稀土化合物氯化镧对创口组织中FN表达的影响

SD大鼠为模型, 在背部四肢关节处做切口, 处理方法分为4种 空白对照组(切口两侧皮下不注入任何液体)、模拟对照组(注入药物溶剂三蒸水)、氯化镧组(50 mmol*L-1 0.25 ml)和抗TGF-β1抗体组(50 μg/切口). 用RT-PCR的方法, 检测各组组织中纤维连接蛋白(FN)mRNA 的表达量. 结果发现, 在伤后14 d, 模拟组FN mRNA表达量增加(P<0.05), 伤后28 d, 各组之间差异无意义(P=0.05). 氯化镧抑制瘢痕形成的机理可能与FN mRNA的表达无关.     

降铅冲剂对低水平铅暴露仔鼠血铅及脑铅的影响

目的:研究降铅冲剂对低水平铅暴露仔鼠血铅及脑铅的影响,为评价降铅冲剂的作用提供依据。方法:选用Wister大鼠仔鼠60只,体质量80~100 g,随机分成6组,每组10只,分别为空白组、模型对照组、EDTA对照组、降铅冲剂低剂量组、降铅冲剂中剂量组、降铅冲剂高剂量组;造模后开始给药,EDTA对照组给CaNa2EDTA注射液10(mg/kg)/d腹腔注射,降铅冲剂低、中、高剂量组分别予降铅冲剂5(g/kg)/d、10(g/kg)/d、20(g/kg)/d的剂量灌胃,空白组和模型对照组予等量蒸馏水灌胃,给药共30 d。用石墨炉原子吸收光谱仪测定仔鼠血铅、脑铅。结果:(1)染铅后,各染铅组的血铅水平与空白组比较都显著升高(P<0.001),经过30 d的治疗后,各治疗组的治疗后血铅水平均有不同程度下降,与模型对照组比较均有统计学意义。(2)染铅后,各染铅组的脑铅水平与空白组比较都显著升高(P<0.05),治疗后,各组脑铅与治疗前比较均显著升高,降铅冲剂低、中剂量组的脑铅与模型对照组比较显著下降。结论:降铅冲剂能显著降低低水平铅暴露仔鼠的血铅和脑铅含量,其综合疗效优于CaNa2EDTA。     

核磁共振氢谱研究氯化镧对大鼠脑中代谢物的影响

采用核磁共振技术研究了氯化镧对大鼠脑中代谢物的影响.雄性SD大鼠尾静脉注射剂量为0.1 mmol·kg-1体重的氯化镧溶液,分别在注射后2和4 h处死大鼠,提取脑中水溶性代谢物.分析结果表明,氯化镧引起部分代谢物含量的变化,4 h组琥珀酸、谷氨酸和γ-氨基丁酸含量与对照组相比分别下降32%,7%和16%,这表明静脉注射氯化镧可能引起脑功能的变化.     

亚慢性硝酸钐暴露对小鼠血常规指标的动态影响

探讨亚慢性硝酸钐暴露对小鼠血常规指标的动态影响。ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分成5组,分别自由饮用含硝酸钐0,5,50,500,2000 mg.L-1的水溶液90 d,在染毒后30,60,90 d分别测定血常规。雄鼠各处理组在硝酸钐暴露30,60 d后,雌鼠硝酸钐暴露60 d后WBC比对照组显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01),但硝酸钐暴露90 d后却显著或极显著下降(P<0.05,P<0.01)。在硝酸钐暴露30,60 d后,Gr#,Ly#,MO#比对照组显著或极显著增加(P<0.05(P<0.01),但暴露90 d后无差异显著性。雌性各染毒组的RBC在硝酸钐暴露30 d显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01),雄性2000 mg.L-1组却在硝酸钐暴露60 d后RBC显著下降(P<0.05),而硝酸钐暴露90 d对雌雄各组RBC均无影响。雌雄鼠在硝酸钐暴露30,60 d后的HGB,HCT与对照组相比分别显著或极显著升高(P<0.05,P<0.01),但暴露90 d后各组之间的HGB无显著差异,而雌鼠50,500 mg.L-1组的HCT与对照相比显著升高(P<0.05)。亚慢性硝酸钐暴露可导致小鼠血常规部分指标的改变,且与钐暴露的时间、浓度及性别相关。     

金属硫蛋白家族内的结构域拼接

金属硫蛋白(Metallothioneins,MTs)由结构独立且功能明显区别的β,α两个结构域组成。神经生长抑制因子(NeuronalGrowthInhibitoryFactor,GIF)双名金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ),是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白,而β－结构域为其功能结构域。为深入系统地研究MTs,尤其是GIF及其结构域的结构与功能,我们构建了金属硫蛋白家族内结构域拼接体βGIF-αMT-1(βⅢ-αⅠ)和βMT-1-αGIF(βⅠ-αⅢ):PCR扩增得各个结构域的cDNA序列,酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,经发酵、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化,得率约为80mg蛋白/L菌液。测其电泳行为、氨基酸组成、质谱、金属巯基含量等,证明得到了目的蛋白。紫外吸收图谱和圆二色性图谱显示,结构域拼接体拥有金属硫蛋白家族成员的特征金属巯基簇结构域,初步功能实验表明,βⅢ－αⅠ也具有抑制神经元生长的功能。     

蛋白质组学技术筛选与鉴定鲤鱼嗅脑急性创伤后的应激蛋白质

优化建立鲤鱼(cyprinus carpio,CC)嗅觉端脑(嗅脑)全蛋白提取技术。联用低渗透裂解和液氮冻溶法破碎鲤鱼嗅脑组织(rhinencephalon tissue of cyprinus carpio,CCRT)、低速离心提取CCRT全蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离。经分析与统计,每张CCRT的2D-PAGE图谱中的蛋白质斑点数目约为1200个。分别分离CCRT的脂溶性和水溶性全蛋白,并获得高分辨率的2D-PAGE图谱。选用差异蛋白质组学技术筛选经10%冰醋酸创伤后的CC,其端脑组织所表达出的6种应激蛋白质,并用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和数据库检索技术给予鉴定。其中3种蛋白质为70S热休克蛋白、β微管蛋白和DNA链接酶IV,有望作为研究大脑急性创伤后的应激修复途径和机理的指示蛋白质。     

镧(Ⅲ)离子对菲律宾蛤仔不同组织金属硫蛋白诱导的研究

稀土离子能否诱导海洋生物的金属硫蛋白(MT)合成,将影响到MT对海水重金属的指示作用。以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)为试验动物,采用含镧(Ⅲ)离子(La3+)的人工海水对其进行暴露培养,测定得到蛤仔鳃部和内脏中MT含量随暴露浓度和时间的变化。结果表明,La3+能够促进蛤仔MT的诱导,当以1×102μg.L-1La3+对蛤仔暴露培养5 d时,鳃部和内脏MT含量均达到最高水平,分别为0.135±0.014μmol-SH/g和0.276±0.025μmol-SH/g;1×10-1~1×102μg.L-1的La3+对鳃部MT的诱导作用较大,继续增加La3+浓度,诱导作用有所降低;1×10-1~1×104μg.L-1的La3+对内脏MT均有较好诱导,并基本保持恒定,表明La3+对机体MT的诱导具有一定限度。值得注意的是,我国某些海域的海水稀土离子浓度已达到可诱导双壳类MT合成的水平。     

长期低剂量YbCl3暴露的神经毒性评价

雌性Wistar大鼠受孕之日起以经口灌胃方式用YbCl3染毒,剂量为0.1,2.0和40 mg Yb·kg^-1体重,对照组灌生理盐水。仔鼠出生后20 d断乳并用相同剂量的YbCl3染毒。用Morris水迷宫评价学习记忆能力,并尝试从大鼠体内微量元素含量变化、大脑海马体中Ca^2＋-ATP酶活性、海马细胞内游离钙水平及脂质过氧化程度等方面评价YbCl3的神经毒性。结果显示,2.0和40 mg·kg^-1体重剂量的YbCl3长期暴露会对大鼠的学习记忆能力产生负面影响,这可能和YbCl3暴露引起的骨骼、血清、肝脏和各脑区中部分微量元素含量发生改变,Ca^2＋-ATP酶活性受到抑制,海马细胞内游离钙水平升高及脂质过氧化程度加剧等因素有关。     

亚慢性Sm(NO_3)_3暴露对小鼠肝脏的影响

探讨Sm(NO_3)_3亚慢性暴露对小鼠肝功能、肝脏组织结构、酶活的影响。ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分成5组,分别自由饮用0,5,50,500,2000 mg·L~(-1)的Sm(NO_3)_3溶液90 d,测定小鼠肝功能指标及肝脏组织SOD,GSH-Px,CAT活力及MDA含量,肝脏光镜切片观察肝组织形态学的变化。结果显示60,90 d 2000 mg·L~(-1)雌性组体重、雄性组肝脏脏器系数与对照组相比具有显著下降(P0.05);2000 mg·L~(-1)AST雌雄性组、ALT雄性组、Urea雌性组与对照相比具有显著升高(P0.05),ALB雄性组与对照相比显著降低(P0.05);GSH-PX活力5,50 mg·L~(-1)雄性组与对照组相比有极显著升高(P0.01),而500,2000 mg·L~(-1)组雄性鼠有极显著和显著下降(P0.01,P0.05),SOD活力在500,2000 mg·L~(-1)雌雄组与对照组相比有显著和极显著降低(P0.05,P0.01),MDA在50,500,2000 mg·L~(-1)雌性组与对照相比有显著与极显著升高(P0.05,P0.01),CAT 500,2000 mg·L~(-1)雄性组与对照组相比有显著降低(P0.05);500 mg·L~(-1)组肝细胞肿大,胞质疏松,肝窦、中央静脉有狭窄,2000 mg·L~(-1)细胞排列紊乱,细胞界限不清,部分肝窦狭小甚至完全闭塞,少数肝细胞有破裂现象。以上结果表明亚慢性Sm(NO_3)_3暴露可导致小鼠肝功能异常、肝组织结构损伤,并与暴露浓度、时间及性别相关;提示氧化损伤可能是亚慢性Sm(NO_3)_3暴露致小鼠肝脏毒性损伤的作用机制之一。     

手术对卵巢上皮性肿瘤患者细胞免疫功能的影响

目的:分析手术对卵巢上皮性肿瘤患者细胞免疫功能的影响.方法:分析我科2008-03/2010-02住院治疗的卵巢上皮性肿瘤患者52例进行细胞免疫功能检测的临床资料,并与同期体检的36例健康妇女资料对比.结果:治疗组术前术后与对照组比较,CD3细胞数、CD4细胞数、CD4/CD8均有明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组术后较术前更降低,差异有统计学意义(P<0.05).治疗组术前术后的CD8细胞与对照组比较,高低不同,无统计学差异;治疗组术后较术前降低,但差异不显著.治疗组术前术后与对照组比较,NK细胞含量明显下降,差异明显(P<0.05),治疗组术后较术前降低明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论:卵巢上皮性肿瘤患者的细胞免疫功能已低下,经缩瘤手术后,短期内细胞免疫功能进一步损害;可指导临床于手术后给予免疫调节剂治疗,使机体恢复细胞免疫力.     

富锌排铅咀嚼片对铅染毒大鼠的排铅作用

研究了富锌排铅咀嚼片 (RZLR)对实验性铅染毒大鼠的排铅作用。将 48只 1 0 0～ 1 40g雄性大鼠 ,按质量随机分成空白对照组、阳性药物组、模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组 ,每组 8只。空白对照组自由饮水 ,其它五组饮用 2 0 0mg/L的醋酸铅水溶液染毒。 3 0d后 ,剂量组以人体摄入量 (按人体质量计 0 1g/kg)的 5、 1 0、 3 0倍经口灌胃 ,阳性药物组灌胃二巯基丁二酸 (DMSA) ,空白对照组和模型对照组每天灌水。一个月后测定血、肝脏及胫骨中的铅含量。结果表明 ,RZLE组与模型对照组相比 ,大鼠血铅、胫骨中铅明显降低 (P <0 0 5 )。按照《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》标准判定 ,富锌排铅咀嚼片有促进动物排铅的作用。     

亚慢性钐染毒对雄性小鼠精子质量的影响

为探讨稀土元素钐对雄性小鼠精子的毒性作用, 让5组小鼠自由饮用含硝酸钐0, 5, 50, 500, 2000 mg·L-1的溶液3个月后, 观察钐对小鼠精子活力、数量、畸形率及顶体完整率的影响. 结果表明: 各处理组精子活力、数量都有所降低, 其中2000 mg·L-1剂量组与对照组相比, 各指标值均有极显著差异(P《0.01); 50, 500, 2000 mg·L-1剂量组的精子畸形率与对照组相比也具有极显著差异(P《0.01), 且染毒剂量与精子总畸形率呈现出直线变化的剂量对数-效应关系. 因此精子畸形率可作为稀土元素钐作用于雄性生殖系统的标志指标; 各处理组的顶体完整率也均低于对照组. 说明亚慢性钐暴露对小鼠精子具有一定的毒性作用.     

氟化钠对雄性小鼠精子畸形的影响

为探讨氟化钠对雄性小鼠精子畸形的影响,选取50只成年雄性小鼠随机分为5组：氟化钠染毒高剂量组（34mg／kg）、中剂量组（17mg／kg）、低剂量组（8．5mg／kg）、环磷酰胺阳性对照组（50mg／kg）、生理盐水空白对照组,采用经口灌胃染毒,1次／d,连续5d,于首次染毒后的第35天颈椎脱臼将小鼠处死,取睾丸和附睾称质量,计算脏器系数;同时取附睾制片,观察精子形态,计数小鼠精子畸形率。结果表明,氟化钠染毒各组睾丸、附睾脏器系数与空白对照组比较,差别无统计学意义（P〉0．05）,染毒各组精子畸形率普遍高于空白对照组,差别有统计学意义（P〈0．001）,且随着染毒剂量的增加精子畸形率也有相应升高,呈现一定的剂量一反应关系（r=0．954,F=20．098,P〈0．05,R^2=0．909）。提示氟化钠能使雄性小鼠精子畸形率明显升高,具有一定的生殖毒性,能影响小鼠生殖功能,对小鼠生殖功能造成损害。     

基于探针底物法的高效液相色谱-串联质谱法测定蚯蚓体内4种CYP同工酶活力及其应用北大核心CSCD

基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L^(-1))、安非他酮(25μmol·L^(-1))、阿莫地喹(50μmol·L^(-1))、右美沙芬(5μmol·L^(-1))的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32~96 mg·L^(-1)内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量。根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力。采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱,以不同体积比的含1 mmol·L^(-1)乙酸铵的0.05%(φ)甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱,串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测,并用基质匹配法配制混合标准溶液系列。结果显示:7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5~50μg·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系;对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为73.7%~103%,日内相对标准偏差(RSDs,n=5)为2.1%~11%,日间RSDs(n=5)为4.6%~10%。方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤(暴露组)和普通土壤(对照组)21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力,CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6,暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著(P<0.05)高于对照组,而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异,因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物,用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染。     

主客体组装构建环糊精修饰基因微载体的研究

合成了二茂铁接枝聚乙烯亚胺( PEI-Fc),利用二茂铁与β-环糊精的主客体嵌套作用制备了环糊精修饰聚乙烯亚胺,核磁测定结果显示,每条PEI-Fc链上通过主客体作用嵌套的CD平均为26个.这种基于弱相互作用力的β-环糊精修饰聚乙烯亚胺能有效诱导DNA分子的缔合,在N/P值达到3以上时,可形成表面为正电荷、粒径为150 ～ 250 nm的球形粒子.在含10％胎牛血清的DMEM体外细胞培养基中,由于培养基中的蛋白质能够在粒子表面发生静电吸附,PEI-Fc/CD/DNA基因微载体显示出良好的稳定性.HEK293细胞培养结果显示,以表达绿色荧光蛋白的质粒pEGFP为模型,以N/P值为10的PEI/DNA组装体作为对照,N/P值为3、5和10的PEI-Fc/CD/DNA组装体的转染效率均达到对照组的2～3倍,这种基于主客体组装构建的环糊精修饰基因微载体显著提高了基因转染效率.     

Effect of Sodium Fluoride on the Rate of Sperm Deformity in Male Mice

为探讨氟化钠对雄性小鼠精子畸形的影响,选取50只成年雄性小鼠随机分为5组:氟化钠染毒高剂量组(34 mg/kg)、中剂量组(17 mg/kg)、低剂量组(8.5 mg/kg)、环磷酰胺阳性对照组( 50 mg/kg)、生理盐水空白对照组,采用经口灌胃染毒,1次/d,连续5d,于首次染毒后的第35天颈椎脱臼将小鼠处死,取睾丸和附睾称质量,计算脏器系数；同时取附睾制片,观察精子形态,计数小鼠精子畸形率.结果表明,氟化钠染毒各组睾丸、附睾脏器系数与空白对照组比较,差别无统计学意义(P＞0.05),染毒各组精子畸形率普遍高于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.001),且随着染毒剂量的增加精子畸形率也有相应升高,呈现一定的剂量-反应关系(r=0.954,F=20.098,P＜0.05,R2=0.909).提示氟化钠能使雄性小鼠精子畸形率明显升高,具有一定的生殖毒性,能影响小鼠生殖功能,对小鼠生殖功能造成损害.     

IL-24重组载体的构建及其联合化疗药物对SKOV3细胞中TUBB3与ERCC-1基因表达的影响

通过基因重组技术将白介素24(IL-24)基因片段分别克隆成pc DNA3.0-OSP-1-IL-24和pc DNA3.0-IL-24载体,利用逆转录PCR(RT-PCR)测定2种载体的表达.将2种化疗药物紫杉醇(PTX)与顺铂(DDP)分别作用于正常SKOV3细胞及pc DNA3.0,pc DNA3.0-IL-24,pc DNA3.0-OSP-1和pc DNA3.0-OSP-1-IL-24稳定转染SKOV3细胞(卵巢癌细胞株),通过噻唑蓝(MTT)法检测化疗药物联合IL-24基因对细胞的杀伤效果及细胞的增殖能力,应用实时荧光定量PCR技术检测人β-微管蛋白3(TUBB3)与核苷酸切除修复交叉互补基因位1(ERCC1)基因在各组细胞中的表达.RT-PCR检测结果显示,通过基因重组技术克隆了pc DNA3.0-IL-24与pc DNA3.0-OSP-1-IL-24载体,IL-24基因能提高SKOV3细胞对化疗药物顺铂和紫杉醇的敏感性.其联合化疗药物对肿瘤药物的IC50值分别下降了10倍和6倍,TUBB3和ERCC1基因在IL-24基因转染的SKOV3细胞内的表达水平与在正常SKOV3细胞内相比,分别下降4倍和10倍多.上述结果表明,IL-24联合化疗药物可明显下调TUBB3与ERCC1基因的表达,该实验为临床治疗卵巢癌提供了重要的理论依据.     

新型携载人胰岛素样生长因子-1纤维屏障膜的制备及其理化和生物性能

通过同轴静电纺丝技术制备携载人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的纤维屏障膜(IGF-1/SF/PLLACL),其结构和性能经SEM,TEM和XRD表征。与非载药同轴静电纺丝纤维膜在表观形貌、理化性能、生物学性能和膜屏障功能等方面进行对比,研究了其在引导性骨组织再生中的可应用性。结果显示:纤维膜呈网状结构,IGF-1/SF/PLLACL形成芯壳双层结构;非载药纤维膜的接触角和机械强度均略高于载药组纤维,差异具有统计学意义(P0.05);载药组与非载药组纤维膜的衍射趋势与聚左旋乳酸聚己内酯晶体相似,丝素蛋白和胰岛素样生长因子-1的加入并未改变其相组成。3 d内IGF-1突释现象严重,之后曲线逐渐平缓,呈缓释状态;载药组细胞活性和碱性磷酸酶活性较非载药组高,略低于IGF-1对照组,差异有统计学意义(P0.05),而且两组纤维膜均具有阻挡成纤维细胞长入的屏障功能。     

高效毛细管电泳分析羊栖菜多糖对肿瘤机体红细胞合淌度的影响

为了分析羊栖菜多糖（SFPS）对肿瘤机体红细胞合淌度的影响,建立了肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7 d,采集并制备红细胞悬液,应用高效毛细管电泳法检测红细胞的合淌度。实验条件:毛细管为75 μm×50 cm,电泳缓冲液为含2 g/L羟丙基甲基纤维素的磷酸盐溶液(0.1 mol/L,pH 7.4),压力进样为3.448 kPa×10 s,分离电压为20 kV,柱温为25 ℃,电渗淌度为2.16×10-4 cm2·V-1·s-1。实验结果表明：羊栖菜多糖能降低肿瘤机体红细胞的电泳迁移时间(阴性对照组为15.76 min,SFPS低剂量组为13.96 min,SFPS中剂量组为12.90 min,SFPS高剂量组为13.51 min,正常对照组为11.51 min),增加红细胞的合淌度(阴性对照组为1.06×10-4 cm2·V-1·s-1,SFPS低剂量组为1.19×10-4 cm2·V-1·s-1,SFPS中剂量组为1.29×10-4 cm2·V-1·s-1,SFPS高剂量组为1.23×10-4 cm2·V-1·s-1,正常对照组为1.45×10-4 cm2·V-1·s-1),SFPS 3个剂量组红细胞的合淌度与阴性对照组比较均有非常显著的差异(P＜0.01)。羊栖菜多糖能够改变肿瘤机体红细胞的合淌度,并使之趋向于正常机体水平,这可能与其改变红细胞表面的电荷密度有关。高效毛细管电泳法可以作为检测红细胞生理状态和功能的一种辅助工具。