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本文对小麦丛矮病毒核衣壳(WRSV-NP)进行分级解聚并通过甘油垫子超离心,可分别得到L蛋白,NS-N-RNA复合物,NS蛋白和N-RNA复合物等4个病毒组份。这些组份在单独测定时都不表现RNA聚合酶活力;在进行不同重组以后发现,只有当L,NS和N-RNA复合物同时共存时才能进行体外转录。实验还表明,这三种蛋白质与WRSV-RNA的结合力依次为N>>NS>L。根据结果,我们推测:L和NS蛋白可能共同构成RNA聚合酶复合物;而与病毒RNA紧密结合的N蛋白可能具有保持基因模板活力的功能。 相似文献
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家蚕细胞质多角体病毒(CPV)双链RNA为模板的RNA多聚酶和转甲基酶的蛋白亚基组成 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以家蚕CPV的基因与酶复合物为材料进一步研究了家蚕CPV-的RNA多聚酶和转甲基酶的蛋白亚基组成,一种方法是直接用~(125)Ⅰ-标记的基因与复合物中的蛋白质分析。其中含有三种不同分子量的蛋白质即结构蛋白P1(分子量33,000),P2(分子量67,000)和P4(分子量142,000),这三种结构蛋白在SDS-等电聚焦电泳中都表现了二种以上分子量相同而电荷不同的蛋白。第二种方法是分别应用CPV的5种结构蛋白的抗体抑制CPV RNA多聚酶和转甲基酶的能力进行判断,结果表明CPV RNA多聚酶合有结构蛋白P1(33,000),P2(67,000)和P4(142,000),而转甲基酶主要由结构蛋白P1组成。 相似文献
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本文证明由蚕豆幼叶分离的细胞核具有很高的RNA聚合酶活力,可做为分离纯化RNA聚合酶的方便来源.细胞核在高浓度硫酸铵溶液中解体,超声处理释放出RNA聚合酶,然后用DEAE-cellulou和DEAE-Sephadex依次分部,或单独使用DEAE-Sephadex分部,得到了3个活力峰,根据层析性质和对α-鹅膏?肽的敏感性,它们相当于 RNA聚合酶Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ.二价金属离子 Mn或 Mg为酶活力所必需.Ⅰ和Ⅱ酶的最适Mn离子浓度为3mM,最适Mg离子浓度为mM.小牛胸腺DNA和蚕豆DNA具有相同的模板活力。 相似文献
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通过微机对烟草花叶病毒(TMV)RNA二级结构的分析并参照烟草环斑卫星病毒(sTobRV)的锤头型(hammer head)催化性RNA(即ribozyme或核酶)序列,我们在体外分别合成了以TMV移动蛋白(MP)基因区域正链和负链及正链3’末端序列为靶的锤头型核酶RZ1,RZ3和RZ2。体外结果表明,RZ1在50,37和30℃都能切割含有其靶序列的体外转录TMV RNA BT1(+)和BT2(+);与之相比,RZ3在50,37和30℃都只能部分切割靶RNA BT2(-)。至于RZ2,它对TMV正链3’末端内的靶序列的任何切割作用则未能观察到。我们在核酶RZ1的催化序列的茎环内或其3’末端引入了一个起稳定作用的序列CUUCGG以观察该序列对核酶的影响,实验表明这种修饰并不改变核酶的作用效率。 相似文献
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SARS病毒作为一种正链病毒 (Positive stranded RNA virus) ,其传播复制起重要作用的是其内部的 E蛋白、S蛋白、M蛋白、N蛋白、RNA聚合蛋白和蛋白水解酶 (Proteinase)等 6种蛋白质 .其中蛋白水解酶与 SARS病毒的复制密切相关 ,是抗 SARS病毒药物筛选的理想靶点 ,而它的三级结构则是研究病毒机理和进行药物设计的基础 .我们采用生物信息学的方法 ,利用 NCBI和 EBI提供在线蛋白质序列相似搜索工具 Blast和 FASTA3 ,找到同源性为 43 .791 %的 1 L VO(PDB编号 ) [1] ,并在 SiliconGranphics工作站上利用 Insight 的 Homology… 相似文献
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甜菜黄脉坏死病毒RNA3和RNA4全长cDNA的合成是分别以Oligo-d(T)_(15)为引物合成第一链cDNA,cDNA的第二链的合成则分别应用RNA3和RNA4特异引物完成。全长双链cDNA分别克隆在pGEM3Zf(+)载体中,置于噬菌体Sp6启动子控制下。在体外以质粒DNA为模板应用“run off”系统及Sp6RNA Polymerase成功地合成了大量的具有高度生物活性的转录产物RNA3和RNA4。在两种转录反应系统中,以第一种方法即转录与加帽(capping)分步进行转录效率高,第二种方法(转录与加帽同时进行)转录效率较低,但转录产物侵染性更高。虽然在RNA3和RNA4转录产物的5′末端和3′末端分别含数目不同的非病毒核酸序列,但转录产物的活性并未受到显著的影响。应用这种具有高度生物活性的体外转录产物与该病毒Rg1分离物机械接种甜菜幼苗根毛,首次阐明了RNA3是导致甜菜丛根病的主要因素。 相似文献
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为探讨苯乙酸(PA)对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖抑制作用及其与RNA编辑酶ADAR1表达的相关性, 应用细胞计数及MTT法检测了不同浓度(0.5, 1.0, 2.0和4.0 mmol/L)PA对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖抑制作用, 通过流式细胞术(FCM)分析了各细胞周期的细胞百分比, 应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及免疫印迹杂交分析使用不同浓度(0.5, 1.0, 2.0 mmol/L)PA作用后肝癌细胞系SMMC-7721中RNA编辑酶ADAR1 mRNA及蛋白表达的变化. 结果表明, 肝癌细胞系SMMC-7721经不同浓度PA作用后, 增殖抑制率随作用时间延长及PA浓度增加而明显提高(P<0.05), 但2.0和4.0 mmol/L PA作用72 h后组间差异比较无统计学意义(P>0.05). 肝癌细胞系SMMC-7721中RNA编辑酶ADAR1 mRNA及蛋白表达随PA浓度增加而明显降低(P<0.05). 通过沉默SMMC-7721细胞中ADAR1的表达发现, ADAR1表达下调可有效抑制肝癌细胞增殖. 结果表明, PA可阻抑肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖, 且存在时间及剂量的依赖性, 作用机制与PA下调ADAR1表达相关. 相似文献
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C-myc反义RNA特异性诱发人食管癌细胞程序性死亡 总被引:3,自引:0,他引:3
本文报道以含有neo基因序列的逆转录病毒为载体,按1:1感染强度(细胞:病毒颗粒)向人食管癌细胞系EC8712中导入可持续产生互补于c-myc基因第二外显子及其两侧序列共1.53kb片段的反义RNA基因,得到G418抗性细胞。后者表型发生明显的改变,细胞生长抑制率为86.3%,c-Myc蛋白含量降低80%左右,而胎儿和成人食管上皮原代培养细胞的形态和生长速度没有明显改变。在1:10感染强度下,不经G418筛选,感染后12h行Southern blot(DNA)和Northern blot(RNA)分析,分别发现外源反义c-myc基因完整地整合到癌细胞基因组中并能有效表达,同时使内源性c-myc基因的表达降低了73.6%。病毒感染的瘤细胞在裸鼠体内形成肿瘤的能力明显下降。首次发现,反义c-myc RNA可抑制c-myc高表达的人食管癌细胞生长、诱导分化和程序性细胞死亡,同时,不损害或很少影响myc表达低的正常细胞。 相似文献
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RNA表观遗传修饰N~6-甲基腺嘌呤(m~6A)是真核生物信使RNA(mRNA)上存在的最为广泛的中间化学修饰。它在哺乳动物中存在较为广泛,证实m~6A为mRNA上的动态可逆化修饰,它由甲基转移酶复合物(编码器)催化形成,同时可以被去甲基酶(消码器)氧化去甲基;m~6A可以被结合蛋白(读码器)识别,进而调控mRNA的剪接、稳定性、翻译、出核等。相较之下,m~6A在植物中的研究较少。本文将简要回顾目前m~6A的研究进展,重点综述m~6A在植物中的研究结果,展望m~6A在植物生长发育和应对外界刺激时的潜在重要功能。 相似文献
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HIV-1整合酶的RNA适配子的筛选及活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过SELEX技术已经筛选到了多种HIV-1病毒相关蛋白,如:逆转录酶、Rev和Tat蛋白、核壳蛋白等的核酸适配子,然而以HIV-1整合酶为靶点的DNA或RNA适配子却鲜有报道.在结合缓冲液中以10mmol.L-1的Mg2+作为辅助因子,加入100mmol.L-1KCl筛选到了三个具有相似结构和托的适配子IN1,IN2和IN3.亲和力最高的适配子IN1的Kd为145nmol.L-1,保守区富含乌嘌呤碱基(G),缺失任何一个茎环结构会使亲和力减弱.缺失右端固定序列的IN1-L的Kd为283nmol.L-1,虽然不能形成四链结构但可以被G-四链T40214竞争结合,可能与T40214具有相同的结合位点. 相似文献
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Zn—TppS4极谱络合物吸附波的研究:中草药天麻,川芎,当归中锌的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
锌是人体必需的微量元素之一。它具有重要的生理功能和营养作用,是合成脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)和蛋白质必需的金属离子。锌是DNA,RNA聚合酶等80多种酶的组成成分及激剂,直接影响细胞代谢,免疫过程,细胞分裂和再生。最近美国有人提出缺 相似文献
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《高等学校化学学报》2015,(12)
从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)基因组中的ORF32230出发,通过氨基酸序列分析推测其可能为酰基氨肽酶基因,并与典型的脯氨酸寡肽酶家族成员一致,含有2个独立的结构域,活性中心由催化三联体丝氨酸-天冬氨酸-组氨酸(Ser-Asp-His)组成.将BSU32230的基因片段与p ET-21a载体相连,转入BLP(DE3)表达菌中,在0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在及20℃条件下诱导表达该蛋白.利用硫酸铵沉淀与Ni亲和层析对BSU32230蛋白进行纯化,并通过实验证明该蛋白同时具有酯酶和肽酶2种活性.该酶最佳反应温度为50℃,最佳p H值为8.0,40℃下半衰期约29 h,在p H=4~10范围内稳定.该酶能够在有机相中催化不对称Aldol加成反应,且反应产物的立体选择性较好(84.6%). 相似文献
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合成了由硒代半胱氨酸(U)、谷氨酰胺(Q)和色氨酸(W)组成的QUW,QWU,WQU,WUQ,UWQ和UQW 6个具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒三肽;采用双酶偶联法进行了GPx活力测定和稳态动力学分析;通过噻唑蓝(MTT)比色法、划痕愈合实验和Western blot技术表征了含硒三肽对肝癌Hep G2细胞生长和迁移能力的影响.结果表明,当U位于氨基端时,含硒三肽的GPx活力高于U位于中间位置或者羧基端时.UWQ催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的活力最高,其催化机制为乒乓机制.UWQ可使Hep G2细胞运动能力减弱,降低肝癌细胞的浸润转移能力. 相似文献
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游离125I与血浆蛋白的结合及其对血药浓度测定的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
通过体内、外实验, 研究了游离125I与血浆蛋白的结合及其在三氯乙酸(TCA)沉淀后的沉淀百分率, 并与125I-RGD-Sak在SD大鼠中不同时间血药浓度的结果进行了比较. 结果表明, 游离125I能与血浆蛋白结合, 并为TCA所沉淀, 且在一定范围内, 游离125I与血浆蛋白结合后的沉淀百分率与温育时间及游离125I的活度无关. 体内、外实验中, 游离125I与血浆蛋白结合后的沉淀百分率分别为(1.26±0.14)%及(1.38±0.33)%. 沉淀物中含有吸附在沉淀物表面的游离125I, 该吸附需要用TCA沉淀2~3次才能去除. 采用125I核素示踪法进行生物类制品的药代动力学研究时, 应对游离125I的影响进行校正. 相似文献