SNAP-tag蛋白标签技术与荧光分析法在蛋白原位分析中的联合应用

为将生物体内微观的蛋白行为可视化并以宏观信号呈现出来对蛋白进行实时、动态分析，借助SNAP-tag蛋白标签技术与有机小分子荧光染料，构建了一系列用于活细胞内实时监测目标蛋白的免洗荧光探针。标签蛋白SNAP-tag能够特异性识别探针中的苄基鸟嘌呤，从而使目标蛋白共价连接上荧光团（萘酰亚胺），携带上荧光信使。此外，由于萘酰亚胺从水环境中被牵引至SNAP-tag蛋白的疏水空腔，其荧光信号呈现出2~13倍的增强。通过SNAP-tag标签蛋白与目标蛋白的融合，该荧光探针实现了对活细胞内线粒体蛋白CoX8A及核内蛋白H2B特异性识别，在免洗条件下完成了对目标蛋白的实时追踪及原位分析。     

动态细胞骨架网络的自组织与力学性能

细胞骨架是由微管、肌动蛋白丝和中间纤维三种蛋白丝为主要成分组成的复合动态网络结构，在结合蛋白、辅助调节蛋白和马达蛋白的参与下帮助细胞实现运动、分裂和生长等基本生命过程。研究体外纯化的细胞骨架蛋白和马达蛋白网络，可以深入了解控制自组织亚细胞结构动力学行为的基本原理，为设计类似生命的活性物质和机器提供方向。本文综述了近年来基于纯化蛋白在体外简化环境中实现的细胞骨架蛋白-马达蛋白网络，重点介绍其非平衡本质、活性应力和动态网络的产生，以及这种动态网络对亚细胞结构和宏观尺度活性材料自组织过程的影响。此外，还简要介绍了细胞骨架蛋白-马达蛋白网络在构建体外仿生系统中的应用。     

生物信息学分析人MEPE蛋白的结构与功能

通过生物信息学方法分析了人MEPE蛋白的理化性质、亚细胞结构定位、跨膜区、信号肽、空间结构、蛋白相互作用网络及MEPE分子的进化保守性等。分析表明，人MEPE蛋白等电点为8.62，理论上属于碱性亲水蛋白，有信号肽区域，但无跨膜区，预测为分泌型蛋白分子；主要二级结构元件是无规卷曲；MEPE在哺乳动物中高度保守，能与多种蛋白发生相互作用。     

液相色谱中一个新的表征参数Z：Ⅳ.反相液相色谱中甲酸浓度与生物大…

反相高效液相色谱中蛋白质分子的Ｚ值可以为平衡状态下蛋白分子构象变化的表征，它与蛋白分子起始状态构象无关，在异丙醇－甲醇－水体系中蛋白的Ｘ值会因流动相中甲酸浓度的增大而增小，除蛋白分子构象变化因素外，蛋白Ｚ值的变化也与甲酸参与蛋白与置换剂分子间的讲师置换过程有关，在蛋白分子未完全失去分子立体结构时，其Ｚ值与分子的立方根成正比，当甲酸浓度足够大量，例如大于４０％（Ｖ／Ｖ）时，蛋白分子完全失去三维结构。     

丝素蛋白的构象转变

丝素蛋白的构象转变于同隐，张胜，邵正中（复旦大学高分子科学系和聚合物分子工程开放实验室，上海，２００４３３）关键词丝素蛋白，构象转变，扫描隧道显微镜桑蚕丝素蛋白是生丝的主要组分。蚕在作茧时，将体内水溶性的丝素蛋白排出体外，成为不溶性的茧丝，这一过程既...     

稀土元素与金属硫蛋白作用的研究

稀土元素与金属硫蛋白作用的研究黄仲贤，郑起，高红英，顾伟强，刘芳（复旦大学化学系，上海，２００４３３）关键词稀土元素，金属硫蛋白，运铁蛋白金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是广泛存在于动、植物体内的一类重要的重金属结合蛋白，它能结合Ｃ...     

含农药污水对乙酰胆碱酯酶结构影响的分子模拟

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE)是一种重要的生态环境监测大分子标记物。环境中污染物对蛋白结构的影响是AChE环境监测效果的关键因素。本文以对硫磷作为农药的代表，通过分子模拟方法在分子水平下对AChE在纯水和含农药污水体系中的结构进行了研究。结果表明，在分子模拟过程中，AChE蛋白在纯水和污水体系中结构变化均不明显。AChE蛋白在污水体系中表面积的增加归因于对硫磷分子导致的蛋白疏水性表面积的增加。AChE蛋白二级结构所含残基数量在纯水和污水中均没有明显变化，但污水会导致蛋白中氢键数目增加，以及水分子与蛋白间氢键数目的减少。AChE蛋白与对硫磷分子间的范德华力与库仑作用力均为吸引力，范德华力为主要作用力。在含对硫磷农药污水中，蛋白结构中PHE284残基的波动大，是影响AChE结构的关键残基。     

高效凝胶过滤色谱法（光电二极管阵列检测器）分离、测定巴豆毒蛋白

巴豆毒蛋白粗提液在高效蛋白柱上分离，用光电二极管阵列检测器给出光谱信号，判断所需蛋白的峰，并利用光谱图和反相高效液相色谱来确认分离峰的纯度；在高效蛋白柱上测定了巴豆毒蛋白的分子量；利用离子交个邻苯二甲醛柱后衍生法测定了巴豆毒蛋白的氨基酸含量。     

高效凝胶过滤色谱法（光电二极管阵列检测器）分离、测定巴豆毒蛋白

 巴豆毒蛋白粗提液在高效蛋白柱上分离，用光电二极管阵列检测器给出光谱信号，判断所需蛋白的峰，并利用光谱图和反相高效液相色谱来确认分离峰的纯度；在高效蛋白柱上测定了巴豆毒蛋白的分子量；利用离子交个邻苯二甲醛柱后衍生法测定了巴豆毒蛋白的氨基酸含量。     

用异羟肟酸化学模拟铁载体蛋白的研究进展

本文综述了近年来用异羟肟酸化学模拟铁载体蛋白的研究进展，讨论了铁色素铁载体蛋白，铁草铵铁载体蛋白和玫红酵母酸铁载体蛋白这三类模型分子对Fe(Ⅲ)的络合性能及其生物活性。     

柞蚕丝蛋白/桑蚕丝蛋白共混支架的制备及性能研究

众多研究表明，含有三肽基序即精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）的材料有助于细胞在其上的粘附和生长.尽管作为天然蛋白质的柞蚕丝蛋白同样具有RGD序列，但其从柞蚕丝纤维中的再生过程复杂且不易加工成型，因此对此类蛋白质材料的研究较少.我们以水溶液共混的方式，在再生柞蚕丝蛋白中引入了更为常用的桑蚕丝蛋白，通过对桑蚕丝蛋白水溶液特殊有效的醇诱导和冻融方法，成功制备了非水溶性的柞蚕丝蛋白/桑蚕丝蛋白复合支架材料.研究结果显示，随着柞蚕丝蛋白含量增加，共混支架的孔径和强度均有所下降，但其热稳定性上升；FTIR测试表明，尽管柞蚕丝蛋白和桑蚕丝蛋白的一级结构完全不同，但其二级结构在以此方法制备的支架材料中均以β-折叠构象为主.体外细胞培养实验证实，小鼠成纤维细胞和成骨细胞都能在支架上增殖生长，并且共混支架较纯桑蚕丝蛋白支架具有更高的细胞增殖速率，表明其不仅具有良好的生物相容性，而且可能更适用于组织工程领域.     

以硅胶为载体的交联壳聚糖作为亲和层析填料基质的研究

采用硅胶为载体的交联壳聚糖（CTS－SiO2）作为亲和层析填料基质，对其卵清蛋白的偶联能力，以及亲和纯化小鼠抗卵清蛋白抗体效果等进行了研究。结果显示卵清蛋白能方便地用二醛偶联于CTS－SiO2基质，该新型亲和层析填料稳定性高，选择性好，非特异性吸附小，每克交联壳聚糖上可偶联卵清蛋白54.25mg，用该填料可有效地亲和吸附小鼠抗卵清蛋白抗体，并可用碱性缓冲液将该抗体洗脱，初步显示出较好的分离纯化效果。     

毛细管电泳接触反应法测定血清中铁传递蛋白的浓度

建立了一种测定血清中铁传递蛋白的毛细管电泳接触反应方法，利用血清中铁传递蛋白计算化学结合铁的性质，用标准铁饮和铁传递蛋通过对铁准确定量，测定血清铁伟递蛋白的有浓度。     

高性能纤维素/丝素蛋白生物医用复合材料研究进展

丝素蛋白具有良好的生物相容性、生物降解性和体内低炎症反应，在生物医用领域具有广阔的应用前景。但是，再生丝素材料的力学性能和生物活性有待于进一步提高以满足不同组织工程的需要。纤维素来源广泛，成本低，具有良好的机械性能，以纤维素及其衍生物为原料制备的增强复合材料引起了广泛关注。以纤维素和丝素蛋白为原料，采用不同溶剂体系，制备高性能复合材料近年来已成为天然高分子领域有趣的工作。本文介绍了丝素蛋白和纤维素的结构、性能及相关应用，对纤维素与丝素蛋白的溶剂体系进行了分类，综述了不同纤维素/丝素蛋白复合材料形式(膜、凝胶、纤维等)的最新进展。     

转基因水稻表达的Bt毒蛋白Cry I Ab溶液构象的研究

用荧光光谱法研究了毒蛋白Cry I Ab在溶液中的构象。结果表明，pH值增大时，毒蛋白的荧光强度也增大，至pH=11时荧光强度已达最大值；甲醇、乙醇及异丙醇等有机溶剂引起毒蛋白荧光发射波长蓝移和荧光强度增大，至有机溶剂的浓度超过某一阈值后荧光发射波长不再蓝移；丙酮能完全猝灭毒蛋白Cry I Ab的荧光，丙烯酰胺能猝灭Cry I Ab86%的荧光，而KI对毒蛋白的荧光无猝灭作用，由此推断Cry I Ab的大部分色氨酸残基位于分子表面富含负电荷的区域中。     

铁硫蛋白模型化合物的研究进展

本文综述了目前国际上对铁硫蛋白模型化合物研究的进展情况，介绍了NH---S氢键和芳香环在这些模型化合物及其天然蛋白中的作用。作为铁硫蛋白活性中心的模型，至今已有许多化合物被合成出来，通过这些模型化合物的研究知道，NH---S氢键和芳香环在调控配合物及天然蛋白的氧化还原电位和稳定性方面起着非常重要的作用。另外，作为顺式乌头酸酶、固氮酶等金属酶的模型，已成功地合成了含3Fe4S核以及含钼的铁硫簇合物。     

丝素蛋白纤维的接枝聚合Ⅲ．丝素蛋白纤维的接枝聚合染色

本文提出了通过接枝聚合物将丝素蛋白纤维的染色的设想：在染料分子上引入丙烯酰基，然后将其接枝到丝素蛋白纤维表面。将2－羟基－4－丙烯酰氧二苯酮（HAOBP），1－羟基－2－丙烯酰氧蒽醌（HAOAQ）和1，5，8－三羟基－2－丙烯酰氧蒽醌（THAOAQ）等三种染料，分别用无引发剂存在下的接枝聚合法接枝到丝素蛋白纤维表面，使丝素蛋白纤维分别染成了浅黄、浅红和浅紫三种颜色。这样染色了的丝素蛋白纤维在浓酸或浓碱溶液中回流，未发生任何裉色现象，并且其热稳定性和紫外稳定性也得到了显著的改善。力学性能未下降。采用甲基丙烯酸甲酯（MMA）与染料单体共同进行接枝聚合染色，可以提高丝素蛋白纤维的光泽度，并可将接枝整理和染色两道工序合而为一。HAOBP、HAOAQ和THAOAQ在丝素蛋白纤维上的接枝率（mol单体／g丝），具有如下顺序，HAOBP＞HAOAQ＜THAOAQ。该顺序与它们的亲水性顺序恰好相反，这一结果支持了Imoto等人的无引发剂存在下的接枝聚合发生在丝素蛋白纤维的疏水区域的观点。     

一种检测二恶英的单链抗体方法

本发明公开了一种检测二恶英的单链抗体方法。该单链抗体基因来源于小鼠，克隆到表达载体pET20b，在大肠杆菌BL21中表达，利用表达蛋白上带有的His-tag标记可通过亲和层析纯化单链抗体蛋白，并利用C-myc标记检测单链抗体蛋白。本发明克隆到鼠源的抗二恶英类化学物质的单链抗体，该抗体能应用于检测二恶英类化学物质，检测成本低，应用前景广泛。     

二巯基丁二酸对~(210)铅组织分布和蛋白结合影响(摘要)

研究了二巯基丁二酸对铅的解毒作用。方法：小鼠iv210铅370kBq后，ig或ip二巯基丁二酸，剂量为1．0g·kg－1，用整体放射自显影术定位显示；大鼠210铅中毒后，用凝胶色谱法分离血清、肝、肾和尿，测定210铅与蛋白结合。结果：定位分布显示，对照小鼠肾脏210铅含量最高，肝、脾、肺、心、骨含量其次，脑内含量最低。给药后，大部分组织210铅含量明显减少。整体自显影片微光密度测定与相同部位组织用液门测定结果基本一致，大鼠血清和肝脏分离得到3个不同相对分子质量210铅蛋白复合物，肾脏仅有大分子210铅蛋白复合物，尿中主要为低相对分子质量非蛋白复合物。给药动物血清、肝脏和肾脏蛋白复合物与对照相似，但放射性含量低于对照，而尿中复合物210铅明显高于对照。结论：二巯基丁二酸对铅的解毒，减少了铅在体内各脏器中的沉积，以及与蛋白结合，促进其随尿液排出。     

反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白

乳清蛋白是牛奶中的一种主要蛋白质，β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是其主要成分，分别占其总量的40％～50％和10％～20％。乳清蛋白具有较高的营养价值及功能特性，已经被越来越多地应用于食品工业，市场上已经出现了许多不同种类和品牌的乳清蛋白粉保健品，如儿童营养蛋白粉、婴儿配方奶粉等。但乳清蛋白又是一种常见的过敏原，β-乳球蛋白是最主要的过敏原，其次为α-乳白蛋白。因此，通过蛋白质改性的方法已经开发出了低过敏或无过敏的乳清蛋白质制品。反相高效液相色谱法（RP—HPLC）是分析乳清蛋白成分的有效方法之一，与其他色谱方法相比具有分辨率和回收率高、重复性好、操作简便等优势。