集胞藻PCC6803脂肪酸脱饱和酶基因desD在转基因水稻中的表达

为了提高水稻的耐冷性，从集胞藻PCC6803中克隆酰基脂肪酸脱饱和酶基因desD与植物表达载体pCAMBIA1301连接，构建了重组质粒pCdesD。采用农杆菌介导的水稻愈伤组织转化系统将desD基因成功地导入粳稻中花11号和朝鲜的平壤21号中，获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析，证明外源基因已导入并整合到水稻的基因组中；分子检测外源基因单拷贝整合的转化体在T1代呈现3：1的分离。Northern杂交结果表明该基因在mRNA水平上获得表达。低温胁迫处理后，对转基因水稻进行脂肪酸成分和光合生理分析，结果表明转基因水稻提高了不饱和脂肪酸含量，光合生理也得到了改善，水稻的耐寒能力明显增强。     

不同光周期反应的等基因系与农垦58s杂交后代的育性遗传

农垦５８ｓ与一对感光性不同的等基因系杂交，观察了Ｆ１～Ｆ５代的生育期和育性的变化．生育期从Ｆ２代起出现连续变异，并有超亲类型．Ｆ１代结实率为５４．８％～７５．１％，可以认为不育性是隐性性状，Ｆ１～Ｆ５代的育性呈连续分离，在Ｆ２代没有３：１或１５：１的分离比例，到Ｆ５代不育性还不能稳定．不育株（结实率＜１０％）的抽穗期连续分布于整个杂种群体的抽穗期间，而不局限于某一抽穗期间，表明感光性和光敏性是基本独立遗传的，但不同组合又有差异，与感光性弱的Ｌｍｃ杂交的偏早，与感光性强的Ｌｍｕ杂交的偏晚，表明感光性与光敏性又有一定的联系．     

水稻抗稻瘟病、绿叶蝉和黄萎病基因BAC克隆的物理定位

植物单拷贝短序列的染色体原位杂交的检出率一直很低．水稻ＢＡＣ克隆作为一种大容量载体的基因组克隆因其独特的优点已被应用于水稻基因组研究．用生物素标记了两个水稻ＢＡＣ克隆，这两个克隆分别含与抗稻瘟病基因Ｐｉ－５（ｔ）、抗稻绿叶蝉基因Ｇｌｈ和抗稻黄萎病基因ＲＴＳＶ在连锁图中等位的ｃＤＮＡ标记ＲＺ５６５和ＲＺ２６２，并用其进行了水稻染色体原位杂交．它们分别被定位在水稻第四染色体长臂距着丝粒百分距离４０％和短臂１００％处．由于供杂交ＢＡＣ克隆含与３种抗病基因等位的标记，因此这些克隆的位置也就是供测抗病基因的位置．杂交检出率由迄今沿用的质粒克隆探针杂交的１０％以下提高到了４６．８％和５９．２％．检出染色体的号数与遗传图确定的染色体相符，证实了用ＢＡＣ克隆进行染色体原位杂交的优越性，为广泛利用水稻ＢＡＣ克隆进行单拷贝小片段基因的定位打下了基础．     

维吾尔族长寿老人红细胞ABO血型遗传多态性分析

在维吾尔族长寿老人最稠密的和田地区，调查了维吾尔族长寿老人红细胞ABO血型遗传多态性，对维吾尔老人红细胞ABO血型、基因频率分布情况进行研究，被调查的200例长寿老人中，B血型中占39％、AB血型占28％、A血型占24％、O血型占9％，有以下特征：表征分布为B＞AB＞A＞O，基因频率Y＝0．2793，P＝0．3022，q＝0．2012；DP为0．8077，文中对红细胞ABO血型在不同非长寿人群中的分布进行了比较分析，这对于长寿的机理、生化、人类分子遗传学及临床分子医学研究具有重要意义。     

玉米大斑病抗性基因ht2的原位杂交物理定位

通过对与玉米大斑病（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｔｕｒｃｉｃｕｍ）抗性基因ｈｔ２紧密连锁的２个玉米ＲＦＬＰ分子标记ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３的染色体原位杂交定位，推断了大斑病抗性基因ｈｔ２的物理位置．ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３在遗传图中位于第八连锁群上，它们的探针分别同时与第三和八染色体进行了杂交，平均信号检出率为１２．１３％；它们在第八号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别是３３．３０±１．４１和３４．４７±２．７５，在第三号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别是５１．４１±２．７５和５６．５４±２．９４．基因ｈｔ２在遗传图上位于第八连锁群的ｂｎｌ１２．３０和ｕｍｃ９３之间，因此，ｈｔ２在染色体上的物理位置应为第八号染色体长臂，百分距离为３３．３０和３４．４７之间．在第三号染色体长臂上两个供试ＲＦＬＰ标记的分布区之间也可能有ｈｔ２的同源顺序．     

野生稻抗白叶枯病遗传分析及转育效应研究

研究了不同类型的野生稻对江陵６９１，ＰＸＯ６１和Ｔ７１７４三个白叶枯致病菌系的抗性遗传及转育效应．普通野生稻２号与四个栽培稻杂交组合Ｆ２群体的抗性遗传分析表明：普遍野生稻２号带有三对相互独立遗传的显性抗病基因；其中一对同时支配对供试三菌系的抗性，并且与显性基因Ｘａ－４和Ｘａ－７非等位，与隐性基因ｘａ－５及ｘａ－ｃ独立遗传；另两对则分别只控制对江陵６９１和Ｔ７１７４之一的抗性．利用杂种胚和Ｆ１幼穗培养，可有效地将非ＡＡ型野生稻抗病性转育至栽培稻之中．     

5个中华按蚊种群对溴氰菊酯的抗性及抗性选择反应

经浙江省 5个中华按蚊自然种群和敏感品系对溴氰菊酯抗性测定 ,发现其致死中浓度 ( LC50)都比各自的敏感品系高 ,特别是来自温州的中华按蚊 ,其抗性比率 ( RR50)达 11倍之多 . 将各自然种群的蚊虫进行抗性筛选 12代 ,发现其抗性水平与敏感品系相比 ,高达 130～ 190倍; 与其自然种群相比达 10～40倍 . 来自温州种群的抗性品系的选择性反应 ( R值 )小于 0. 1,而其它抗性品系大于 0. 1,这表明从抗性概率较高的自然种群中筛选的抗性品系 ,其抗性增加速率低于那些从抗性概率较低的自然种群中所筛选的抗性品系 ,即 5个自然种群的抗性潜能应该是相似的 . 最后对相应的蚊虫防治策略进行了讨论 .     

羧甲基茯苓多糖上调HBV转基因小鼠树突状细胞功能

采用1％羧甲基茯苓多糖（CMP）腹腔注射，摘取乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠脾脏，制备淋巴细胞，MTT（噻唑蓝粉剂）法观察CMP对淋巴细胞的毒性作用；经粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）培养转基因小鼠脾脏来源树突状细胞（DC），ELISA法检测DC分泌IL-12以及刺激混合淋巴细胞反应T淋巴细胞分泌IL-10、IFN-γ的含量．CMP在0～500mg／L浓度对HBV转基因小鼠无毒性作用，并能显著促进HBV转基因小鼠DC分泌IL-12，在混合淋巴细胞反应中，能显著促进T淋巴细胞分泌IFN—γ并抑制IL-10的分泌，从而上调DC功能．     

人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析

采用特异性mRNA富集技术，从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆，序列分析表明，该基因cDNA序列由2389个碱基对组成，包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF)，3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴。Northern杂交显示，在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA，大小约为2．5kb；多组织RNA点杂交分析结果进一步表明，novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高，在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达。     

新质源水稻雄性不育系马协A的遗传分析

用马协Ａ和珍汕９７Ａ与１３个水稻品系杂交，对两者的遗传行为进行了比较．结果表明，马协Ａ和珍汕９７Ａ的恢保关系基本相同；它们与丛广４１Ｂ、密阳２３的杂交后代表现一对基因的分离规律，与明恢６３的杂交后代表现２对基因的遗传规律；等位性测验表明两者的核不育基因是等位的．马协Ａ和珍汕９７Ａ在遗传上属同一类型．     

利用烟草高效转化功能基因体系的建立

对农杆菌介导的烟草遗传转化条件进行探索,以20 mg/L的潮霉素作为转化苗的筛选压,稀释至OD600为O.2～O.3的农杆菌对外植体浸染15 min,于添加300 mg/L头孢霉素的生根培养基中诱导生根,可稳定获得较高的阳性转化率.经PCR和PCR-Souttlern检测,阳性转基因植株达84.8%以上.通过本研究建立了一种稳定高效的功能基因烟草遗传转化体系.     

籼稻幼胚组织培养高频率植株再生及其基因转化的研究

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,研究了激素对愈伤组织诱导及植株再生的影响。ＭＳ＋２,４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ作培养基,愈伤组织诱导率达１００％;愈伤组织在ＭＳ＋ＫＴ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化频率为６７．３％,在此基础上利用基因枪转化技术,将外源的ｂａｒ基因导入了水稻基因组,转基因植株表现出对除草剂Ｂａｓｔａ很强的抗性。     

一种水稻愈伤组织特异性启动子的克隆及其应用

筛选标记基因是一种用于植物遗传转化后阳性转化子筛选的有效手段,但目前介导标记基因表达均采用组成性启动子.这些启动子虽然在植物遗传转化得到了广泛应用,但由于是组成性表达,在转基因的生物安全性存在标记基因的安全性担忧.为了克服这一缺点,本文从水稻基因组内克隆了水稻半胱氨酸蛋白酶基因(Cyctein protease,CP)的启动子,通过gus转基因的验证,该启动子只在愈伤组织表达,不在水稻根、茎、叶等组织表达,为愈伤组织特异性表达启动子(Callus-specific Promoter,CSP).将该启动子用于介导筛选性标记基因的表达,通过对筛选性标记基因潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)的密码子优化,明显提高了CP启动子在水稻转基因选择的转化效率,质粒转化效率和阳性植株率均达到了pCAMBIA1301的35S启动子介导标记基因hpt的选择效果.     

新疆甜瓜组培体系的优化及抗病转基因研究

选用新疆优良甜未成熟子叶切块作为外植体，经过组织培养获得再生植株，以MS为基本培养基，取3日龄子叶块外植体，选用MS＋6－BA0－2.5mg/L诱导丛生芽，最高诱导率可达89％，在整个再生体系建立过程中，6－BA的浓度逐渐降低，在生根培养培养基中，附加活性炭和硝酸银有利于极的诱导，在甜瓜高效再生体系基础上，用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜中，经卡那霉素的抗性筛选，获得转化的再生根植，用PCR反应，点杂交及SDS－PAGE等手段，进一步研究了再生植株的基因整合与达情况，经PCR扩增反应和琼脂糖电泳检测，在转化植株中扩增出了特异片段，点杂交检测转化植株有阳性反应，SDS－PAGE分析表明，转化植株比对照在35.5KD处有一条明显的蛋白质谱带，其分子量与几丁质酶基因表达产物分子量相符，初步确定该基因在转化植株风得到正常表达。     

摄食转牙鲆生长因子基因集胞藻的大菱鲆血液指标及微核研究

以实验室养殖的幼小大菱鲆和养殖场养殖大菱鲆幼鱼为研究对象，研究了转牙鲆生长因子基因集胞藻作为饲料添加剂对鱼类血液生理生化指标和红细胞微核率及核异常率的影响。研究结果显示，转基因集胞藻对大菱鲆血液红细胞和白细胞数量、血红蛋白含量及红细胞体积没有影响（p〉0.05）；1.0％添加剂量没有引起血清转氨酶活性及碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶活性增加（p〉0.05），实验组血清蛋白质、葡萄糖、甘油三脂、胆固醇、尿素氮和肌酐含量以及钾、钠、氯、磷浓度与对照组之间也不存在显著性差异（p〉0.05）；转基因集胞藻对红细胞微核及核异常没有诱导作用。结果表明转基因集胞藻不会引起大菱鲆组织器官损伤，也没有遗传毒性，是一种安全的转基因饲料添加剂，可以用作大菱鲆促生长剂使用。     

新疆天蛾科昆虫区系组成

记术了新疆天蛾科昆虫30种和亚种及其他地理分布，寄主植物和区系组成，新疆天蛾科区系中亚细亚种为主，有12种，占40％；泛古北种7种，约占23%，亚州种6种，占23％，欧洲－西伯利亚种2种，约占7％；全产区1种，特有种2种，即罗布麻天蛾Hylea chamyla (Denso)，库尔戛天蛾Sphingonaepiopsis kuldiaenensis(Graeser).     

凋亡抑制基因P35对杆状病毒增殖的影响

以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographacali for nica Nuclear Polyhedrosis Virus,Ac     

泽苔草居群内遗传多样性

采用RAPD分子标记对泽片学湖甲膈群10个家系共60个子代样品进行了家系间及家系内的遗传多样性分析，12个有效引物共广：生91条带，其中83条带表现出多态性，占91．21％．各个家系的基因多样性在0.1l～0.23之间（家系水平为0．27），Shannon指数在0．17～0.34之间（家系水半为0．41）．分子变异分析（AMOVA）结果显示家系间的基因分化系数（Gst）为0．277，说明家系问的遗传变异占27．7％，家系内的遗传变异占72．31％，家系间和家系内的变异均极显著（P〈0.001）．基于家系间的遗传分化系数（Gst）估测家系间的基因流（Nm）为0.65．采用UPGMA法埘所有子代聚类结果表明：同一家系的子代个体并不能完全聚在一起．     

灰绿藜耐盐基因CgNHX转导新疆陆地棉的初步研究

以新疆陆地棉为实验材料,通过花粉管通道法向优质棉花高代材料中导入了灰绿藜耐盐基因CgNHX．经过三年连续转导的结果显示：①大田注射期间的天气状况对转导成功影响较大．当昼夜温差较大且有露水时,花和铃的状态较好,导致结铃率、卡那霉素检测阳性率增加;②棉叶基因组DNA的提取质量与棉叶采后冷藏的时间有一定相关性．采后一周内提取的棉叶DNA质量较好,PCR检测获得30％的阳性率,而两周及以后的棉叶DNA质量降低,PCR检测未获得阳性结果;③在mRNA水平上检测转基因植株的表达较为困难．本实验中PCR检测阳性的30份样品,在RT—PCR检测中均未获得目的基因的明显特异扩增条带,只有部分样品在目的条带的位置出现弥散带型．本研究初步显示外源基凶CgNHX已导入棉花受体中,但其表达情况还需进一步检测验证．     

昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析

依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础.