高效液相色谱-质谱分离鉴定荧光试剂标记的脂肪酸

以2-(2-(10-蒽基)-萘[2,3-d]咪唑)-乙基-对甲苯磺酸酯(ANITS)作为柱前衍生化试剂,在Eclipse XDB-C8色谱柱上,梯度洗脱实现了20种游离脂肪酸(FFA)衍生物的完全基线分离。90℃下在DMF溶剂中以K2CO3作催化剂,选取衍生试剂摩尔数为脂肪酸的7倍,衍生反应40min可获得稳定的荧光产物。激发和发射波长分别为250nm和512nm。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了油菜蜂花粉中游离脂肪酸的质谱鉴定。所有脂肪酸的线性相关系数均大于0.9999,检出限为24.76~98.79fmol。     

蛋白质荧光标记中协同效应的高效液相色谱

以牛血清白蛋白和胰岛素为研究对象, 经1,5-I-AEDANS衍生后, 采用高效液相色谱(HPLC)进行分离分析, 发现两者的衍生存在明显的协同作用.     

高效液相色谱荧光测定及质谱鉴定土壤和苔藓中的脂肪酸

以吖啶酮-9-乙基对甲苯磺酸酯(AETS)作荧光衍生化试剂,建立了灵敏、简单的游离脂肪酸反相高效液相色谱测定方法。在Ec lipse XDB-C8色谱柱上,实现了19种游离脂肪酸(FFA)衍生物的完全基线分离。选取AETS摩尔数为脂肪酸的6倍,以DMF作溶剂,在85℃条件下以K2CO3作催化剂可获得稳定的荧光产物,条件温和、衍生产率高。利用柱后在线串联质谱以APC I大气压化学电离源正离子模式实现了各组分的质谱定性。对土壤和3种苔藓植物中(树藓、狭叶绢藓、曲尾藓)FFA组分定量结果表明,苔藓植物从土壤中富集了大量的游离脂肪酸。荧光检测的激发和发射波长分别为404 nm和440 nm。绝大多数脂肪酸的线性相关系数大于0.9996,检出限为12.3~43.7 fmol。本方法具有良好的重现性,用于实际样品测定,结果满意。     

高效液相色谱荧光检测法分析氨基酸

氨基酸的分析方法应用最普遍的是离子交换色谱法。在-SH存在下,邻苯二甲醛(OPA)与伯氨基在柱后反应产生荧光物质进行氨基酸的检测是一种有效的微量分析法。而亚氨酸则须先用次氯酸钠氧化再与OPA反应。整个系统如图1如示。我们应用此法分析了谷物的总氨基酸和茶叶中的游离氨基酸含量。     

高效液相色谱及薄层色谱分析蔗糖脂肪酸酯

采用薄层色谱（ＴＬＣ）扫描法和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）定性及定量地分析了蔗糖脂肪酸酯的组分。这两种方法的测定结果基本一致,而ＨＰＬＣ与ＴＬＣ相比,则更具快速、灵敏、准确性     

荧光标记C_(12)～C_(20)等脂肪酸在反相高效液相色谱系统中的超微量分析

对Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸在反相高效液相色谱（ＨＰＬＣ）系统中的超微量分析进行了研究。月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸等有机酸在所选择的色谱条件下都能得到有效的分离，采用Ｃ１８键合相的色谱柱，流动相采用甲醇∶水＝９７∶３，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，荧光检测波长为λｅｘ＝３２５ｎｍ，λｅｍ＝３９７ｎｍ。在实验中采用４－溴甲基－７－甲氧基香豆素作为Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸的荧光标记物，以丙酮为溶剂，以１８－冠醚－６为催化剂，以碳酸钾为碱试剂，通过相转移催化完成衍生化反应。对方法的准确度、精密度及最小检出限进行了验证，最小检出限达到１０－７ｇ／Ｌ数量级     

荧光标记C_(12)～C_(20)等脂肪酸在反相高效液相色谱系统中的超微量分析

 对Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸在反相高效液相色谱（ＨＰＬＣ）系统中的超微量分析进行了研究。月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸等有机酸在所选择的色谱条件下都能得到有效的分离，采用Ｃ１８键合相的色谱柱，流动相采用甲醇∶水＝９７∶３，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，荧光检测波长为λｅｘ＝３２５ｎｍ，λｅｍ＝３９７ｎｍ。在实验中采用４－溴甲基－７－甲氧基香豆素作为Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸的荧光标记物，以丙酮为溶剂，以１８－冠醚－６为催化剂，以碳酸钾为碱试剂，通过相转移催化完成衍生化反应。对方法的准确度、精密度及最小检出限。     

高效液相色谱分离脂肪酸中的痕量有机目农药

在农药残留量分析过程中,为了对奶制品和生物样品的溶剂萃取液中的大量脂肪和其他干扰物质进行分离净化,最常用的方法是液-液分配继之以柱色谱分离。在柱色谱中弗洛里土或部份去活化的氧化铝常用于净化残留的脂肪和色素。硅胶柱和相应的淋洗体系对于分离净化痕量的农药也是有效的方法。填充硅胶的高效液相色谱柱,用于分离脂肪酸中的有机氯农药是比较简便和快速的方法。在使用过程中,发现该方法不能使狄氏剂与脂肪酸分离开,而且随着分析样品次数的增多,色谱柱的阻力也愈来愈大。为了克服上述     

高效液相色谱-荧光检测法测定脂肽

脂肽(表面活性素)在酸性水溶液中水解出的亮氨酸与丹磺酰氯反应而被标记,再用高效液相色谱—荧光检测法对标记后的亮氨酸进行检测。结果表明,在60℃反应30 min条件下,亮氨酸能被丹磺酰氯很好地标记。被标记后的亮氨酸色谱积分面积或峰高与亮氨酸及表面活性素的含量具有良好的线性关系,线性相关系数大于0.99。亮氨酸和表面活性素检出限分别为1.4μmol/L和2.2μmol/L。表面活性素的平均回收率为94.6%。方法可应用于微量脂肽的定量测定。     

新型高效液相色谱激光诱导荧光检测器的研制

采用共聚焦结构,研制了一种高效液相色谱激光诱导荧光检测器(HPLC-LIFD)。采用473 nm的半导体泵浦固体激光器为光源,设计了一种专用于共聚焦的HPLC-LIFD检测池。该池的物理体积为7 μL,有效体积约为0.1 nL,入口通道与出口通道的夹角为120°,无直角区和变径区,无滞留和积累气泡的死角,对谱带展宽影响小。以核黄素标准品为测试物评价了该体系并利用该系统测定了实际样品中核黄素的含量。     

离子对高效液相色谱荧光检测法测定四环素类药物

报道了利用Ａｌ＾３＋作为柱前衍生试剂,高效液相色谱分离荧光检测法检测测定甲环素类药物的新方法。探讨了四环素类药物－Ａｌ＾３＋络合物的衍生条件及其色谱分离条件对荧光强度的影响,３种药物的检出限达７０￣１５０ｐｇ。     

高效液相色谱荧光检测法测定药物中的氯乙酰氯

建立测定药物中氯乙酰氯含量的高效液相色谱–荧光检测方法。以吖啶酮乙酰肼为荧光标记试剂,对氯乙酰氯进行柱前衍生。在室温下反应15 min,衍生产率达到最大。衍生溶液在XDB–C18柱上,以水和乙腈为流动相进行分析,激发波长和发射波长分别为255 nm和429 nm。氯乙酰氯浓度在1~1 000 nmol/L范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系,线性相关系数r=0.999 9。方法的检出限为0.35 nmol/L,仪器精密度和方法精密度分别为0.52%和0.67%(n=6)。样品加标回收率为92.5%~95.6%。该方法简单、准确,精密度良好,可用于测定药物中氯乙酰氯的残留量。     

高效液相色谱发展史

以１９７１年为界，评述了高效液相色谱分析逐步发展和完善的历史过程。     

高效液相色谱-荧光检测BMVC对核酸酶的抑制作用

本文利用荧光标记代替传统的同位素标记,用高效液相色谱法(HPLC)研究了端粒酶抑制剂BMVC浓度依赖的酶切抑制作用,得到了和聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳一致的结果.说明了该方法的可行性,也为高通量筛选提供了可能性.     

高效液相色谱荧光检测法测定蔬菜中残留的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐

建立了甘蓝和蘑菇中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的固相萃取-高效液相色谱荧光分析方法。蔬菜样品用乙酸乙酯提取,提取液旋转浓缩近干后用少量乙酸乙酯溶解,再经PRS固相萃取(SPE)柱净化,洗脱液经氮气吹干后用氮甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生,衍生物用高效液相色谱分析,采用外标法定量。在添加浓度1.0～20.0 μg/kg范围内,平均添加回收率为78.6%～84.9%,日内相对标准偏差(RSD)为2.7%～6.0%,日间RSD为3.1%～8.9%,检出限为0.10 μg/kg。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐衍生物在0.002～0.10 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9999。     

用于测定痕量荧光化合物的高效液相色谱化学发光检测法

化学发光法用於高效液相色谱以其优异的高灵敏度而日益受到重视,近年来得到了很大的发展。与荧光检测器相比,这种检测器设备较为简单便宜。由於不需要外光源系统,消除了杂散光及因光源发光不稳定而导致的波动,从而降低了噪声,提高了信噪比。