ERK通路对TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

为研究不同浓度TGF-β1、不同作用时间对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响,并在此基础上探讨ERK信号转导通路在TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用.取大鼠胸主动脉,用贴块法进行原代培养,取3～5代细胞.分别施加不同浓度TGF-β1(0、0.01、0.1、1、10ng/mL)作用24h和10ng/mL TGF-β1作用不同的时间(0、8、12、16、20、24h),用MTT法测定各组细胞吸光值,确定TGF-β1作用浓度和时间.再取生长正常的细胞,分四组:对照组,TGF-β1组,ERK阻断剂组和 TGF-β1 ERK阻断剂组.继续培养24h后,用MTT法测细胞的增殖活性.TGF-β1浓度≥1 ng/mL作用24h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05),10ng/mL TGF-β1作用时间≥12h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05),10ng/mL TCF-β1作用时间≥12h时吸光值明显低于对照组(P＜0.05);与对照组相比,其他三组吸光值均明显降低(P＜0.05),ERK阻断剂组吸光值低于TGF-β1组(P＜0.0 5).TGF-β1呈浓度依赖和时间依赖方式抑制体外培养的血管平滑肌细胞的增殖,ERK信号转导通路可能不参与TGF-β1介导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用.     

维甲酸对胎儿动脉导管和动脉平滑肌细胞的增殖及信号传导通路的影响

目的研究维甲酸在体外对胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞的增殖活性和其相应的细胞信号传导通路—ERK1/2细胞信号传导通路的影响。方法6例经水囊引产后的胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞经原代培养及传代培养(5代以内),通过免疫组织化学方法和ELISA方法检测维甲酸对细胞增殖核抗原的表达和ERK1/2细胞信号传导通路的OD值,并与对照组进行比较。结果①胎儿动脉导管平滑肌细胞:维甲酸组PCNA表达升高,同时伴有ERK1/2的OD值升高。②主动脉平滑肌细胞:维甲酸组PCNA表达降低,同时伴有ERK1/2的OD值降低。③肺动脉平滑肌细胞:维甲酸组PCNA和ERK1/2的OD值与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论不同来源的平滑肌细胞有着不同的生物学特性,对维甲酸的反应截然不同。     

不同还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察三种还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),在培养液中分别加入三种不同浓度的还原性巯基氨基酸(Hcy,Cys,GSH)对VSMCs进行刺激,24h后同MTT比色法测定细胞的活力,<'3>H-TdR测定细胞的增殖率.结果:随浓度增加.Hcy和Cys明显促进VSMCs增殖,Hcy的作用略强于Cys;GSH只有在极高浓度时(1000umol/L)才显著促进VSMCs增殖.结论:极高浓度的Hcy、Cys、GSH均可促进VSMCs增殖.     

缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

为探讨缝隙连接是否参与抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖及可能的分子机制,本研究以原代及传代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞为模型,实验分2组：对照组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸（18α-—Glycyrrhetinicacid,18Q—GA）组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,染料示踪分子传递法（划痕标记染料传输法）检测细胞的缝隙连接功能,Westernblotting法检测细胞中缝隙连接蛋白40（Cx40）和43（Cx43）表达。结果显示：（1）与对照组相比,18α-GA组MTT法测得的氏,。值及细胞周期S期比例均降低（P〈0．01）,细胞增殖活性减弱;（2）与对照组相比,18α-GA组罗氏黄荧光染料传递百分数显著降低,缝隙连接功能明显减弱（P〈0．01）;（3）与对照组相比,18rGA组Cx40和总Cx43蛋白表达无显著差异（P〉0．05）,磷酸化Cx43与非磷酸化Cx43的比值显著降低（P〈0．01）。由此可知,18α-GA可能主要通过下调血管平滑肌细胞磷酸化Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能减弱,从而抑制了血管平滑肌细胞的增殖。     

QKI对血管平滑肌细胞增殖的抑制功能

观察QKI蛋白对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,进一步完善血管平滑肌细胞增殖的相关机制.以大鼠的原代主动脉平滑肌细胞为研究对象,观察分别过表达QKI5、QKI6对血清促增殖作用的影响.细胞增殖采用MTT法和Western blot测定.结果血清可促进大鼠的原代主动脉平滑肌细胞增殖,过表达QKI可抑制血清刺激的血管平滑肌细胞的增殖.说明过表达QKI对血清刺激的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用有可能在一定程度上能够抑制高血压等病伴发的血管平滑肌增殖.     

超声对体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖影响

探讨影响大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的超声辐照强度和时间,分别用30、60、100、150、200W等辐照强度和10、30、60、100 s等辐照时间处理VSMCs.MTT法和细胞上清液NO含量测定法检测细胞的增殖状态.研究结果表明:超声辐照强度为30、60 W和时间为100 s时抑制细胞的增殖显著,且时间与强度之间无互作效应.     

雌二醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

1材料和方法1．1体外培养小牛胸主动脉SMC[4]1．2SMC48小时增殖率的测定[5]加药情况如下：0．1ng／mlE2组,lng／mlE2组,10ng／mlE2组,100ng／mlE2组,E2溶剂（DMSO,终浓度＜0．05％）对照和培养液对照;每组两种血清浓度2％,15％,各8孔,继续培养48小时;MTT法检测增殖率。1．3SMC集落形成率的测定[6]分组：0．1ng／mlE2,1ng／mlE2,10ng／mlE2,培养液对照和溶剂对照,12天后计算集落形成率。2结果2．1体外培养SMC形态特征贴决后3－4天SMC自组织块边缘萌出（图版a,b）,原代细胞形状多样,有星形、带状三角形、梭形等…     

GLUT-1在低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

体外培养人肺动脉平滑肌细胞(Human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs),实验处理后,通过对细胞增殖活性、细胞总量、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平、葡萄糖转运蛋白-1(Glucose transporter protein-1,GLUT-1)m RNA含量及蛋白表达水平等指标进行测定分析,研究GLUT-1在低氧诱导的HPASMCs增殖的作用.结果表明,在低氧条件下,HPASMCs的细胞增殖活性、细胞总量以及PCNA的蛋白表达水平、GLUT-1的m RNA表达和蛋白表达水平显著升高,且具有时间依赖性.而对GLUT-1进行基因沉默后,可部分逆转上述现象.证实了GLUT-1在低氧下的过度表达是引起HPASMCs异常增殖的原因之一.     

BK通道在血管平滑肌细胞迁移中的作用

观察BK通道在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)上的功能及数量发生变化时,对VSMC迁移速度的影响。用脂质体转染法使BK通道在VSMC上过表达,或用BK通道特异性阻断剂IBTX(iberiotoxin)阻断VSMC上BK通道的功能,在这两种情形下,观察VSMC迁移速度的变化。研究结果表明,当过表达BK通道于VSMC,与正常对照相比,其迁移速度明显减慢;反之,当BK通道功能被特异性阻断剂IBTX阻断后,VSMC的迁移速度明显加快。最后认为BK通道的表达水平与VSMC的迁移速度呈负相关,过表达BK通道抑制VSMC的迁移。     

左旋精氨酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的的影响

观察左旋精氨酸(L-Arg)对大鼠主动脉平滑肌细胞一氧化氮(NO)含量,细胞增殖以及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其发生机制。原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为2组,对照组和L-Arg组。各组培养24 h后检测NO、XTT、VEGFmRNA。L-Arg组NO释放量,VEGF表达量远远高于对照组(P<0.01),但XTT显示细胞增殖活性明显下降(P<0.01)。L-Arg可有效抑制血管平滑肌细胞的增殖、增加NO、VEGF的表达,其机制可能与NO的作用,以及NO与VEGF之间的相互调控有关。     

微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

研究常氧下微血管内皮细胞(MVEC)与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的相互调节。先滤膜培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)后,再与PASMC复合培养,采用流式细胞仪检测PASMC周期的变化。复合培养后,正常情况下使PASMC的G1期细胞数减少,S＋G2／M期细胞数增多,即促进细胞生长;使LMVEC田C的G1期细胞数增多,S＋G2／M期细胞数减少,即抑制细胞生长。可见,MVEC与PASMC复合培养后,常氧下促进PASMC细胞生长,抑制LMVEC的增生,存在相互作用。     

重组人三叶因子3对细胞的增殖及迁移的影响

将重组人三叶因子3(Trefoil factor 3, TFF3)作用于人结肠肿瘤细胞,研究重组蛋白对细胞增殖的影响,结果发现该蛋白在较低的浓度(10～50 mg/L)下对细胞的增殖基本没有影响,在100～200 mg/L浓度下该蛋白对细胞仅有微弱的刺激作用,提高浓度对细胞增殖作用没有改变。同时研究了TFF3对损伤的单层结肠肿瘤细胞迁移的影响,发现TFF3对细胞有明显的促进迁移作用。     

白介素-10对TNF-α介导血管平滑肌细胞增殖的影响

观察重组人白介素 10 (rhIL_10 )对肿瘤坏死因子 (TNF_α)刺激的离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果显示 ,TNF_α对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL_10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响。在TNF_α刺激下 ,低至 10ng mL的rhIL_10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白非Ca2 依赖性磷酸化(2)

为了初步揭示肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对肌球蛋白(myosin)非Ca2 依赖性磷酸化的特征 试验方法采用10%甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳检测myosin的磷酸化,用孔雀绿法测定myosin Mg2 -ATP酶活性及选择Scoin Image扫描软件分析所获得的数据。提出在MLCK参与的myosin活性调节中,myosin以非磷酸化、非Ca2 依赖性(CIPM)及Ca2 依赖性磷酸化(CDPM) 种状态存在 研究发现非Ca2 依赖性磷酸化myosin有以下特征:(1)耗能(Mg2 -ATP酶活性)高于非磷酸化myosin但低于Ca2 依赖性磷酸化myosin;(2)花生四烯酸(AA)可选择性加强myosin非Ca2 依赖性磷酸化;(3)在本试验条件下,未观察到MLCK抑制剂ML-9对非Ca2 依赖性myosin磷酸化的抑制作用;(4)组胺(histamine)对非Ca2 依赖性的抑制小于对Ca2 依赖性磷酸化的抑制,且这些差异在统计学上有显著性。以上结果提示myosin非Ca2 依赖性磷酸化不仅在程度上,而且在机制上与Ca2 依赖性磷酸化可能存在重要区别     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白非Ca^2＋赖性磷酸化（2）

为初步揭示肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对肌球蛋白(myosin)非Ca^2 依赖性磷酸化的特征。试验方法采用10％甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳检测myosin的磷酸化,用孔雀绿法测定myosin。Mg^2 -ATP酶活性及选择Scoin Image扫描软件分析所获得的数据。提出在MLCK参与的myosin活性调节中,myosin以非磷酸化、非Ca^2 依赖性(CIPM)及Ca^2 依赖性磷酸化(CDPM)三种状态存在。研究发现非Ca^2 依赖性磷酸化myosin有以下特征：(1)耗能(Mg^2 -ATP酶活性)高于非磷酸化myosin但低于Ca^2 依赖性磷酸化myosin;(2)花生四烯酸(AA)可选择性加强myosin。非Ca^2 依赖性磷酸化;(3)在本试验条件下,未观察到 MLCK抑制剂ML-9对非Ca^2 依赖性myosin磷酸化的抑制作用;(4)组胺(histamine)对非Ca^2 依赖性的抑制小于对Ca^2 依赖性磷酸化的抑制。且这些差异在统计学上有显性。以上结果提示myosin非Ca^2 依赖性磷酸化不仅在程度上,而且存机制上与Ca^2 依赖性磷酸化可能存在重要区别。     

重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及对其增殖的影响

探讨重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响。将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中 ,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量。观察转染后平滑肌细胞生长状态情况 ,用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果正常细胞组NO的含量为78.4 4± 1 5 .38,而iNOS转染组NO含量为 2 36 .5 7± 31 .83,两组相比有非常显著差异 (P =0 .0 0 0 ,n =6 ) ,血管平滑肌细胞转染后生成一氧化氮。转染后的平滑肌细胞生长明显受到抑制 ,主要抑制平滑肌细胞周期G1 S期的过渡 ,使细胞停留在G1期。说明血管平滑肌细胞可以成功转染iNOS基因 ,生成的一氧化氮可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,为从血管非内皮成分进行iNOS基因转染提供了实验研究的依据     

NO诱导血管平滑肌细胞凋亡中Ca~(2 )的作用

探讨了ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡与细胞内游离Ｃａ２＋之间的关系．通过粘附式细胞仪和Ｃａ２＋ 荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ,检测分析了ＮＯ在供体ＳＮＡＰ的作用下,血管平滑肌细胞中游离Ｃａ２＋浓度的变化; 又通过ＳＮＡＰ与维拉帕米、ＥＧＴＡ、肝素钠、普鲁卡因共同孵育的方法,观测了Ｃａ２＋浓度变化在细胞凋亡中 的作用．得出ＳＮＡＰ能使细胞中游离Ｃａ２＋浓度升高,而胞外Ｃａ２＋内流在其中起主要作用;并且阻断胞外 Ｃａ２＋内流能够抑制ＳＮＡＰ所诱导的血管平滑肌细胞的凋亡．提示了胞内Ｃａ２＋浓度升高可能是ＳＮＡＰ诱导血管 平滑肌细胞凋亡的一条途径．     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化

发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。     

人结肠癌中C-erbB-2,EGFR 的蛋白表达

目的探讨人结肠癌中 Ce-erbB2,EGFR 的蛋白表达.方法应用免疫组织化学方法对人结肠癌细胞系LST14,HT10进行检测.结果2株结肠癌细胞系中均有其表达.结论 CerbB-2,EGFR可能具有协同作用.