pap和ipt共表达与提高转基因烟草抗病性的初步研究

通过构建pap与ipt共表达的双元载体,利用农杆菌介导,将pap与ipt共表达基因导入烟草K326品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得高表达的转基因植株,并对其进行了攻毒实验.结果表明:pap与ipt共表达基因转化烟草的转化率明显提高(25%),证实转基因细胞中ipt基因表达可降低PAP细胞毒性;接种烟草花叶病毒(TMV)后,pap高表达的转基因植株出现病症的时间延迟20 d,叶片失绿程度较轻,表明该转基因植株对病毒的抗性有一定程度的提高.     

商陆抗病毒蛋白cDNA的植物表达载体构建及转化烟草的研究

以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA,将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与CaMV35S启动子和Nos末端构成植物表达载体pRPAP,通过菌落直接PCR法和酶切分析鉴定出阳性重组子,用直接导入法将其导入农杆菌EHA105,以此作为工程菌进行烟草转化,对筛选到的阳性植株随机取样进行Southern印迹分析,结果表明,PAP基因已经整合到烟草基因组中,证明载体构建成功。     

茉莉酸甲酯对烟草幼苗抗病毒相关酶活性的影响

研究茉莉酸甲酯对烟草幼苗抗病毒相关酶活性的影响．以茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MJ）处理或接种烟草花叶病毒的广黄55和K326烟草幼苗为材料,测定一些抗病毒相关酶活性．发现MJ处理提高广黄55幼苗的几丁内切酶、几丁外切酶、超氧物歧化酶（SOD）和脂氧酶活性,降低β1,3-葡聚糖苷酶活性;MJ处理后接种烟草花叶病毒,K326幼苗的β1,3-葡聚糖苷酶和SOD活性都降低．上述结果表明,MJ诱导K326抗花叶病毒的机制可能不同于巴西烟草。     

黑大豆中过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性的初步研究

分析了黑大豆的干种子及萌发种子各器官的过氧化物酶和超氧物歧化酶的活性，并与黄大豆进行了比较。结果表明；黑大豆干种子及萌发种子的种皮中ＰＯＤ和ＳＯＤ活性均显著高于黄大豆；而子叶为绿色的药用黑豆又显著高于一般黑大豆；萌发的三天的子叶中ＰＯＤ活性在黑大豆与黄大豆之间相差不大，     

大蒜细胞培养及超氧化物歧化酶产生的研究

经8℃低温下贮藏一个月的大蒜,在添加0. 1mg/1KT 和2mg/12,4-D 的 MS 培养基中培养,产生大量的愈伤组织,间隔20天继代培养,愈伤组织能够脱分化地持续增殖。培养中,随愈伤组织的增长,细胞内超氧化物歧化酶含量亦随之提高。培养15天,比活达到33. 7U/mg 蛋白,比天然贮藏大蒜中的含量提高了56％。     

烟草中多酚氧化酶的生理生化特征及其活性控制的研究

对烟草叶中的多酚氧化酶(PPO)进行了部分纯化，对比了叶中PPO在苗期和田间的活性差异，研究了其活性变化规律，发现生长旺盛期PPO活性高于其他时期，研究了烟叶在不同水势条件下PPO活性变化规律，发现水势过高、过低，PPO活性均较低，在一872．78kPa水势条件下，PPO活性最高，所以细胞中的含水量是影响PPO活性的因素之一．研究了PPO在35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃和75℃等烘烤温度条件下的热敏感性，发现：酶的最适反应温度为35℃；温度由35℃升至75℃，活性逐渐下降，在每一温度下保持5min，活性趋于稳定，用回归法得出了烟叶中PPO的下降百分数与温度之间的关系式．用双倒数作图法比较了NaDiCa、EDTA、巯基乙醇和硫脲4种常用抑制剂对烟叶中PPO活性的抑制强度，结果表明：同一浓度下它们对PPO的抑制强度依次递减，而NaDiCa抑制效率明显高于其他3种抑制剂；CuCl2可以促进PPO活性，用回归法得出了活力增加百分数与二价铜离子浓度的关系式。     

大蒜细胞悬浮培养中细胞生长与产酶的研究

当大蒜细胞培养在ＭＳ液体培养基中，细胞生长迅速，脱分化的细胞仍具有合成和积累ＳＯＤ的能力．培养１５天，大蒜细胞生长和ＳＯＤ酶积累都达到高峰期，细胞合成量鲜重为１２０．８ｇ／Ｌ，细胞单位酶活力为每克细胞５．２２×１０－７ｍｏｌ／ｓ，细胞生长最适温度为２８℃，最适ｐＨ值为５．８。植物生长调节物质（２，４—Ｄ、ＫＴ）对大蒜培养细胞生长和ＳＯＤ酶积累都有显著的影响，其浓度有一个最佳值。适当地提高培养基中物质的浓度，有利于促进大蒜细胞的生长和胞内ＳＯＤ酶的积累。培养基中添加一些刺激剂，可大大地提高大蒜细胞内ＳＯＤ酶的产量。     

花生大豆种子中SOD同工酶的研究

花生、大豆种子中的SOD粗提液经聚丙烯酰胺凝胶电泳及NBT活性染色,结果表明,花生种子有6条SOD同工酶谱带,其中1条为Mn-SOD,其余为Cu,Zn-SOD.大豆种子有8条SOD同工酶谱带,其中3条为Mn-SOD,其余为Cu,Zn-SOD.不同pH值对SOD活性有一定的影响,pH=1.0时,Mn-SOD同工酶谱带消失;pH=12.0时,全部SOD同工酶谱带消失.变性剂DTT、SDS和β-巯基乙醇对SOD同工酶有较大影响,SDS使Mn-SOD谱带丢失,DTT、β-巯基乙醇使全部SOD同工酶谱带消失.     

胱氨酸与烟草多酚氧化酶作用机理的探讨

通过酶活性测定和紫外-可见光谱研究了胱氨酸对烟草多酚氧化酶(简称PPO)活性的影响.结果表明,胱氨酸对烟草多酚氧化酶有抑制作用,其机制是胱氨酸中的硫醚与烟草多酚氧化酶活性中心的铜离子配位,但底物或产物抑制胱氨酸与多酚氧化酶的结合;胱氨酸还可以与酶促反应产物结合生成无色复合物.胱氨酸抑制烟草PPO的过程可分为两步:首先胱氨酸与烟草PPO结合生成中间产物,中间产物仍具有一定的酶活性;然后中间产物结构进一步发生变化,成为无活性的形式.     

不同无性系杨树叶片的超氧化歧化酶（SOD）同工酶谱比较研究

本文对不同无性杨树叶片的超氧物歧化酶同工酶说进行了研究。实验结果表明：不同无性系杨树叶片ＳＯＤ同工酶谱都具有较小迁移率的Ｓ带、中等迁移率的Ｍ带和较大迁移率的Ｆ带；Ｓ带为Ｍｎ－ＳＯＤ，Ｍ带和Ｆ带为Ｃｕ、Ｚｎ－ＳＯＤ。各性系ＳＯＤ同工酶谱都具有１条Ｓ带和１条Ｍ带，Ｆ带数目在各无性系存在差异。     

转基因烟草中过量生长素对叶片生长发育的影响

分别构建了iaaM、iaaM和ipt共表达植物转化载体,农杆菌介导转化烟草,RT-PCR鉴定转基因株系,ELISA方法分析叶片IAA、IPA和ZR含量.结果表明:叶片IAA含量高低依次为株系iaaM10、iaaM_ipt3和野生型;而细胞分裂素含量高低依次为iaaM_ipt3、野生型和iaaM10.随着内源IAA水平升高,气孔密度减小、保卫细胞长度增加、栅栏组织细胞增大和叶片厚度增加.讨论了生长素和细胞分裂素含量对叶片细胞生长发育的影响.     

T7 DNA 聚合酶基因的改造及其在大肠杆菌中的表达

用聚合酶链式反应技术,从Ｔ７噬菌体中选择扩增编码Ｔ７ＤＮＡ滞酶５’→３’聚合酶的基因序列,扩增片段利用引入的酶切位点克隆至载体ＰＳＫ上,从而得到了不含有３’→５’外切酶基因的Ｔ７ＤＮＡ聚合酶基因,并将该重组基因克隆至原核表达质粒ｐＥＴ２８ａ上,在大肠杆菌中进行了表达。     

改进基因表达式编程算法及其应用研究

基因表达式编程是一种新型的自适应演化算法,它是在继承和发展遗传算法和遗传编程优点的基础上发展起来的知识发现新技术．笔者介绍了GEP的发展现状与关键技术,设计了逆淘汰策略和无树解码方式的改进方案,旨在维持种群多样性和提高算法效率,最后将改进方法应用与一元和多元函数挖掘的实验,得到准确度和拟合度良好的函数模型,收到了满意的效果．     

烟草MnSoD cDNA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

烟草锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是一种由核基因编码并定位于线粒体的蛋白质,是植物体内清除超氧根阴离子的主要酶类．采用RT—PCR方法,从烟草(Nicotiana tubaccum)中克隆到MnSODeDNA基因(SodA),序列分析结果与文献报告的资料相比,核苷酸序列的同源性为99．9％,氨基酸序列的同源性为99．6％．该基因能在原核表达载体pBV221中正确表达,并表现出SOD酶活性．     

分化抑制基因Id4的沉默对MEL细胞的影响及相关基因表达分析

将反义Id4导入MEL细胞株,研究此基因对细胞增殖、分化及凋亡的影响.结果表明,Id4基因的沉默显著抑制细胞增殖,细胞的分化率明显提高(84倍);细胞的死亡率和凋亡率均增加,但基因沉默对分化的促进占优势,Id4可能是调控和保持分化的重要因子.反义Id4对细胞周期引擎基因、肿瘤抑制基因、凋亡抑制基因以及着丝粒蛋白基因表达的影响,说明Id基因的功能可以从细胞周期检验点调控等方面加以探讨.这些结果有利于细胞增殖、分化调节,特别是血细胞分化控制的研究.     

转基因技术及其在水稻育种中的研究进展

以载体介导、基因直接导入和种质系统3类基因转化体系分别介绍了常用的几种转基因技术—农杆菌转化法、基因枪法、PEG介导法、电击法、花粉管通道法和浸泡转化法的原理及其在水稻育种上的最新研究进展,比较了各种技术的特点。最后对转基因技术在水稻育种上的前景作了展望。     

脱水蛋白DHN1表达载体pBV221-dhn1的构建及基因表达

以克隆载体 pTZ 19R dhn1(ZM )为基础 ,构建脱水蛋白DHN1表达载体 pBV2 2 1 dhn1.采用PCR技术从克隆载体 pTZ 19R dhn1(ZM )上扩增dhn1片段 ,并引入NcoⅠ /BamHⅠ酶切位点 ,然后与 pBV2 2 1原核表达载体连接 ,得到 pBV2 2 1 dhn1表达载体 .阳性克隆经PCR和NcoⅠ /BamHⅠ酶切检测都得到 516bp的dhn1片段 ,且序列正确 .表达载体pBV2 2 1 dhn1转化宿主菌后能够表达产生相对分子质量为 2 2× 10 3的DHN1,该蛋白具有高温可溶性 .以上结果表明 ,本实验得到了高效表达的脱水蛋白DHN1表达载体 pBV2 2 1 dhn1.