竞争法免疫层析试条的数学模型与仿真研究

根据竞争法免疫层析试条的检测原理,本研究将其分为TwA和TnA两种模式,结合对流扩散方程分别建立其数学模型,并运用COMSOL软件对试条的动态反应过程进行仿真,得到检测线和质控线上各复合物浓度关于各影响因素的关系曲线.在TwA模式中,分析了待测物浓度[A0]=0~20 mol/L,标记物浓度[P0]=0.01~100 mol/L,检测线位于5~20 mm位置等因素对于检测结果的影响;在TnA模式中,分析了[A0]=0~20 mol/L, [P0]=0.01~100 mol/L, [A0]和[P0]两种物质浓度及孔隙率等因素对于检测结果的影响.结果表明,本研究建立的竞争法模型与仿真能探究各参数对于检测结果的影响,优化试条性能,从而提高试条检测灵敏度和实现定量检测.     

自制HCG免疫层析试条测试仪器

描述了研制的HCG免疫层析试条测试仪的基本结构、功能和一些重要的技术指标。临床应用表明,用该仪器对免疫层析试条进行定量检测是可能的。     

快速诊断疟疾的免疫层析试条的研制

开发成功了一种能快速、灵敏、高特异性检测疟疾的免疫层析试条。选自恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ－一级结构中的九肽（ＡＨＨＡＨＨＡＡＤ），经人工合成后作为免疫原，生产了一些单表位单抗；完成了一些单抗的纯化与鉴定；制取了金标单抗并对其吸收光谱进行了分析；选取了包被单抗和金标单抗间的配对；比较了影响检测的各种因子。当用此试条检测６２名已用常规血间检法确证患有疟疾个体的全血，准确率达９３．５４％。     

快速检测甲胎蛋白的免疫层析试条的研制

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物－－人血清中甲胎蛋白（AFP）的免疫层析试条。为此，研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗AFP单抗的影响因素以及抗AFP抗体固化条件、抗AFP抗体与其AFP结合能力等。结果表明，自制国产胶体金质量不亚于进口商品；金标单抗和固化抗体活性稳定，能分别显示出结合AFP分子不同表位的特异性。所得检测试条的检出速度在5至20min内，检测阳性阈值定为20ng AFP/mL血清。     

五氯酚免疫层析检测试纸条的研究

利用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测五氯酚(PCP)残留的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备大小一致、分布均匀、粒径为20 nm的胶体金颗粒,以此标记五氯酚抗体,制备金标抗体。将五氯酚包被抗原和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将型号Millipore135硝酸纤维膜、型号VL78金标垫、型号SB06样品垫及吸水纸组装于PVC底板上,组装成胶体金免疫层析检测试纸条。通过试纸条上颜色的深浅,检测样品中PCP的残留量。试纸条检出限为10 ng/mL,检测时间为5 min。该方法检测所需试剂已预先包被在试纸条上,操作简单、重复性好、成本低廉,可用于五氯酚的现场快速检测。     

菊酯类农药广谱型免疫层析试纸条的研究及应用

建立了菊酯类农药广谱型免疫层析检测方法,可同时检测水果、蔬菜中12种甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药残留。以粒径20 nm的胶体金标记羊抗小鼠IgG抗体于金标垫上,分别固定包被原(检测线,T线)、兔抗山羊 IgG 抗体(质控线, C 线)于硝酸纤维素膜( NC 膜)上,与吸水垫及聚氯乙烯( PVC)底板组合成层析试纸条。10 g样品经乙腈提取,PBS稀释4倍,取100μL与菊酯类农药的单克隆抗体混合后,直接用于试纸条检测。结果表明,试纸条对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯农药的裸眼观察检测灵敏度为0.5,5.0,5.0和5.0μg/mL,检测时长为8~10 min,采用QuEChERS方法,方法检测灵敏度可提高16倍。对蔬菜和水果的方法验证表明,除辣椒基质干扰呈假阳性外,其它样本的检测结果均与GC方法结果一致。试纸条采用金标羊抗小鼠IgG二抗的方法,使检测结果的重现性更好、更稳定,且抗基质干扰能力强,为菊酯类农药的累积毒性检测提供了新方法。     

上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测己烯雌酚

采用溶剂热法合成上转换纳米颗粒(UCNPs)-NaYF4∶ Yb,Er,进行表面功能化修饰,将其与己烯雌酚(DES)单克隆抗体偶联,制备荧光探针,以牛血清白蛋白-己烯雌酚(BSA-DES)偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线(T线)和质控线(C线),建立了上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测DES的方法.实验结果表明,此试纸条定量检测DES线性范围为25～ 10000 ng/mL(y=0.43927x-0.57647,R2=0.996),检出限为20.84 ng/mL,单个样品检测时间为15 min,批内和批间变异系数均小于10％,特异性识别能力强,在37℃存放下7天检测值RSD的平均值约为15％.加标回收实验显示平均回收率为90.1％～115.2％,相对标准偏差小于5％,与高效液相色谱法有较好的一致性.     

基于新型量子点荧光微球的氯霉素免疫层析试纸条的制备和应用

以羧基化CdTe/ZnSe量子点荧光微球为标记物,通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)活化法将氯霉素(CAP)单克隆抗体与量子点荧光微球偶联制备荧光探针.氯霉素全抗原(CAP-HS-BSA)及羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维素膜,形成检测线(T线)和质控线(C线),组装成新型氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条,建立了快速、定量检测牛奶中CAP的方法.本研究开发的量子点荧光微球试纸条可在15 min内完成牛奶样品中CAP的定量检测,线性范围为0.1~100.0μg/L,检出限为0.1μg/L.牛奶样品CAP的加标回收率为93.3%~97.9%,相对标准偏差在4.9%~6.9%之间.     

水样中左旋18-甲基炔诺酮的胶体金免疫层析试剂条的研制

研制了一种检测水样中左旋18-甲基炔诺酮(LNG)含量的胶体金免疫层析试剂条.基于包被抗原和检测物对金标抗体的竞争反应,通过可目测的胶体金标记物而得到直观的检测结果.试剂条对LNG的检测,灵敏度为10 ng·ml-1,在10min内显示结果;与己烯雌酚、雌三醇,17(-雌二醇,17β-雌二醇、雌酮、甲泼尼龙、泼尼松龙和...     

量子点荧光微球免疫层析试纸条定量检测恶性疟原虫

以羧基化Cd Te/Zn Se量子点荧光微球为荧光标记物,采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)法偶联抗恶性疟原虫富组氨酸蛋白(Pf)单克隆抗体制备荧光探针;以羊抗恶性疟原虫组氨酸多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线和质控线,建立了免疫层析试纸条定量检测血清中恶性疟原虫的方法。所使用的羧基化量子点荧光微球的荧光强度为单个量子点的2800倍。实验结果表明,该荧光试纸条定量检测血清中恶性疟原虫线性范围为5.8~8010 Parasite/μL,最低灵敏度达到5.8 Parasite/μL,单个样品检测时间只需15 min。加标回收实验显示,试纸条批内回收率为93.0%~111.8%,批间回收率为98.3%~115.1%,且批内、批间的相对标准偏差均小于5%。     

氟苯尼考胶体金免疫层析定量检测方法的建立

建立了定量检测氟苯尼考的胶体金免疫层析方法.对胶体金标记抗体时溶液pH和抗体浓度、金标抗体用量、检测线上抗原浓度以及检测时间进行了优化.采用胶体金试纸条读取仪测定试纸条检测线和质控线的信号强度,以标准品的浓度为横坐标,阳性样本和阴性样本的检测线/质控线的信号比值(Bx/B0)为纵坐标建立标准曲线.结果表明,胶体金免疫层析试纸定量检测氟苯尼考的线性范围为0.1~1.5 ng/mL,检出限为0.08 ng/mL,检测时间为15 min.本方法具有简便、快速和可定量等特点,适于大批量样品的现场筛查.     

Rabbit Monoclonal Antibody-Based Lateral Flow Immunoassay Platform for Sensitive Quantitation of Four Sulfonamide Residues in Milk and Swine Urine

Based on the available rabbit monoclonal antibody (RabMAb), a rapid and sensitive lateral flow immunoassay (LFA) platform has been developed for quantitative detection of four sulfonamide residues(SRs) of sulfadiazine (SD), sulfathiazole (STZ), sulfapyridine (SP), and sulfamethoxazole (SMX).Within the designed LFA competitive format assay, which was based on antigen-antibody properties, the hapten conjugate N¹-[4-(carboxymethyl)-2-thiazolyl] sulfanilamide linked to protein ovalbumin (TS-OVA) and goat anti-rabbit antibody were sprayed as capture and control reagents, respectively, and then the antibody was conjugated to colloidal gold particles as the detection reagent. With quantitative assessment aided by a colorimetric strip reader, the sensitivities of the established LFA method for SD, STZ, SP, and SMX were 0.91 ng mL^?1, 0.10ng mL^?1,0.12ng mL^?1, and 2.13ng mL^?1, and the half-maximum inhibition concentrations (IC₅₀) were 5.19 ng mL^?1, 1.25 ng mL^?1, 0.66 ng mL^?1, and 24.14 ng mL^?1, respectively. The recoveries at three spiked levels (5, 20, 50 ng mL^?1for SD, STZ, and SP; 20, 50, 100 ng mL^?1 for SMX) were in the range of 78.02–135.10% and 76.40–137.16% for milk and swine urine, respectively. More importantly, the detection performance of the established platform was consistent with that of in-parallel LC-MS/MS analysis. In conclusion, the proposed LFA platform has showed the potential for fast, sensitive and relatively accurate quantification of four sulfonamide residues in practical uses.     

A Model On-line Flow Injection Fluorescence Immunoassay Using a Protein a Immunoreactor and Lucifer Yellow

Abstract

A heterogeneous on-line fluorescence immunoassay has been developed for a model analyte (transferrin) using a flow injection analysis system containing a controlled pore glass protein A immunoreactor. Lucifer yellow VS (LYVS) a 4-aminonaphthalimide with a large stokes shift and pH independence was the fluorophore. For each assay the antibody-protein A reaction takes place at near neutral pH, and the complexes are eluted at acid pH. Transferrin levels in human serum has been determined by this method, and good within assay variations have been achieved.     

基于不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

真菌毒素毒性强,具有很强的致癌性和致畸性,对人体的危害巨大.近年来,其快速检测技术成为研究的热点,在“批量检测”的趋势下,侧流免疫层析技术以具有操作简便,经济合理,灵敏快速等优点,广泛应用于食品、饲料、农产品中真菌毒素的检测.本文对侧流免疫层析检测技术的研究概况及不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用和发展前景进行综述,以期为侧流免疫层析技术在真菌毒素检测的未来发展及应用提供参考.     

量子点标记免疫层析技术检测血液中的降钙素原

为了快速定量检测血液中降钙素原( Procalcitonin,PCT)含量,首先制备CdSe/ZnS量子点,再将量子点标记抗抗钙素单抗,标记单抗后量子点荧光发射峰从620 nm红移至625 nm,峰形保持良好。以制作的量子点标记免疫层析试纸条及其相应荧光测定系统。因减少单抗用量可降低试纸条成本,本研究采用结合垫上喷涂适量量子点,标记单抗并仅有检测线的结构。通过检测信噪比,优化此试纸条的参数。本研究的量子点荧光标记试纸条及其配套测定系统可在20 min内快速检测PCT,定量检测线性范围0.2~100μg/L,灵敏度达到0.1μg/L。22份血液样本检测结果与目前商品设备检测结果的Pearson相关系数为0.9995,K-S检验的Sig为1.0,说明两种检测方法的一致性。快速定量检测PCT具有定量测量细菌性感染、临床指导抗生素合理应用的重要意义。     

基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌

建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法,检测猪霍乱沙门氏菌.待检样品经免疫磁分离富集和热洗脱处理后,用荧光微球免疫层析试纸条进行检测.每毫克纳米磁珠标记30μg抗体制备的免疫磁珠,对浓度为102 ～ 106 CFU/mL的猪霍乱沙门氏菌的捕获率均大于90％,特异性好;在pH=6时,以300μ,g/mg猪霍乱沙门氏菌单抗11D8-D4标记荧光微球,制备免疫荧光微球;以2.0 mg/mL猪霍乱沙门氏菌单抗5F11-B11喷涂检测线(T线),以1.0 mg/mL驴抗鼠IgG喷涂质控线(C线),制备免疫层析试纸条.采用建立的基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌,在PBS缓冲液中检出限为1.5×105 CFU/mL,牛奶中检出限为7.6×105 CFU/mL,与直接采用荧光微球免疫层析方法检测相比,检出限分别降低了10倍和200倍.本方法可有效富集牛奶中的沙门氏菌,避免了基质干扰,灵敏度大大提高,具有较好的应用前景.     

APA微胶囊扩散数学模型的改进

在膜阻力系数和膜内基质的分配系数两个新特性的基础上,重新建立了蛋白质在APA微胶囊体系上的扩散数学模型,该模型更为准确地反映出蛋白质在微胶囊上的扩散特性     

Principles of rapid polymerase chain reactions: mathematical modeling and experimental verification

Polymerase chain reaction (PCR) is an important diagnostic tool for the amplification of DNA. The PCR process can be treated as a problem in biochemical engineering. This study focuses on the development of a mathematical model of the polymerase chain reaction. The PCR process consists of three steps: denaturation of target DNA, annealing of sequence-specific oligonucleotide primers and the enzyme-catalyzed elongation of the annealed complex (primer:DNA:polymerase). The denaturation step separates the double strands of DNA; this model assumes denaturation is complete. The annealing step describes the formation of a primer-fragment complex followed by the attachment of the polymerase to form a ternary complex. This step is complicated by competitive annealing between primers and incomplete fragments including primer-primer reactions. The elongation step is modeled by a stochastic method. Species that compete during the elongation step are deoxynucleotide triphosphates dCTP, dATP, dTTP, dGTP, dUTP, and pyrophosphate. Thermal deamination of dCTP to form dUTP is included in the model. The probability for a species to arrive at the active site is based on its molar fraction. The number of random insertion events depends on the average processing speed of the polymerase and the elongation time of the simulation. The numerical stochastic experiment is repeated a sufficient number of times to construct a probability density distribution (PDF). The moment of the PDF and the annealing step products provide the product distribution at the end of the elongation step. The overall yield is compared to six experimental values of the yield. In all cases the comparisons are very good.