(- )载体重组并测序 ,获得pcDNA NT3.用脂质体介导法将重组质粒转染人胚肾 2 93A细胞株 ,经G4 18筛选后 ,用RT PCR和免疫荧光法在转录和翻译两个水平上检测表达产物 .结果　测序证实所获得的是正确的重组质粒 .它的转录和翻译产物均可在细胞中检测到 .结论　成功地进行了NT 3的克隆与真核表达 ,NT 3基因修饰后的胚胎细胞有可能对神经轴突的生长起指导作用 .该实验结果为深入研究NT 3的生物学作用创造了条件 ,为基因修饰细胞移植治疗神经疾病的实验研究奠定了基础 .     

松江鲈MRF4基因克隆与组织表达分析

MRF4(myf6或herculin)基因属于MyoD家族成员之一,为成肌细胞分化成肌管的重要调控因子.本实验以松江鲈(Trachidermus fasciatus)肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE的方法,获得1 049 bp全长cDNA序列,包含了1个含有720个核苷酸的开放性阅读框(ORF),共编码239个氨基酸.其编码区序列与石斑鱼同源性最高、为91.81%,其次是东方红鳍鲀、为83.40%,与哺乳类、鸟类的同源性在65%左右,与爪蟾同源性最低仅为59.65%.预测松江鲈MRF4蛋白具有保守的HLH结构域,bHLH结构域形成剪刀状α-螺旋二聚体.用荧光定量PCR方法检测发现,MRF4基因的mRNA在松江鲈6种组织中均有表达,但其在肌肉组织中表达量极显著高于其他组织,提示其在肌肉的生长发育过程中起着重要作用.     

大肠杆菌麦芽糖转糖基酶 MalQ基因克隆与融合表达

用PCR方法获得E.coli K12 MalQ基因,将该基因插入原核表达载体pET-DsbA中,对质粒所含外源片段双向测序,并经BLAST比较分析,发现其与GenBank中报道的E.coli K12 MalQ基因的同源性高达99％。重组质粒转化E.coli BL21(DE3) plysS,经IPTG诱导后以融合蛋白形式表达,SDS-PAGE电泳显示MalQ基因与DsbA表达的融合蛋白在目标位置约103kDa处有明显条带。经薄层层析分析粗酶液酶处理的麦芽三糖溶液,证实粗酶液具有麦芽糖转糖基活性     

安哥拉山羊与建昌黑山羊杂交效应分析

以安哥拉山羊为父本级进交改良建昌黑山羊,观察杂种羊体形外貌, 定全尺,体重,产毛量,被毛品质及繁殖力。结果表明,F1、F2体尺、体重具有明显的杂种优势,F1育成羊体重,体重,体直长,胸围以及F2成年体重,体直长,胸围极显著高于建昌黑山羊（P＜0．01）,F2以上的杂种羊体形外貌趋向安哥拉山羊,白色个体F1,占90．0％,F2占93．5％,F3占100．0％,F3较F2同质个体增加12．76％（P＜0．05）,被毛密度增大,腹毛着生好,杂种羊被毛中无髓无的细度随代数增加而变粗,有髓毛则变细,成年母羊无髓毛和两型毛的重量比,F2占82．88％,F3占94．9％,杂种羊无髓毛强度和伸长随代数增加而增加,成年母羊剪毛量F1为0.53kg,F2为0.96kg,F3为1.04kg,净毛率2O地76．7％,F3为76．0％,繁殖成活率建昌黑山羊仅为63．8％,而F1、F2和F3分别比建昌黑山羊高12．6％（P＜0．05）、10．6％和7．2％。