溶剂/流速双梯度-HPLC整体柱分析三七中药配方颗粒中4种皂苷成分

建立一种新的溶剂/流速双梯度-整体柱高效液相色谱法快速测定三七中药配方颗粒中4种皂苷成分. 通过乙腈浓度、流速与被测物的lg k线性相关性, 预测被测组分三七皂苷R₁, 人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re的适宜k值, 以测得的分离度为优化指标, 建立分离R₁, Rg₁, Re的最佳分离模式1和2|在此基础上, 通过考察乙腈浓度和流速随时间的变化率对分离人参皂苷Rb₁的影响, 以Rb₁与相邻杂质的分离度为优化指标, 得到分离R₁, Rg₁, Re, Rb₁的两种最佳模式. 应用色谱优化函数(COF)作为综合指标评价, 结果显示模式2优化效果更好. 采用模式2的色谱条件, 20 min内完成对三七配方颗粒中4种皂苷成分的质量分析, 结果表明该方法准确可行、快速.     

动态泡沫浮选法分离富集人参提取液中的二醇型人参皂苷

采用动态泡沫浮选法分离富集人参提取液中的二醇型人参皂苷, 用高效液相色谱法测定6种人参皂苷Rg₁, Re, Rb₁, Rc, Rb₂和Rd的含量. 考察了浮选液pH值、电解质NaCl浓度、载气流量、料液浓度及料液流速对人参皂苷浮选率的影响, 确定了动态泡沫浮选的最佳条件, 并与溶剂提取法、溶剂浮选法以及静态泡沫浮选法进行了比较. 结果表明, 动态泡沫浮选法对二醇型人参皂苷Rb₁, Rc, Rb₂和Rd具有高富集效率, 回收率分别为93.3%, 98.6%, 96.9%和98.3%, 而对三醇型人参皂苷Rg1和Re的富集效率却很低, 回收率分别为4.8%和4.2%. 该法是分离纯化二醇型人参皂苷的一种简便有效的方法.     

高效液相二极管阵列检测法同时测定复方丹参制剂中7个成分的含量

采用高效液相二极管阵列检测法同时测定3种复方丹参制剂中的7个成分:原儿茶醛、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。应用Zorbax C18柱,以0.1%磷酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/m in(22~28 m in,0.8 mL/m in),柱温30℃,检测波长203、270和281 nm。7个成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r>0.9992);加样回收率为94.4%~104.9%。该方法简单、准确、重现性好,可为全面评价复方丹参制剂的质量提供依据。     

人参二醇类皂苷的生物转化动态及人参稀有皂苷C-K或F2的制备

为了低成本有效制备人参稀有皂苷C-K或F₂, 将A. niger g.848菌酶用于转化含有人参皂苷(质量分数)分别为49.6% Rb₁, 25.9% Rd, 19.3% Rc和5.23% Rb₂的西洋参二醇混合皂苷. 霉菌发酵时, 采用人参二醇皂苷诱导物比人参提取液诱导物的产酶总活力提高10%~15%. 所产的2种诱导酶均能水解人参二醇皂苷的3-O-和20-O-多种糖基, 均为人参皂苷酶Ⅰ型; 但是人参二醇皂苷诱导物所产酶几乎全部转化人参二醇皂苷为C-K, 而人参提取液诱导物所产酶则残留中间产物. 使用黑曲霉人参二醇皂苷诱导所产酶, 在转化西洋参二醇皂苷的动态研究中发现, 酶反应1.5~2.5 h, 主要为产物F₂; 酶反应12 h后, 主要产物为C-K皂苷. 基于此, 40 g人参二醇类皂苷在45 ℃粗酶反应24 h, 经处理得到含C-K质量分数为87%的23 g酶反应产物, C-K转化率达85%(摩尔分数). 用40 g西洋参二醇皂苷在45 ℃粗酶反应2.5 h, 经处理得到含有质量分数为58%的F₂和27%的C-K的26 g酶反应产物, F₂转化率为50.4%, C-K转化率为29.5%. 通过人参二醇皂苷诱导的黑曲霉粗酶转化人参二醇类皂苷动态研究, 建立了C-K转化率为85%, F₂转化率为50%的制备方法, 为大批量制备提供了基础依据.     

基质辅助激光解析质谱成像可视化分析三七皂苷空间分布

根据2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)、石墨烯(GR)、氧化石墨烯(GO)和碳纳米管(CNT)5种基质混合人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁以及三七皂苷R1 3种标准品得到的质谱信号,选取DHB为基质。将20μm厚度的三七根茎冷冻切片真空干燥40 min后,在循环60次、喷雾强度30%、喷雾时间1 s、孵育时间40 s、干燥时间60 s的条件下,将DHB均匀覆盖于切面。质谱数据采集质量范围为m/z 0～1500 Da,使用PEG-600进行质荷比校准,以1000 Hz频率的正离子反射模式进行基质辅助激光解吸质谱成像(MALDI-MSI),观察到10种皂苷在三七根茎木栓层、韧皮部、木质部以及髓部的3种空间分布情况,同时对质谱数据进行t-分布领域嵌入算法分析(t-SNE),实现了2年生和3年生三七根茎的区分。本研究为三七根茎组织中代谢物的表征提供了原位、可视化的方法,也为三七根茎的特异性提取提供了有价值的信息。     

重组嗜热β-葡萄糖苷酶转化稀有人参皂苷Rd和CK

利用高效液相色谱(HPLC)法, 对重组嗜热β-葡萄糖苷酶(Fpglu1)转化稀有人参皂苷(Rd和CK)进行研究, 并表征了其催化动力学参数. 利用同源模建和分子动力学模拟等生物信息学技术, 探究了Fpglu1转化人参皂苷的结构基础及其相互作用. 结果表明, Fpglu1能够水解人参总皂苷生成稀有皂苷Rd和CK, 其催化人参皂苷Rb₁, Rb₂和Rc的K_m值分别为0.318, 1.840和5.269 mmol/L; 酶的转换数(k_cat)值分别为144.191, 0.572和0.011 s^-1. 当转化时间分别为6和102 h时, Rd和CK的产率达到最大, 分别为60%和93%. 通过对该酶的结构预测及皂苷分子的对接研究发现, 底物位于由疏水性氨基酸构成的底物口袋中, 氨基酸残基Glu194和Glu367是参与催化作用的关键, 且实验测得的酶促反应动力学参数(K_m)与对接的相互作用能量值存在线性关系.     

重组β-木糖苷酶转化人参皂苷Rb3及C-Mx

从Aspergillus niger NG1306菌株中扩增得到β-木糖苷酶基因anxyl, 与pPICZαA连接构建了表达载体pPICZαA-anxyl, 进一步在毕赤酵母KM71H中诱导表达获得了目的酶蛋白重组β-木糖苷酶(Anxyl); 并将其用于人参皂苷Rb₃及C-Mx的生物转化及催化动力学参数表征. 研究结果表明, Anxyl可将人参皂苷Rb₃和C-Mx分别转化为人参皂苷Rd和C-K. 酶学性质研究表明, 该酶最适反应pH=2.5, 最适反应温度为35 ℃; 在pH=2.0~5.0, 20和30 ℃条件下其具有较好的稳定性, Mg²⁺对酶活具有促进作用. Anxyl对葡萄糖和乙醇有较好的耐受性, 其催化对硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷(pNPX)、 人参皂苷Rb₃和C-Mx水解的米氏常数(K_m)值分别为3.1, 1.55和1.04 mmol/L, 酶的最大反应速率(V_max)分别为1.9×10², 0.8×10³和8×10³ mmol/min, 酶的转换数(K_cat)值分别为5.55, 0.17和1.85 s^-1, 表明该酶对天然底物Rb₃和C-Mx具有更高的亲和力.     

流速/溶剂双梯度反相高效液相色谱法快速同时测定复方丹参片中7种有效成分

采用整体柱建立了流速/溶剂双梯度反相高效液相色谱法快速同时测定复方丹参片中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rd,Rb2及丹参酮ⅡA 7种有效成分。通过对溶剂和流速双梯度体系的逐步优化,并应用色谱模拟软件Dry Lab,得到分离7种成分的最佳色谱条件。采用色谱柱Merck Chromolith Performance RP-18e(100 mm×4.6 mm),以乙腈-水为流动相体系,流速/溶剂双梯度洗脱,柱温30℃;片剂中的7种成分在21 min内达到基线分离;Rg1在60.60~242.40 mg/L(r=0.999 0)、丹参酮ⅡA在16.52~66.08 mg/L(r=0.999 9),其余皂苷在30.70~142.66 mg/L(r≥0.999 4)范围内具有良好的线性关系;定量下限(S/N=10)为21~124μg/kg,回收率为96.7%~100.1%。该方法能在短时间内同时分离不同极性的化合物,提高被测物的柱效,减少半峰宽和拖尾,可应用于复方丹参片中7种成分的含量分析。     

人参中达玛烷型皂苷的化学转化产物结构和转化途径研究

利用高效液相色谱-电喷雾-多级串联质谱(HPLC-ESI-MSⁿ)技术分析人参中3种达玛烷型皂苷(三七皂苷R₁,人参皂苷Rd、20(S)-Rg₃)在12-磷钨酸环境中转化的产物结构和转化途径。由原人参三醇型皂苷R₁转化获得9种产物:20(S)-25-OH-R₂、20(R)-25-OH-R₂、25-OH-T₅、20(S)-R₂、20(R)-R₂、20(S)-25-epoxy-R₂、20(R)-25-epoxy-R₂、T₅、3β,12β-二羟基-6α-(2-O-β-D-吡喃木糖基-β-D-吡喃葡糖氧基)达玛烷-20(22),24-二烯。由原人参二醇型皂苷Rd和20(S)-Rg₃转化得到10种产物:20(S)-25-OH-Rg₃、20(R)-25-OH-Rg₃、25-...     

反向迁移毛细管胶束电动色谱分离测定复方丹参片中5种皂苷的含量

采用反相迁移毛细管胶束电动色谱方法分离测定了复方丹参片中人参皂苷Rd、Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1等5种皂苷的含量。考察了SDS、有机改性剂和磷酸浓度、样品溶剂及进样时间对样品分离和检测灵敏度的影响。最佳缓冲溶液组成为:10mmol/L磷酸-140mmol/LSDS-14%(V/V)乙腈-15%(V/V)异丙醇(pH=2.4),样品溶剂为20%甲醇-10mmol/LSDS,压力进样时间为12s。在最佳条件下,5种组分在27min内达到高效分离(柱效为1.1~1.6×106N/m),在一个数量级浓度范围内线性相关系数为0.9975~0.9993,日内和日间精密度分别小于4.8%和5.5%,回收率为96.5%~103.6%。该方法用于复方丹参片中皂苷类成分含量的测定,简单、快速、灵敏、准确。     

New method for high-performance liquid chromatographic separation and fluorescence detection of ginsenosides

A novel pre-column derivatization method for the quantitative determination of ginsenosides by HPLC with fluorescence detection was established. The double bond at the C₂₄–C₂₅ position of ginsenoside was converted into an aldehyde group by means of ozonolysis. Then the aldehyde group reacts with FMOC-hydrazine forming the ginsenoside FMOC-hydrazone. The derivatized products were separated by RP-HPLC with gradient elution. The detection limits of ginsenosides Rg₁ and Rb₁ were 2.0 ng (about 2.5 pmol) and 1.0 ng (about 0.9 pmol), respectively. This method can be used for all ginsenosides having the C₂₄–C₂₅ double bond.     

复方丹参片中四种成分的高效液相色谱-电化学检测-紫外检测法分析

建立了电化学检测器与二极管阵列检测器联用的液相色谱(HPLC-ECD-DAD)同时分离和测定复方丹参片中原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA 等4种成分的分析方法。采用Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm i.d.,5.0 μm),以甲醇和0.4%磷酸为流动相(流速1.0 mL/min)进行梯度洗脱;ECD检测电压0.7 V,DAD检测波长270 nm,柱温30 ℃。实验结果表明,原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA质量浓度分别为0.3～9.0 mg/L,1.1～54.0 mg/L,1.1～11.1 mg/L和5.2～52.0 mg/L时与其峰面积呈良好的线性关系(线性相关系数均高于0.999),原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸和丹参酮ⅡA的平均回收率(n=6)分别为97.8%(相对标准偏差(RSD)为2.15%),98.2%(RSD为2.07%),97.6%(RSD为2.18%)和97.2%(RSD为2.07%)。该法同时利用了ECD和DAD的优点,是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可以为复方丹参片的质量控制提供科学依据。     

Phase Diagram of RbI-SmI_2 Binary System and Structural Investigation of RbSm_2I_5 and RbSmI_3

The RbI-SmI2 , binary system was studied with DTA and X-ray powder diffraction. Its phase diagram shows that it has a congruently melting compound,RbSm2I5 , with a melting point 524℃; an incongru-ently melting compound, Rb2SmI4 , with an inconsruently point 467℃ and two compounds, RbSmI3, and Rb3SmI5, being decomposed at 433℃ and 460℃, respectively. The measured structure of RbSm2I5 shows that it is isomorphous with NH4 Pb2 Cl5 space group P21/c, a=10 . 063(3)A, b=9.003(3)A. c =14 . 242(5)A°,β=90.23(3)°;z = 4, MVx= 1 94 . 3cm3/mol;D=5.255g/cm3 and Do =5. 334g/cm3 (25. 0℃).The structural, investigation ofRbSmI3 shows that it belongs to the orthorhombic system with a = 15.914(6)A, b=8.898(3)A c =12.193(5)A; Z=8, MVx =130.0cm3/mol, Dx =4 . 743g/cm3,Do = 4.597g/cm3(25.0℃).     

Improved LC Method for the Simultaneous Determination of Five Active Components in Danshen and Its Preparations

A novel LC method for the simultaneous determination of tanshinone IIA, tanshinone I, cryptotanshinone, dihydrotanshinone, and salvianolic acid B in Danshen and its preparations was developed on a 3 μm particle-sized ODS short column. The five analytes were well separated within 45 min with good linearities (r ² > 0.9999), precises (<4.0%) and recoveries (97.9–105.3%) by a gradient elution of acetonitrile-0.1% aqueous trifluoroacetic acid (v/v). In addition, ultrasonic extraction procedures for sample preparation were optimized using an orthogonal array design. Quantitative determinations on nine herb samples and four preparations demonstrated the developed approaches were suitable for standardization of this herb and its preparations.

     

导数－同步荧光光谱法同时测定三种B族维生素的研究

研究了维生素B₁的氧化产物(硫色素)、维生素B₂和B₆混合物体系的导数-同步荧光光谱,提出了混合物体系荧光光谱被分辨开的同时测定方法。该法可不经分离直接测定复合维生素片剂中维生素B₁、B₂及B₆,其线性范围均为0～1.0μg/mL,检出限分别为0.5、1.5及4.0ng/mL.