高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质

利用多分离柱高速逆流色谱仪,研究了聚乙二醇1000(PEG1000)-磷酸盐双水相体系的固定相保留率及该体系对蛋白质混合物和鸡蛋清样品的分离。以14.0%PEG1000-16.0%磷酸盐体系的上相为固定相,在流速0.6 mL/min和转速900 r/min的条件下,固定相的保留率达到33.3%。在pH 9.2的PEG1000-磷酸盐双水相体系中,细胞色素C、溶菌酶和血红蛋白的分配系数差异最大,采用该pH值的14.0%PEG1000-16.0%磷酸钾盐双水相体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了这3种蛋白质的混合物。鸡蛋清中的主要蛋白质成分卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶在pH 9.2的15.0%PEG1000-17.0%磷酸钾盐体系中也具有最大的分配系数差异。采用该体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了鸡蛋清样品,得到的卵白蛋白、溶菌酶和卵转铁蛋白的电泳纯度分别为100％,100％和60％,收率均大于90％。     

手性逆流色谱的研究进展

总结了手性逆流色谱的5个特点,系统地介绍了逆流色谱的手性分离以及高速逆流色谱手性分离中氨基酸衍生物、环糊精衍生物、手性有机酸、多糖衍生物、牛血清白蛋白等手性选择剂的应用。     

流体动力学逆流色谱分离柱研究进展

近年来,以流体动力学为基础的逆流色谱仪在天然产物与生化药物分离中得到了广泛应用。柱设计是色谱体系的核心环节,分离柱管子的几何形状、安装方式,分离柱的位置、体积等因素都会对色谱行为和分离效率产生不同的影响。本文对基于流体动力学的现代逆流色谱分离柱的研制进展与应用情况进行综述,并对未来逆流色谱的改进进行了展望。     

逆流色谱分离中选择性试剂的应用研究进展

逆流色谱中添加选择性试剂可有效提高分离度,常用选择性试剂主要有金属离子、多糖衍生物、阴离子表面活性剂、离子对、手性试剂、p H-区带逆流色谱中酸碱试剂等6类。该文综述了国内外选择性试剂在逆流色谱分离中的应用研究进展,介绍了其基本原理,阐述了不同选择性试剂的适用范围,并展望了选择性试剂发展的新趋势。     

高速逆流色谱研究进展

综述了近年来高速逆流色谱（HSCCC）在分析、半制备和制备分离天然产物、蛋白质、抗生素、无机物等领域的研究和应用进展,总结了适用于HSCCC的溶剂体系,并展望了HSCCC与质谱联用、pH区带逆流色谱和离子对逆流色谱新技术的应用前景。     

多肽和蛋白质的反相高效液相色谱研究--色谱行为的多样性

以Ｃ８柱为固定相,研究了微管结合蛋白２中两段重要肽段（肽１,肽２）和猪胰岛素在反相色谱上的保留行为。当以甲醇溶液为流动相时,猪胰岛素保留因子的对数值（ｌｎＫ’）随流动相有机溶剂体积分数（ψ）的变化呈现很好的线性关系。当以乙腈为流动相测定肽１的ｌｎＫ’随ψ变化关系时,所得结果显示ｉｎＫ’与ψ呈现良好的二次曲线关系。以乙腈为流动相测定肽１和肽２和Ｖａｎ’ｔ Ｈｏｆｆ曲线（ｌｎｋ’与１／Ｔ的关系图）时,     

反相液相色谱在蛋白质及多肽分离分析中的应用

反相液相色谱是一种以疏水作用为基础的色谱分离模式。由于它具有分辨率高、重复性好、回收率高等优点,在蛋白质及多肽的分离分析中得到了极为广泛的应用。本文简要介绍了反相液相色谱及其分离机理,对其在蛋白质和多肽研究中的应用如分离纯化、肽图分析、酶活测定、构象变化检测及疏水作用研究等作系统综述,并展望了反相液相色谱在这一领域的发展前景。     

pH区带逆流色谱研究进展

pH区带逆流色谱是在逆流色谱基础上发展起来的一种新型制备型分离技术。利用物质解离常数和疏水性的不同进行分离,具有分离量大、分离效果好等优点,应用领域比较广泛;简单介绍了该技术的分离原理及分类,并对该技术在氨基酸衍生物、肽衍生物、染料、生物碱和异构体等分离纯化中的应用及其改进方向进行了较为全面的总结,展望了其发展前景。     

高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展

介绍了高速逆流色谱的分离原理,综述了自2005年以来其在天然产物化学成分分离、提纯方面的应用（引用文献59篇）。     

夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化

采用pH-区带精制逆流色谱与常规高速逆流色谱相结合的方法快速分离纯化夏天无总生物碱.利用pH-区带精制逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶ 5∶ 2∶ 8, V/V, 上相加5 mmol/L三乙胺,下相加5 mmol/L HCl)为溶剂系统,上样量3.0 g,分离得到1个混合物和3个高纯度的生物碱单体:原阿片碱(375 mg)、苏元胡碱甲(362 mg)和比枯枯灵(246 mg), 其纯度分别为97.5%,95.6%和97.1%.所得混合物850 mg经常规高速逆流色谱二次分离,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶ 0.8∶1.1∶ 1, V/V)为溶剂系统,得到比枯枯灵(105 mg)和四氢巴马亭(470 mg)单体,纯度分别为99.1%和99.7%.从该药材分得苏元胡碱甲,两种制备分离模式相结合,提高了夏天无生物碱的分离效率.     

逆流色谱分离镅(Ⅲ)和铕(Ⅲ)的研究

选择0.1 mol/L NaC lO4为流动相,以二氯苯基二硫代膦酸的二甲苯溶液为固定相,研究了萃取剂浓度、流动相pH及流动相流率对逆流色谱(CCC)分离Am3 和Eu3 效果的影响。结果表明,在实验条件下,两者的分离系数随着固定相中的萃取剂浓度增加、流动相的pH升高而增大;降低流动相流率后可明显改善分离效果。通过改变分离条件,Am3 和Eu3 可基本上实现相互分离,两者间的分离系数和分离效率分别达到2.87和0.74。     

高速逆流色谱法分离和测定甾体激素

用自制的高速逆流色谱仪分离两酸睾丸素和氢化可的松注射剂，以氯仿－甲醇－水为溶剂体系及优化的色谱条件，对样品组分作了有效的分离，以苯甲酸为内标，获得令人满意的定量结果，标准偏差小于０．８％。     

Countercurrent Chromatography for the Measurement of the Hydrophobicity of Sulfonamide Amphoteric Compounds

Octanol-water partition coefficients (P _o/w ) of 17 sulfonamides (SAs) were determined by countercurrent chromatography (CCC). The measured P _o/w values were in the 0.002–46 range (–2.65 < log P _o/w < 1.7). The lipophility of these compounds depends on the pH showing a maximum for intermediate values. The apparent P _o/w coefficients of SAs were obtained at 5 pH values: 2, 3, 5, 7 and 11, using 0.01 M ammonium phosphate octanol saturated buffers. A theoretical model linking these values with pH for amphoteric compounds was checked and verified. Often the P _o/w coefficients of the molecular forms obtained with the CCC method differ significantly from literature values obtained using softwares and/or from experimental values calculated with extrapolation. The CCC method allows also the determination of the P _o/w coefficients of the ionic forms of the SAs, cationic forms at low pH values and anionic forms at elevated pHs. The acidity constants were also estimated using the theoretical model. Relationships between SA retention factors obtained by RPLC and hydrophobicity were also discussed.     

逆流色谱分离感应耦合等离子质谱在线测量超痕量钚

将逆流色谱（CCC）与感应耦合等离子质谱（ICP-MS）相联,研究了几种两相体系在CCC中的固定相保留率,从中选择1％TNOA-正庚烷作固定相,通过CCC富集分离钚并去除基体及干扰元素,通过研究在线分离条件及定量方法等,建成了CCC分离ICP—MS在线测量超痕量钚的方法。采用该方法分析得到实际土壤样品中^239Pu的含量与由传统的分离方法给出的结果相吻合。     

高速逆流色谱分离同分异构体

应用高速逆流色谱法对同分异构体的分离纯化进行研究。实验结果表明,以正己烷-乙酸乙酯-水(体积比为1∶10∶10)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,进行二次高速逆流色谱分离,可从茶多酚中分离出g级的儿茶素同分异构体——(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和(-)-没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),其高效液相色谱纯度均在98%以上。选择四氯化碳-氯仿-甲醇-水(体积比为7∶3∶7∶3)为溶剂系统,下相为固定相,上相为流动相,经一次高速逆流色谱即可将药物中间体溴代苯胺同分异构体进行有效的分离。     

高速逆流色谱与硅胶柱色谱结合分离制备高纯度芦荟素异构体

芦荟素是芦荟叶中主要的蒽醌类成分,通常以芦荟素A和B两种非对映异构体形式并存,目前已成为许多芦荟产品质量控制指标之一。采用高速逆流色谱和硅胶柱色谱结合的方法,从老芦荟干粉中分离制备了高纯度的芦荟素A(纯度为98%)和芦荟素B(纯度为96%)样品,并采用快原子轰击质谱(FAB-MS)和核磁共振氢谱(1H NMR)以及GOESY(gradient-enhanced nuclear Overhauser effect spectroscopy)等方法对所得的两个芦荟素异构体的立体构象进行了确认。该法具有制备量大和分离效率高的特点。     

Recent Advances in Countercurrent Chromatography

Countercurrent Chromatography (CCC) is a special form liquid-liquid partition chromatography which entirely eliminates the use of solid support matrix. Its development began in the mid-1960s and first introduction of CCC is in 1970. In its early stage of development, the method was hindered by a limited mobile flow rate since the application of higher flow rates resulted in excessive loss of the stationary phase from the column.     

Countercurrent chromatographic separation: a hydrodynamic approach developed for extraction columns

In countercurrent chromatography (CCC) both stationary and mobile liquids undergo intense mixing in the variable force field of a coil planet centrifuge and the separation process, like the separation in conventional solvent extraction column, is influenced by longitudinal mixing in the phases and mass transfer between them. This paper describes how the residence time distribution (or the elution profile) of a solute in CCC devices and the interpretation of experimental peaks, can be described by a recently developed cell model of longitudinal mixing. The model considers a CCC column as a cascade of perfectly mixed equal-size cells, the number of which is determined by the rates of longitudinal mixing in the stationary and mobile phases. Experiments were carried out to demonstrate the validation of the model and the possibility of predicting the partitioning behaviour of the solutes. The methods for estimating model parameters are discussed. Longitudinal mixing rates in stationary and mobile phases have been experimentally determined and experimental elution profiles are compared with simulated peaks. It is shown that using the cell model the peak shape for a solute with a given distribution constant can be predicted from experimental data on other solutes.     

高速逆流制备分离中药黄柏中的生物碱

 利用高速逆流对传统中药黄柏中的生物碱类活性成分进行了制备分离。两相溶剂分离系统采用氯仿 甲醇 0 5mol/LHCl(体积比为 2∶1∶1) ,并对制备物进行了薄层分析。证实了生物碱成分 ,检出了小檗碱。     

薄层色谱在高速逆流色谱溶剂系统选择过程中的应用

本文对薄层色谱在高降流色谱的溶剂系统选择过程中的应用进行了研究，发现根据薄层色谱的斑点色度可以观察样品中各组分的含量差别及其在两相溶剂中分配系数间的差异，由此来判断溶剂系统的适用性，并确定哪一层适宜作流动相。