绿脓菌素诱导NK92细胞线粒体损伤的研究

绿脓菌素是绿脓杆菌的代谢产物,引起NK92细胞的凋亡.用绿脓菌素化合物刺激NK92细胞,通过流式细胞仪和免疫印迹方法分别检测线粒体膜电位和促凋亡蛋白的表达情况,以研究绿脓菌素引起自然杀伤细胞凋亡的分子机制.结果显示:随着绿脓菌素刺激浓度的增加,约30%的NK92细胞线粒体膜电位降低,而且绿脓菌素激活线粒体膜的促凋亡蛋白Bak、Puma、Phospho-Bad和Bik.提示绿脓菌素是通过激活线粒体膜的促凋亡蛋白,从而引起自然杀伤细胞线粒体的损伤和细胞凋亡.     

双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

目的探讨双酚A的生殖遗传毒性.方法应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)研究了双酚A对离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤作用.结果除10-10mol/L组与对照组比较无显著性差别外,各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P<0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P<0.05),在10-5mol/L和10-6mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论在一定浓度下,双酚A可引起离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤,可能对雄性小鼠具有一定的生殖毒性.     

二氧化硫对小鼠脑细胞DNA的损伤作用

运用单细胞凝胶电泳技术(又称彗星试验)研究了SO2吸入对小鼠脑细胞DNA的损伤．研究结果表明，SO2可引起小鼠脑细胞彗星尾长显大于对照组，且随SO2吸入浓度的增加，脑细胞彗星尾长度也增加，具有剂量效应关系．结果还表明，SO2对雄性小鼠脑细胞DNA损伤比雌性小鼠严重，存在性别差异．     

小鼠ES细胞可在体外诱导分化为神经元样细胞

通过悬浮培养和0.5 μmol/L RA诱导,建立了定向诱导ES细胞向神经元样细胞分化的体系 .在该体系中,神经元样细胞于类胚贴壁后48 h之内出现,4～6 d时达到最多,8～10 d 后减少.由ES细胞分化而来的神经元样细胞具有典型的形态特征,并且可以与NF抗体发生特异反应.     

虫草素改善脑缺血小鼠学习记忆及保护海马神经元的作用研究

采用双侧颈动脉夹闭建立脑缺血模型,分别观察造模后和造模前腹腔注射100 mg?kg-1虫草素对小鼠Y迷宫行为训练的影响以及检测海马各区神经元数量的变化.结果表明,造模前给予虫草素能明显提高小鼠的正确反应率（p0.05）,减少达标所需训练次数（p0.05）,并显著增加海马CA1区和CA3区锥体神经元数量（p0.01）.造模后给予虫草素对小鼠的正确反应率没有显著影响（p0.05）,但显著减少达标所需训练次数（p0.05）;同时,海马CA3区神经元数量显著增加（p0.01）,而CA1区没有显著变化（p0.05）.由此可见,虫草素能改善脑缺血小鼠的学习能力,预防作用似乎比治疗作用更为显著,其相关机制可能与虫草素促进海马神经元的修复有关.     

间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤作用的SCGE研究

采用小鼠睾丸支持细胞/ 生殖细胞共培养法以及单细胞凝胶电泳技术,研究了间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA的损伤作用.结果表明:间二硝基苯能够导致生殖细胞DNA链断裂,而且其受损率与剂量具有明显的剂量效应关系,与对照组相比均具有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05);间二硝基苯可以引起离体小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,具有生殖毒性.     

SO2体内衍生物对小鼠胃细胞DNA损伤的研究

SO2体内衍生物是SO2进入机体后在体液中代谢转化的衍生物-亚硫酸盐和亚硫酸氢盐.运用单细胞凝胶电泳技术(又称慧星试验)研究了SO2体内衍生物对小鼠腹腔注射引起小鼠胃细胞DNA的影响.在衍生物剂量为0 g/kg体重,0.125 g/kg体重,0.250 g/kg体重,0.500 g/kg体重的染毒条件下,雄性小鼠胃细胞DNA拖尾长度分别为1.14 μm,8.98 μm,14.33 μm,24.71 μm,雌性小鼠胃细胞DNA拖尾长度分别为1.20 μm,6.34 μm,12.67 μm,18.59 μm.各处理组与对照组的拖尾长度有显著性差异.结果表明,SO2衍生物可引起小鼠胃细胞DNA损伤,且随SO2体内衍生物注射剂量的增高DNA损伤加重,并有明确的剂量效应关系(r＞0.95).另外SO2体内衍生物对雌性小鼠胃细胞DNA损伤比雄性小鼠弱.这些意味着SO2的体内衍生物具有引起哺乳动物胃细胞DNA突变的潜在危验.     

紫外辐射诱导植物细胞DNA损伤的彗星检测

单细胞凝胶电泳(彗星检测)已广泛应用于动物细胞DNA损伤检测.该文报道了单细胞凝胶电泳应用于UV-B诱导植物细胞DNA损伤的检测.通过对动物细胞的单细胞凝胶电泳实验方法的改进,获得了在植物细胞中应用的最佳条件.以植物细胞原生质体为材料,并结合T4 Endonu lease V的运用,显著提高了UV-B诱导植物细胞DNA损伤提高彗星检测的敏感性和特异性.植物细胞DNA损伤的彗星图像经CASP软件处理并量化,结果表明:UV-A和UV-B均能诱导发生DNA单链断裂;UV-A在一定的剂量下诱导少量嘧啶二聚体的形成,而UV-B则强烈诱导嘧啶二聚体的产生.     

气态甲醛对小鼠外周血白细胞的DNA损伤作用

为研究气态甲醛对外周血白细胞DNA的损伤作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,用浓度为0.5 mg/m2、1.0 mg/m2、3.0 mg/m3气态甲醛对小鼠进行连续动态染毒72 h,染毒结束后,观察外周血白细胞的DNA断裂和DNA-蛋白质交联的状况.实验表明:气态甲醛能诱导小鼠外周血白细胞的DNA断裂,在各染毒浓度组与对照组均有及显著差异,在0.5 mg/m3浓度组DNA断裂效应比1.0 mg/m2,3.0 mg/m3浓度组高;1.0 mg/m2,3.0 mg/m3浓度组出现明显的DNA-蛋白质交联作用.研究结果表明:气态甲醛暴露对小鼠外周血白细胞的DNA有明显的损伤作用.     

紫外辐射诱导牡蛎细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测

以牡蛎为研究对象,建立了水产动物DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测方法.分别以20W紫外灯距离30 cm照射牡蛎血液细胞30、60和120 s,然后用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤.结果表明:未照射的细胞未受损伤,在电场中核DNA几乎不泳动,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾现象.紫外照射后细胞核DNA均不同程度受损,且拖尾率、尾长、尾矩、Olive尾矩等指标值均随着照射时间加长而增加,DNA损伤程度与紫外照射时间之间存在明显的时间效应关系.研究结果为我国海洋环境中辐射防护研究和辐射毒理学检测提供新的研究方法和思路.     

甲醛致斜纹夜蛾SL-1细胞DNA损伤作用的研究

为了研究甲醛致昆虫细胞DNA-蛋白质的交联作用（DNA—protein crosslinks,DPC）和DNA的断裂作用,以斜纹夜蛾SL-1细胞为材料,采用KCI-SDS沉淀法和彗星实验来检测液态甲醛染毒后SL-1细胞中DPC的含量及DNA的断裂效应．KCISDS沉淀法的结果表明,低浓度的液态甲醛（25μmol／L,125μmol／L）不能引起DPC,较高浓度（625μmol／L）可以引起明显的DPC（P〈0．01）;而彗星实验的结果则显示甲醛在低浓度（5μmol／L,25μmol／L）时可以引起DNA链的断裂（P〈0．01）,在较高浓度（625μmol／L）时尾部DNA％和尾矩比空白对照显著降低（P〈0．01）,表明此时甲醛所致的DPC掩盖了DNA断裂的作用．结论是甲醛在较高浓度时可以导致明显的DPC作用,而在低浓度时以DNA断裂为主．     

小鼠海马神经元急性分离和膜片钳技术的应用

为了获得适用于膜片钳实验技术的单个海马神经元,应用酶消化及机械分离法,急性分离出生10～13d的昆明小鼠得到单个海马神经元通过倒置显微镜直接观察和全细胞膜片钳技术分别对分离得到的海马细胞的形态学和电生理学特征进行研究．通过实验可得,急性分离所得活性较好的海马神经元胞体具有锥形胞体和顸树突特征,立体感强．在全细胞膜片钳记录模式下可记录到全细胞电流及钠、钾通道电流．由实验结果可知,该方法可以得到形态和生理特征良好的单个海马神经元,证实该方法适用于膜片钳技术的研究,对深入探讨药物、物理因子等对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要的应用价值．     

新型除草剂异丙脂草醚对小鼠细胞DNA损伤的比较研究

应用单细胞凝胶电泳试验，测试了新合成的除草剂——异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾九细胞的DNA损伤情况．实验结果显示：与对照组比较，异丙酯草醚对小鼠骨髓细胞和睾丸细胞DNA均有一定损伤（p〈0．05），且对小鼠睾丸细胞的作用更为敏感，呈剂量-反应关系。     

苦参碱对MPTP诱导帕金森多巴胺能 神经元损伤的保护作用

目的观察苦参碱在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森(FD)小鼠中对多巴胺能神经元损伤的保护作用和机制.方法将25只C57BL雄性小鼠随机分为5组,由空白对照组(A组)、MPTP组(B组)和3种苦参碱(4,8和16 mg/kg)加MPTP治疗组(分别为C,D和E组)组成.记录攀岩测试和运动活动实验的结果.4 d后处死小鼠并进行解剖,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的水平,应用免疫荧光分析酪氨酸羟化酶(TH)的水平,通过蛋白质印记分析腹侧中脑核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)的水平.结果苦参碱可以缓解PD相关联的典型行为,且随着增加苦参碱浓度,症状明显减轻.PD小鼠具有较低的SOD和GSH活性,且苦参碱部分扭转了SOD和GSH活性的变化.使用苦参碱的小鼠出现较高TH水平和TH阳性细胞的表达,Nrf2在PD小鼠中脑腹侧表达显著下降,而苦参碱能够扭转这种现象.结论通过促进在中脑腹侧抗氧化应激相关的Nrf2信号通路,苦参碱可以抑制PD多巴胺能神经元的氧化损伤.     

细胞对DNA损伤的反应

细胞在其ＤＮＡ受损时,利用“关卡控制”阻断细胞周期的进行,以便于对受损的ＤＮＡ进行修复,避免了突变的产生．此外,在多细胞生物中,ＤＮＡ的严重损伤还会诱发细胞凋亡,以个别ＤＮＡ受损细胞的死亡为代价保护机体遗传信息的稳定性．在上述过程中,两种人类抑癌基因———Ｐ５３和ＡＴＭ基因的产物发挥着重要作用．     

姜黄素对IL-6损伤的大鼠海马神经元的功能性保护作用及机制

目的:探讨姜黄素对IL-6损伤的大鼠海马神经元的功能性保护作用及其机制.方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP),给予Schaffer侧支高频电刺激(HFS)诱发长时程增强(LTP),观察不同药物处理组EPSP起始斜率的变化情况.结果:与对照组相比,IL-6和N-甲基D-天冬氨酸(NMDA)对大鼠海马脑片的LTP产生明显的抑制作用(P<0.05);而姜黄素可部分拮抗IL-6和NMDA对海马脑片LTP的抑制作用,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05);IL-6、姜黄素和NMDA对大鼠海马神经元的基础突触传递无影响.结论:姜黄素对海马神经元具有功能性保护作用,其机制可能是作用于神经元细胞膜上的NMDA受体,拮抗IL-6引起神经元功能异常.     

胍基丁胺对谷氨酸诱导PC12细胞DNA损伤的影响

探讨了胍基丁胺对谷氨酸诱导PC12细胞DNA损伤的影响。在用一定浓度的谷氨酸诱导PC12细胞DNA断裂的同时，观察胍基丁胺对其DNA断裂和线粒体功能的影响，发现胍基丁胺能明显减轻谷氨酸诱导PC12细胞DNA断裂并能改善线粒体功能。这说明胍基丁胺具有抑制PC12细胞DNA损伤的作用，其机制可能与其拮抗NMDA受体，改善线粒体功能和减轻谷氨酸的氧化毒性有关。     

外源性DNA对小鼠自身DNA的保护作用

采用骨髓有核细胞微核率测定法，检测小鼠服用鲤鱼精巢ＤＮＡ后，６０Ｃｏ－γ射线对小鼠骨髓细胞染色体损伤的严重程度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ１００ｍｇ，连续１５ｄ，可使总剂量６Ｇｙ的６０Ｃｏ－γ射线致小鼠骨髓有核细胞微核发生率减少４７．２％（Ｐ＜０．００１）；采用全血ＵＤＳ测定法，检测小鼠血细胞ＤＮＡ受紫外线损伤后的修复速度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ３０ｍｇ，连续３个月，其全血ＵＤＳ增加４０．０２％（Ｐ＜０．００１）．     

地黄饮子含药脑脊液对海马神经元损伤的影响

探讨地黄饮子对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导体外原代培养海马神元损伤的保护作用．把离体培养的海马神经元分为6组：空白对照组、模型组、、VE组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组,分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和MTT自动比色微量分析,观察中药地黄饮子脑脊液对受损神经元的影响．表明中药地黄饮子脑脊液能明显降低Aβ25-35诱导的海马神经元细胞培养液中LDH含量,提高细胞生存活力．地黄饮子有效成分能穿透血脑屏障,对抗Aβ25-35诱导的海马神经元损伤,表现出对海马神经元一定的保护作用．