PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因

根据金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的ＰＣＲ技术。利用该方法可从含有肠毒素Ｄ基因的金黄色葡萄球菌中扩增出ＰＣＲ产物。扩增产物具有特异性,长为３１６个碱基对。经限制性核酸内切酶ＨｈＩⅠ酶切证实扩增产物为ＳＥＤ基因片段。     

聚合酶链反应检测脐血及乳汁中乙型肝炎病毒DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术对乙肝病毒(HBV)血清学指标一项或多项阳性的产妇检测其脐血及乳汁中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV—DNA)。31名产妇共采集脐血标本20份,乳汁标本31份,有脐血标本者同时有乳汁标本,另11人仅有乳汁标本。检测结果:脐血中HBV—DNA阳性8例,阳性率40％;乳汁标本中HBV—DNA阳性11例,阳性率35.5％;脐血、乳汁双阳性4例,占20％。其中抗原阳性组检出率脐血46.5％,乳汁26.66％。结论:乙肝病毒可以垂直传播,也可通过乳汁传播;抗原阳性者传染性强于抗体阳性者;任何一项HBV血清学指标阳性均可能在脐血及乳汁中检出HBV—DNA。     

金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究进展

金黄色葡萄球菌是食品、医院内感染以及化妆品领域重要致病菌之一,建立和发展快速检测方法对于预防和控制该菌引起的疾病具有重要意义.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特征进行了简单介绍,并重点综述了近些年建立的常用金黄色葡萄球菌快速检测方法,分析比较了各检测方法的优缺点.     

聚合酶链反应对性传播疾病病原体检测的意义

应用聚合酶链反应技术（PCR）对184例男性性传播疾病进行检测，检出单纯淋菌感染79例（43％）；衣原体感染42例（22．8％）；解脲支原体感染28例（15．2％）；混合感染26例（14．1％），认为PCR技术对STD的诊断具有快速、准确的效果。     

免疫磁珠检测食品中金黄色葡萄球菌的研究

通过对金黄色葡萄球菌免疫磁珠添加量、免疫磁珠与菌液最佳反应时间、免疫磁珠分离金黄色葡萄球菌的敏感性试验、特异性试验的研究,确定了金黄色葡萄球菌抗体添加量50μg/m L、免疫磁珠添加量100μL,免疫磁珠与菌液最佳作用时间为30 min,免疫磁珠法检测灵敏度底限为10-9,相应的细菌浓度为14 cfu/m L.本试验制备的免疫磁珠灵敏性强,特异性高,大大节省了检测时间和费用.因此研究食品中金黄色葡萄球菌快速、准确检测方法以预防和控制食品安全事件的发生,具有重要的现实意义.     

用聚合酶链反应检测HBVDNA敏感性的探讨

本实验用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对５６例受检者进行乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ检测，并将结果与血清标志物检测结果比较，结果表明，在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃＡｇ同时阳性的受检者中，１００％可检测出ＨＢＶＤＮＡ。在血清标志物全阴性受检者中，也有４５％可测出ＨＢＶＤＮＡ。结合其他血清标志物的检测结果，说明用ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ是敏感的，在临床应用上也是可行的。     

应用聚合酶链反应检测血清中结核杆菌DNA的探讨

应用聚合酶链技术对89例肺部病人血清中结核杆菌DNA进行检测。结果表明PCR-TB-DNA检出率为72％。其中78例确诊为肺结核的病人的检出率为83％。由此可见血清PCR-TB-DNA有较高的应用价值。     

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况, 针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增, 建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法. 对18个21日龄鸡胚培养、分离, 获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落. 用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增, 证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18). 本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.     

微量元素硒对金黄色葡萄球菌的抑制作用

目的：观察5种浓度的亚硒酸钠对金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法：采用Kirby－Bauer纸片扩散法。结果：5种浓度的亚硒酸钠的抑菌环直径分别为10.2mm、12mm、13.8mm、15.6mm、16.8mm,青霉素和红霉素的抑菌环直径则各为7．2mm、9．4mm。结论：硒对金黄色葡萄球菌的抑制作用要强于青、红霉素（P＜0.001）,并与浓度呈正相关。     

用生物素标记核酸探针检测鼠金黄色葡萄球菌的研究

利用聚合酶链反应技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出 6 78bp耐热核酸酶nuc基因特异性片段 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验的探针 ,对实验动物的金黄色葡萄球菌及其临床样品进行了检测。结果显示 ,标记探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与链球菌、大肠埃希氏菌和巴氏杆菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交的检测灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 2 4 0份临床样品进行了检测 ,检出率为 2 9% (7 2 4 0 ) ,符合率为 10 0 %。这些试验结果表明 ,研究制备的核酸探针及建立的斑点杂交试验具有较高的特异性和敏感性 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测     

PCR技术详解及分析

介绍了PCR技术的发展过程、工作原理、反应要素、应用及质控条件,并对常见PCR技术问题进行了深入分析,同时也对新发展起来的PCR技术(荧光PCR、交转录PCR、原位PCR、单细胞PCR等)做了介绍,并提出了关健性的解决方法。     

应用聚合酶链反应技术检测库蚊抗性基因的初步研究

根据致库蚊有机磷抗性酯酶Ｂａ基因序列设计了两对引物，应用ＰＣＲ技术对广州部分地区的致倦库蚊ＯＰ抗性基因进行了测定。结果表明引物２、３扩增阳性率比引物１、２为高；实验室株及石牌、晓港、中山医医科大学、中山大学等４个地区自然种群抗性基因的扩增阳性率分别为３８％、２２．５％、２０％、１５％和７．５％。另外发现雄性库蚊出现的阳性率比雌蚊高。     

应用聚合酶链反应检测环境污水脊髓灰质炎病毒的研究

用聚合酶链反应技术检测５个市县１５份环境污水中肠道病毒，其中１１份阳性，与细胞中和试验鉴定阳笥结果符合率９０．９０％－１００％，该法不仅简单，敏感，特异分型，而且可作型内鉴别，使细胞中和试验分型和Ｔ特征型内鉴别所需１４ｄ缩短到２ｄ。为环境样品中脊髓灰质炎病毒污染提供了检测手段。     

应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒

将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经ＳＤＳ－酚裂解法提取总ＤＮＡ,并以此ＤＮＡ为模板,通过人工合成的两条２０ｍｅｒ引物进行ＰＣＲ扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白ＶＰ２基因中间１／３区段,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明：用ＰＣＲ扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的２７份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的ＤＮＡ片段（５３１ｂｐ）,而健康犬的肠溶物样品ＰＣＲ结果为     

应用PCR技术检测结核菌的临床研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对２４４例呼吸疾病患者临床标本进行结核菌ＤＮＡ检测，并同时与涂片抗酸染色结果进行比较。结果显示：１１２例结核标本涂片和ＰＣＲ检测阳性率分别为１６．１％和５２．７％，两者差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。９４例涂阴结核标本ＰＣＲ阳性达４５．７％。结果表明应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌ＤＮＡ具有快速敏感、特异性较高等优点，尤其对涂阴病人具有较大诊断价值     

小鹅瘟的PCR检测

通辽市某养鹅户饲养的640只雏鹅从5日开始死亡,死亡率达75%.经PCR检测后确诊为鹅细小病毒感染.     

应用PCR技术扩增DYZ 3 DNA特异顺序进行人类性别鉴定的研究

本文综合了Kogan等(1987)和Michal等(1989)的研究结果,设计合成了Y染色体α-卫星DNA特异的引物和Alu家族DNA特异的引物用于性别鉴定.该方法克服了原方法的不足,操作简便,成本低廉,能在更短的时间内完成实验.     

直接法提 取血清DNA后套式聚合酶链反应扩增乙肝病毒DNA

为进一步提高ＨＢＶＤＮＡ检测水平，改良了直接法提取血清ＤＮＡ技术，并用套式聚合酶链反应扩增ＨＢＶＤＮＡ。即以裂解液直接提取血清ＨＢＶＤＮＡ，用内外两对引物分别进行连续两次扩增。     

猴空泡病毒(SV40)PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测实验猴及生物制品中猴空泡病毒(SV40)的PCR方法。方法根据SV40-776株设计合成三对引物对现有毒株进行PCR扩增并克隆测序。用这三对引物对56份猴肾、肺、脾及10批脊髓灰质炎疫苗进行检测。结果三对引物均扩增出目的片段;56份猴脏器和10批疫苗SV40检测均为阴性。结论56只恒河猴和10批疫苗中未检测到SV40,所设计的三对引物检测结果准确,均可用于检测。     

PCR检测乳粉中肺炎克雷伯氏菌

利用PCR技术直接检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.