一种观察体内细胞骨架的电镜方法

迄今为止对细胞骨架的形态与分布的研究,几乎全部是在组织培养细胞中进行的。这主要是由于研究活体组织中细胞时要进行切片,而引入的包埋介质限制了去垢剂进行提取等重要而有效的技术手段的应用。然而,有关的研究结果已充分显示出体外人工培养条件,特别是对固体基质表面的附着,造成了骨架系统的一系列显著改变。本文试用新鲜活体组织为材料,在Bright5030型低温切片机上快速冷冻并切成2—8μ厚切片,用盖玻片条或电镜载网取下切片,立即放入37℃的含有非离子型去垢剂TritonX—100(浓度为0.5％)和戊二醛(浓度为2％)的微管稳定性缓冲液中进行处理,或先行提取随之进行固定。用系列提高浓度的乙醇脱水后,临界点干燥,喷镀金膜,用扫描电镜观察,或在固定后用醋酸双氧铀染色。再经脱水和临界点干燥,以透射电镜观察。从而提供了一     

用高压电镜与立体视镜观察整装细胞内病毒与细胞骨架的关系

以前,我们曾发现牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)可诱导大量对松胞素B不敏感的微丝,而且病毒的释放与微丝结构有某种关系。在此基础上,我们用整装电镜技术对细胞骨架与成熟病毒的关系做了进一步地探讨。将牛肾次代细胞培养在敷有方华膜和鼠尾胶膜的金网或镍网上,接种病毒24小时后,在室温下用戊二醛和锇酸固定细胞,并用醋酸双氧铀染色1小时,再经脱水和临界点干燥后,于日本JEM—200CX电镜下观察,加速电压200KV,同一视野以8度之差,拍摄二张照片,用于立体视镜观察。正常牛肾细胞的边缘,细胞质膜完整,骨架系统层次分明,线粒体等细胞固定在细胞骨架网络上。在IBRV感染的细胞中,细胞骨架发生了明显的变化,其层次减少,微丝束增多,分布似乎更有方向性。许多区域细胞质     

超高压电镜用于研究细胞骨架

细胞骨架与细胞器关系的研究一向受到技术上的限制。因为超薄切片法不能很好地反映立体关系,而去垢剂整体提取的方法虽能保持良好的骨架,却使各种细胞器丧失殆尽。超高压电镜(HVEM)具有较强的穿透力,并可同时显示细胞骨架纤维及其它细胞结构,是较为理想的观察手段。本文选用了具有突出扁平形态的印度黄麂(Indian Muntjac)转化细胞(细胞平均厚度约0.5—1μ,核部位也仅2μ左右),更加充分发挥了超高压电镜的长处,可直接观察完整的细胞。我们在日产JEOL-JEM1000电镜上,以1000千伏工作电压对麂细胞进行了观察。麂细胞骨架极为发达,在超高压电镜下致密的纤维网架充满整个视野,以致其它各种细胞结构都不同程度地被骨     

一种观察细胞骨架的简易整装电镜制样方法

本文介绍一种显示细胞骨架的简易有效的整装电镜制样方法。24孔培养板上钻以直径为2.5mm的圆孔,覆上0.25%的Formvar膜后,成为培养细胞的良好支撑物,然后在原位对培养的细胞进行抽提、固定和二氧化碳临界点干燥,相差显微镜下观察、选择和定位,再以浸湿的单目铜网置于圆孔上,自然干燥后取上已覆有Formvar膜的铜网,即可进行标本的观察。该方法材料来源容易、经济,操作简便,成功率较高,并可减少盲目的电镜观察及人工假象,所得的细胞骨架图像清晰。     

几种免疫电镜方法在病毒检测中的应用

应用免疫电镜技术(IEM)直接检测病毒和抗体的免疫复合物,对于低浓度病毒的电镜检查具有很大价值。它能有效地提高病毒粒子捡出率,并可根据免疫反应的特异性鉴别病毒,灵敏度高,方法简捷。目前得到公认的方法有吸附法、装饰法、吸附结合装饰二步法、集群法四种,传统的离心沉淀法已趋淘汰。我们以长叶车前草花     

印度黄麂细胞骨架系统的电镜研究

细胞骨架决定细胞的形态与运动,并参与多种细胞生理活动。在已研究的多种体外培养的细胞系(株)中,细胞骨架具有很大共性。印度黄麂(Indian Muntjac)转化细胞系是一种在生物学研究上很有应用价值的成纤维细胞,而我们的初步研究表明其骨架纤维在组织及排布上都与已知模式有很大区别。为了更好地在电镜观察中显示细胞骨架系统的空间排布及其纤维的成分和走向,我们主要采取了下述样品制备技术:①对生长于载网及盖片上的细胞用非离子型去垢剂Triton×-100整体提取,在扫描、透射电镜下进行观察,并变换拍摄角度,拍成立体象对。②对生长于塑料培养碟中的细胞经原位包埋后,连同塑料基质一起进行水平的和垂直的定向切片。观察表     

细胞骨架系统的立体电镜观察

从两个角度拍摄同一物体,可得到具有“强烈”立体感的一对“体视”照片。细胞骨架具有复杂的空间排布。本文应用体视技术,用透射电镜、扫描电镜和扫描透射电镜对体外培养细胞的骨架系统进行了观察,描述了生长在载网上,并经triton x—100消化的小儿包皮成纤维细胞的骨架纤维,特别是张力纤维的空间分布及其与核的关系,并观察了细胞松驰素 B(Cytochalasin B.简称CB)所引起的骨架系统的改变。CB破坏含actin的非张力纤维的微丝结构,所造成的较大的不定形团块可连在张力纤维上。而多数团块是被微管和中等纤维互相牵拉而悬浮在细胞质各处。同时,这些纤维也因为团块的形成而变得互相靠拢,往往局部平行成束。与此同时,细胞骨架网状结构中出现空洞。在不同高度上,这些空洞的位置常常是一致的。本文还对样品制备和显微照相时的有关问题进行了讨论。     

应用电镜技术研究云南家蚕病毒

目的　应用电镜负染技术、观察、诊断家蚕病毒病、初步检测到两种家蚕主要病毒 CPV和NPV。家蚕病毒病在我国分布甚广、在传统性蚕病中所占比重约为 70～ 80 % ,目前有 4种主要病毒病 ,即质型多角体病毒 ( CPV)、核型多角体病毒 ( NPV)、传染性软化病毒病 ( IFV或 FV) ,浓核病毒 ( DNV) [1] 。在 4种病毒病中 ,质型多角体病毒危害尤为突出 ,约占病毒病的 75 %。材料与方法样品采自本院蚕蜂研究所试验场。采用负染色法 ,取病蚕中肠上皮细胞 ,经研磨得到病蚕汁液、应用漂浮法 ,2 %钼酸铵 ( p H6 .4)负染 ,将制备好的样品置于 JEM- 1 …     

节约电镜标本制作材料的几种方法

节约电镜标本制作材料的几种方法宋小明（南京八一医院电镜室，南京２１０００２）制作电镜标本的材料，大多靠进口，价格昂贵，本文主要介绍几种节约的方法。一、用斜瓶法节约锇酸先制作一个斜瓶槽（如图１），方法：将白铁皮折成“楼梯”状，然后放平即成斜瓶槽。将用锇...     

几种诊断测试系统的简单方法

测试系统的状态是否正常关系到测试器件的准确性和测试精度。有经验的硬件工程师和软件工程师经常会发现有时测试系统虽然自诊断通过，但测试器件时却参数测试不准确、功能测试失效等。这往往叫人无从下手。本文介绍几种通过软件编程、利用简单仪表来有效的诊断测试系统的方法。     

一种简单的电镜样品平板包埋法

本文介绍一种用投影仪胶片进行平板包埋的方法。此法简便,无需硅化,胶片与包埋剂分离容易,清晰透明,便于定位取材。     

应用电镜技术对病毒混合感染的研究

有证据表明 ,一些严重影响畜牧业发展威胁畜禽健康的主要疾病在临床症状 ,病理变化和致病性等方面都发生了一些不同于经典型病例的改变 ,例如潜伏期缩短 ,康复期推迟 ,死亡率增加 ,病理变化严重等等。这些后果的产生除了病原本身可能会发生的变异或是出现新的病毒株之外 ,另一个重要的原因就是混合感染。混合感染无疑会对疾病的诊断和治疗产生十分不利的影响。到目前为止 ,在临床上广泛应用的各种血清学方法都是针对一种病原的 ,要对多种病原的混合感染做出准确的诊断是一件很麻烦的事。应用电子显微镜技术对病毒混合感染进行检测具有其它方…     

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察孙晓陆王钫肖英王建梅（新疆农科院中心实验室，乌鲁木齐８３００００）甜菜黑色焦枯病是世界范围的甜菜种植中的毁灭性病害。本文报告了甜菜黑色焦枯型病原病毒（ＢＢＳＶ）的电镜与免疫电镜观察结果。寄主鉴别在防虫网室中以常规摩擦...     

一种中草药提取物对病毒DNA作用的电镜研究

我们对某种中草药的提取物进行了研究分析,认为这种中草药提取物MMC是一种蛋白活性物质。这种有效的活性蛋白在众多的中草药中并不多见。经一系列的生化,分子生物学的研究,推测它可能是对DNA发生作用。为7证实这个判断,本研究应用了电镜核酸技术。方法:将MMC与乙肝病毒质粒DNA在68℃中作用10分钟,使用细胞色素C DNA铺展技术制备样品,经铂-钯金属喷镀,电镜观察。结果:1.对照组(未经药物作用):DNA呈超盘旋形态,见图1,DNA缠绕紧密,个小。2.实验组(药物作     

应用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的超微结构

采用冷冻蚀刻技术研究了GPV、IBRV和NDV等几种病毒的超微结构,初步取得如下结果: 一、在冷冻蚀刻样品中,GPV呈球形(在细胞质内)或近似球形(释放到细胞外),直径约300nm,这与在超薄切片或负染色样品中所见的病毒形态和大小有很大的不同。二、IBRV囊膜的PF和EF面上,均可见到直径5—9nm的膜内微粒。GPV囊膜膜内微粒的数量及其在PF面和EF面上的分布与IBRV不同。细胞质内与细胞外成熟的GPV囊膜的膜内微粒也有明显的差异。三、在GPV毒浆基质中,可观察到由直径5—10nm颗粒的聚集或规则排列形成的弓形、环形、及直径150—400nm大小不等的球形结构。实验结果显示了冷冻蚀刻技术在病毒形态结构和形态发生,尤其在病毒囊膜结构研究中的优越性。对这一技术在病毒学中的应用进行了讨论。     

植物病毒的电镜诊断

本文介绍了植物病毒新的分类和命名系统，综述了植物病毒电镜诊断的常规技术和以及各个病毒属的形态学特征。在ＩＣＴＶ报告的１１科、４７属共７８９种植物病毒中，花椰菜花叶病毒属、杆状ＤＮＡ病毒属、番茄斑萎病毒属、苜蓿花叶病毒属、双生病毒科、吸肠孤病毒科、弹状病毒科等七个具有典型形态特征的属或科，以及螺旋对称结构的杆状及线状病毒，通过负染色可作出诊断。寄生细胞的病理变化尤其内含体的形态结构也是诊断的重要依据     

应用电镜技术对牛流行热病毒形态学的研究

牛流行热病毒(BEFV)属于单股负链病毒目(Mononegavirales)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病病毒属(Lyssavirus)成员。该病毒能引起牛流行热(又称牛暂时热或三日热),对养牛业造成很大的经济损失。本研究使用的材料是培养在BHK_(-21)细胞上的牛流行热病毒。应用负染色、超薄切片等方法制备样品,JEM-1200EX型电镜观察。通过电镜观察和研究,得出以下结果:1.病毒的基本形态,呈锥形(图1,2)、弹形(图3,4,5)、窝窝头形(图5)。大小为180X85nm。典型结构,外有囊膜,该囊膜是由纤突和病毒膜构成,内有螺旋对称的核衣壳(图4,5)。     

电镜技术在病毒性肝炎诊断和研究上的应用

本文综述了电镜技术在甲、乙、丙、丁和戊型病毒性肝炎，包括新发现的数种病毒性肝炎诊断和研究上的应用情况，并简介了有关材料来源和处理及标本制备技术。资料显示，电镜技术在各型病毒性肝炎的发现，证实及病因研究上起重要作用。     

貂细小病毒的电镜和免疫电镜观察

1949年,Schofield于加拿大发现细小病毒引起的貂急性传染性肠炎,此后,美国、日本及欧洲等养貂国家也有发病报导。在我国,姜廷秀等81年报导了我国发生“疑似水貂病毒性肠炎”。我们对辽、鲁、冀、青、内蒙等养貂密集地区进行了流行病学调查,发现1983年冬至84年春局部地区曾出现四次暴发,种貂发病率为83.4％,死亡率为15.1％。为了确诊本病,对采集的自然感染病貂粪样品用氯仿处理后负染观察,发现了典型的细小病毒粒子。病毒粒子直径约20mμ,有实心、空心、内有类核三种形态(图1)。