糖肽的固相合成

综述了固相法合成糖肽的最新进展，论述了合成策略和所用聚合物载体，这是一种很有前途的合成糖肽的方法，参考文献４２篇。     

仿生聚合物材料用于糖肽的高选择性富集

蛋白质糖基化分析对深入认识其生物功能和发现生物标志物意义重大。由于生物样品中糖肽的丰度低，糖肽的富集至关重要。该文合成了一种以色氨酸为功能基团的新型仿生聚合物材料（简称Poly-Trp），并用于糖肽的高选择性富集。扫描电子显微镜、热分析仪和红外光谱仪等表征证明Poly-Trp已成功合成。通过考察溶液条件变化对糖肽在Poly-Trp保留的影响，发现糖肽在Poly-Trp上的保留分别随着溶液中乙腈浓度的降低和酸度的升高而变弱。且Poly-Trp对牛胎球蛋白糖肽的富集选择性高于商品化ZIC-HILIC和氨基硅胶，能抵抗物质的量倍数为100的牛血清白蛋白的干扰。该研究中仿生聚合物材料的设计为糖肽富集材料提供了新思路和新方法。     

新型聚乙烯醇系亲和吸附剂的制备及其在糖蛋白纯化中的应 …

利用已合成的聚醋酸乙烯酯－甲基丙烯酸缩水甘油酯－甲基丙烯酸烯丙酯大孔共聚物。醇解后与６－氨基正已酸反应，进一步在ＥＤＡＣ的作用下实现与间氨基苯硼酸的偶联，得到亲水性的亲和吸附剂；配基密度为０．８６５ｍｍｏｌ／ｇ干树脂，偶联效率为８９％，以云芝糖肽八方地，吸附容量为５３．７ｍｇ／ｇ干树脂，为醇解前的７．７倍。     

糖肽合成的新进展

本文综述了近年来在糖肽合成方面的研究进展, 主要包括三氯乙酰亚胺酯法, 缩水内醚糖法, 酶合成法, 固相合成法及酶与固相结合法。分析了不同的离去基团和不同的保护基策略对糖肽合成的影响。     

新型四肽亲水材料用于糖肽的高效富集

本研究采用原子转移自由聚合(Atom-transfer radical-polymerization, ATRP)法合成了一种新型四肽亲水作用色谱材料 (Poly-DAPD),用于糖肽的选择性富集.通过氮气吸脱附、热重分析和X射线光电子能谱等技术进行表征,结果表明,四肽已成功接枝到硅球上.固相萃取富集实验表明,合成的亲水材料对牛胎球蛋白(Fetuin)糖肽富集选择性高;与商品化ZIC-HILIC材料相比,Poly-DAPD材料富集掺有5摩尔倍数牛血清蛋白(BSA)的Fetuin样品时,在获得的糖肽数目及抗干扰性能方面都更具优势.此Poly-DAPD材料可进一步用于不同糖蛋白的糖基化分析研究.     

新型聚乙烯醇系亲和吸附剂的制备及其在糖蛋白纯化中的应用* II. 吸附剂制备

利用已合成的聚醋酸乙烯酯－甲基丙烯酸缩水甘油酯－甲基丙烯酸烯丙酯大孔共聚物,醇解后与6-氨基正己酸反应,进一步在EDAC的作用下实现与间氨基苯硼酸的偶联,得到亲水性的亲和吸附剂;配基密度为0.865mmol/g干树脂,偶联效率为89％。以云芝糖肽作为目标物质,吸附容量为53.7mg/g干树脂,为醇解前的7.7倍。     

基于叠氮基-氰基点击化学的苯硼酸亲和硅胶的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用

硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性，生物相容性，制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。该研究立足硼酸亲和材料开发的关键问题，设计并开发了一种新型苯硼酸亲和硅胶（TCNBA）。该材料采用基于叠氮基-氰基的无铜催化点击化学方法进行合成，生物相容性好，制备方法简便。红外光谱和X射线光电子能谱图表征结果证明材料合成成功。TCNBA的糖肽富集选择性利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行评价，结果表明，TCNBA能够分别从辣根过氧化物酶（HRP）和免疫球蛋白G（IgG）酶解液中鉴定出13个和11个糖肽；以HRP和牛血清白蛋白（BSA）酶解液混合物（物质的量比1：10）作为研究对象，富集后能够鉴定出5个糖肽。TCNBA的糖蛋白富集选择性利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）进行评价，以HRP、IgG、核糖核酸酶B（RNaseB）作为考察对象，结果表明，TCNBA对糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际样品人血清为测试对象验证TCNBA在实际生物样品中的应用价值。结果显示，富集后非糖蛋白得到较大程度去除，糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模实际蛋白质样品分离处理的应用前景。     

一种弱阳离子交换材料的亲水模式糖肽富集新方法

亲水作用色谱(HILIC)材料在糖肽的富集与分离中得到越来越广泛的应用. 针对目前HILIC材料糖肽选择性不足的缺点, 发展新的糖肽富集方法十分必要. 本工作发展了一种商品化的弱阳离子交换材料(WCX)在亲水模式下对糖肽的富集方法. 首先考察了微固相萃取(SPE)模式下WCX上多肽保留的机理. 结果显示, WCX上糖肽的保留同时受乙腈含量和pH的影响. 将WCX用于牛胎球蛋白(fetuin)胰蛋白酶酶解液中糖肽的富集, 获得了39条糖肽信号. 当fetuin与牛血清白蛋白(BSA)酶解液以物质的量比1:5混合时, 富集到26条糖肽信号. 富集人免疫球蛋白(IgG)胰蛋白酶酶解液时获得25条糖肽信号, 1:5时获得23条糖肽信号. 实验说明WCX对唾液酸化和非唾液酸化糖肽的富集均有高选择性. 该方法拓展了WCX的应用范围, 丰富了HILIC材料的种类.     

基于膜超滤的糖肽富集新方法

建立了一种用于糖肽富集的新型超滤方法,采用截留相对分子质量为3 000 u的超滤膜,截取相对分子质量大于3 000 u的组分,同时完成糖肽的富集、样本的脱盐及浓缩,简化了操作过程并减少了样本损失.用4种标准蛋白酶切肽段混合物测试方法的有效性,结果表明,采用超滤方法富集后的样品可以多鉴定1个糖肽,且所有鉴定的糖肽丰度远高于未富集的样品.将该方法用于人血浆样本,血浆全酶切肽段的1个SCX组分用超滤法富集后,其鉴定的糖肽数量超过未富集组分的6倍,且糖肽富集的选择性大于85%.该方法为糖蛋白质组学的研究及糖相关生物标志物的开发提供了有力的技术支持.     

半胱氨酸基麦芽糖修饰亲水硅胶的制备及其对糖肽的富集

糖蛋白与糖肽在复杂生物体系中丰度一般较低,为了在糖蛋白质组学研究中深入和全面分析鉴定糖基化位点与糖链,通常需要进行富集前处理操作。该文设计并合成了一种半胱氨酸基麦芽糖修饰亲水硅胶分离介质(Cys-Mal@SiO_2),将其装填入固相萃取柱中制备新型亲水固相萃取柱。在以人免疫球蛋白G酶解液为样品进行富集鉴定时,Cys-Mal@SiO_2鉴定糖肽的质谱信号强度和信噪比比半胱氨酸修饰硅胶(Cys@SiO_2)、麦芽糖修饰硅胶(Mal@SiO_2)和商品化ZIC-HILIC更高。在复杂的鼠肝蛋白质提取物的糖蛋白质组学分析中,Cys-Mal@SiO_2共鉴定出1 551条糖肽,属于466个糖蛋白的906个N-糖基化位点,比Cys@SiO_2和Mal@SiO_2鉴定糖肽数、蛋白质数和N-糖基化位点数分别多211、67、127个和289、76、193个。将Cys-Mal@SiO_2成功应用于低丰度糖肽的选择性富集与鉴定,在糖蛋白质组学研究中体现出良好的应用潜力。