α-淀粉酶和糖化酶的表达及酿酒酵母工程菌的构建

将切除了５′端非编码区５０碱基对片段的黑曲霉糖化酶ＧＡＩｃＤＮＡ与大麦α淀粉酶基因重组进大肠杆菌酵母穿梭载体,构建重组表达质粒ｐＭＡＧ１１,转化酿酒酵母ＧＲＦ１８,获得含α淀粉酶和糖化酶双基因的酵母工程菌ＧＲＦ１８（ｐＭＡＧ１１）．在酵母ＰＧＫ基因启动子和终止信号的调控下,α淀粉酶和糖化酶基因获得高效表达,９９％的表达产物分泌至胞外．在含ｗ＝１５％的可溶性淀粉的ＹＰＳ培养基中培养４４ｈ,淀粉水解率达到９９％,并能发酵产生酒精     

重组DNA技术在酿酒酵母遗传操作中的应用

在传统的食品和酿造工业中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）占有十分重要的地位。如今，这种简单的单细胞真核生物已成为遗传研究的一种模式。本文简要综述了重组DNA技术应用于酿酒酵母遗传操作的研究进展，并指出了重组DNA技术作为新的遗传操作的手段，其应用性明显优于经典的遗传操作方法.     

利用Cre-LoxP重组系统构建gdh1基因敲除的酿酒酵母重组菌

基于PCR介导的基因敲除原理,采用Cre-LoxP重组系统技术,对2倍体酿酒酵母的SS04菌株的gdh1基因进行敲除操作,构建gdh1基因完全缺失型的酿酒酵母重组菌SS17菌株,进而为后续重组酵母的乙醇代谢研究打下基础.     

羧甲基淀粉的生产和应用

羧甲基淀粉(CMS)是一种高分子碳水化合物,系淀粉的一种衍生物。它可以用各种植物淀粉,在醇类分散剂存在下,以苛性碱为催化剂,氯乙酸为羧甲基化试剂进行反应而制取。羧甲基淀粉的质量一般以克分子取代度(MS)表示。羧甲基淀粉具有优良的水溶、粘结、膨胀和分散的功能,因此它的应用领域十分广泛,生产量和使用量也日益增加。我国羧甲基淀粉的生产始于1958年,后因粮食紧张而停顿下来。八十年代以来,它的生产和应用重新受到注目。     

羧甲基淀粉的生产与应用

简述了羧甲基淀粉（ＣＭＳ）的生产原料、制备方法。产品质量指标及其应用途径。     

淀粉直接发酵酒精的菌株选育──内孢霉酵母与酿酒酵母属间原生质体融合

本研究旨在构建直接发酵淀粉生产酒精的酵母菌．选择具α－淀粉酶和葡萄糖淀粉酶活性的Ｅ．ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａＥ１１灭活的原生质体，与耐高温产酒率高的Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＨＢ－６－９单倍体进行属间原生质体融合．经３５％ＰＥＧ－５０ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２诱导，在再生选择培养基上融合率１．０～１．５×１０－６，获得１２个性能稳定的融合株．部分融合株生长速度、淀粉水解能力、可溶性淀粉直接发酵酒精的能力明显高于两亲株．     

酿酒酵母高产菌株的木薯酒精产业化生产试验

【目的】对酿酒酵母高产菌株Ygxas-49木薯酒精产业化应用进行试验。【方法】先在200t发酵罐进行分批发酵,对该菌株的各个发酵指标进行评估,再将可行的方案进一步放大至年产12万t酒精生产线上进行生产稳定性试验,最后为考察该菌在产业化应用上的潜力,在200t发酵罐进行高浓度酒精发酵试验。【结果】200t发酵罐分批发酵结果表明:与生产对照菌株相比,酒度提高8.92%,发酵时间减少12h以上,其他发酵指标基本相同。采用该菌株生产酒精可以提高酒度,大大节约发酵时间,增加设备利用率,从而降低酒精生产成本。12万t酒精生产线稳定运行30d结果表明:与生产对照菌株相比,酒度提高5.35%,发酵时间减少10h以上,其他发酵指标基本相同。200t发酵罐高浓度酒精发酵结果:酒度为15.1%(V/V),发酵时间为56h,与目前文献报道最高生产水平(酒度13.5%,V/V;发酵时间69h)相比,酒度提高11.85%,发酵时间缩短13h。【结论】Ygxas-49菌株应用于工业化生产,各项工艺指标均显著优于国内目前最高水平,具有良好的工业化应用前景。     

PLA/热塑性淀粉和PLA/亚麻纤维可降解复合材料的性能研究

使用熔融共混方法,制备了PLA/热塑性淀粉(PLA/TPS)和PLA/亚麻纤维(PLA/FF)复合材料.研究结果表明,随着热塑性淀粉或者亚麻纤维用量的增加,PLA复合材料的拉伸强度和断裂伸长率都有所降低;而PLA的结晶速率呈现显著增大,并且晶粒细化;添加热塑性淀粉或者亚麻纤维,能够增加PLA复合材料的降解速率.     

淀粉衍生物的性质及其应用

淀粉是一种可再生资源,作为精细化工的原料,应用广泛。本文简单介绍了淀粉的结构特点,并按改性方法对其衍生物进行分类,介绍相应衍生物的性质和他们在食品、涂料、造纸以及粘结剂等领域中的应用。     

短小芽孢杆菌C-9葡聚糖内切酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)C-9中克隆得到葡聚糖内切酶基因,该基因包含1980 bp核苷酸,编码559个氨基酸,其N端有一个预测的29个氨基酸的信号肽序列;以YIp5质粒为骨架,构建rDNA介导的多拷贝整合载体,实现葡聚糖内切酶在酿酒酵母中的高效、稳定表达。与对照菌株相比,含有葡聚糖内切酶基因的重组酿酒酵母可以在以羧甲基纤维素为唯一碳源的培养基上生长。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

利用RT-PCR技术,从人脐带静脉上皮细胞中克隆人组织型纤溶酶原激活剂基因,将其接入TA克隆载体PCR2．1中,经DNA序列测定后,以该重组质粒DNA为模板,用PCR方法获得了人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)基因,将其转入pET29a,构建了重组表达质粒pET29a／K2tPA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,构成工程菌．经IPTG诱导表达,在40kDa处有一明显表达条带,表达量为约占菌体总蛋白的20％．该菌种在贮存与复苏及传代过程中具有良好的质粒稳定性和表达稳定性．     

重组人尿激酶原基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

利用RT－PCR技术,从人脐带静脉上皮细胞中克隆重组人尿激酶原基因,用表达质粒pET29a构建了重组质粒pET29a/prouk,并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,作为工程菌。经IPTG诱导表达,在46kDa处有一明显表达条带,表达量为约占菌体总蛋白的20％。该菌种在贮存与复苏及传代过程中具有良好的质粒稳定性和表达稳定性。     

高效降解苯酚的酵母菌筛选及其降解特性研究

为了更有效处理含酚废水 ,用生物流化床驯化活性污泥 ,富集、筛选高效的苯酚降解菌 ,最后分离得到一株酵母菌 ,经鉴定为瓶形酵母属 (Pityrosporumsp .) .这株酵母菌可降解10 0 0mg/L的高浓度苯酚 ;降解苯酚的最适环境条件为温度 30℃ ,pH 6～ 7,振荡速率大于 15 0r/min ,在培养基中补加适量的氮、磷对提高苯酚的降解速率非常重要 .酵母菌降解苯酚能力强 ,菌体体积较大 (10 .9～ 19.8μm× 10 .9～ 31.7μm) ,沉降性能好 ,不仅能有效地处理含酚废水 ,而且能生产单细胞蛋白     

基因工程菌Pichia pastoris连续培养的生长及抑制动力学

在同一稀释率μ（μ＝0．14h^-1）下用不同浓度的甘油流加进行连续培养,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母（Pichia pastori）生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量（DCW和WCW）、底物得率系数（Yx/s）、底物比消耗速率（qs）、呼吸熵（RQ）与二氧化碳释放率（CER）都有影响,在低甘油残留浓度（＜63．3g／L）下,甘油是激活剂,菌体生长符合Monod方程,Ks＝19．62g／L,甘油激活常数Ka＝19．45g／L;而在高甘油残留浓度（＞63．3g/L）下甘油是抑制剂,菌体生长特征符合Haldance方程,Ks＝0．014g／L,K1=156．67g／L。毕赤酵母生长的甘油抑制浓度为55．2g／L。     

木薯酒精酵母菌种工程化选育的思路和方向

我国木薯酒精企业的发酵水平低,而国内酵母研究技术水平较高,但其选育的优良酵母菌种未能在企业得到推广应用,原因是高酒度等性能的酵母菌种需要改变现有工艺条件。因而,在不改变现有工艺条件下提高菌种的优良性能是木薯酒精酵母菌种选育的原则。本文在总结我国木薯酒精发酵技术现状的基础上,分析木薯酒精生产企业对酵母性能的要求,提出了现有工艺条件下酵母菌种工程化选育的思路和方向,为木薯酒精酵母菌种选育提供参考。     

啤酒废酵母的综合利用研究进展

分析了啤酒废酵母中的有效成分及研究利用现状,同时对啤酒废酵母的破壁问题进行了讨论.     

锌酵母的培养及性能

根据锌的耐受量实验,筛选对锌吸收较好酵母为实验菌株。研究培养条件对酵母细胞锌的含量及生物量的影响,探讨药用锌酵母中有机锌的形态与锌的吸收率。     

bFGF真核表达载体构建及表达

旨在构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子（basic Fibroblast Growth Factor,简称bFGF）的真核表达载体，以便用于研究bFGF基因治疗在骨组织工程中的应用，应用基因重组技术，将已经克隆的bFGF基因从PBR322－bFGF载体上亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1上，构建的重组质粒经脂质体介导转染3T3细胞，36h后观察瞬时表达情况，酶切，PCR和DNA测序结果均证实了插入片段的正确性，免疫组织化学检测bFGF的表达分泌情况，结果显示部分经转染的细胞呈阳性（棕色颗粒）。结果表明已成功构建了bFGF真核表达载体pcDNA3.1-bFGF，并且bFGF能够在3T3细胞表达。     

降解毒死蜱多功能菌株的构建及其对土壤的修复作用

将实验室保存的有机磷降解酶基因mpd连接到自杀性质粒pUT-Km1上,构建重组质粒pUT-M,通过三亲杂交,将mpd整合到越南伯克氏菌B418的染色体上,获得多功能工程菌株。实验证明工程菌株的原有解磷、解钾、固氮活性没有改变;48 h后对溶液中毒死蜱降解率达到65%;对室内模拟污染土壤有一定的降解能力,20 d对土壤中的毒死蜱降解率达91%。     

高选择性重组菌在含Hg2+环境中的生长富集Hg2+耦合及其连续处理Hg2+废水

研究了在低营养含汞环境中,高选择性汞富集基因工程菌E.coliJM109(表达MerT、MerP汞特异结合转运蛋白和金属硫蛋白MT,该菌简称为M1)的生长富集耦合行为.考察了汞离子浓度、离子强度、络合物、共存金属离子等环境因素对其生长富集Hg2 耦合行为的影响;并且利用连续操作搅拌槽式生物反应器,实现了对有机废水配伍的含汞废水的连续化处理.