与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

载体表达siRNA抑制HBV复制与基因表达

用载体表达siRNA的方法并通过RNA干扰达到抑制乙型肝炎病毒（HBV）的复制及其基因的表达．针对HBV的S基因选取4个靶位点，并将目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统，从4个位点中筛选到一个有效的作用位点．用半定量RT-PCR、ELISA、Western blot和荧光定量PCR等方法对筛选到的有效位点进行了验证，结果表明，siRNA成功降解了HBVS基因的mRNA，降低了S蛋白的表达水平，有效地抑制了HBV的复制．     

一种与HBx蛋白相互作用未知蛋白抗体的制备及其应用

本研究构建UK蛋白的原核表达载体pET28-UK，转化BL21宿主菌，经过IPTG诱导、表达、纯化，获取UK蛋白，制备抗原，免疫杭州大耳白兔．经过3次免疫后心脏采血，吸取血清作为抗体．经过ELISA和免疫荧光试验验证，陔抗体町以识别机体UK蛋白．本研究为深入阐明HBx与UK蛋白的相互作用的功能性试验，以及完全阐明UK蛋白在细胞内的功能奠定了基础．     

活性染料与酶蛋白之间的亲和作用

活性染料与酶蛋白之间有着特异性的亲和作用，可用于亲和层析或亲和分配提取蛋白质。染料末端结构的微小修饰会引起亲和作用的显著变化，且染料载体不同对亲和作用也有一定的影响。以游离活性染料为亲和配基，提出了从组织匀浆液中提取乳酸脱氨酶的二次萃取流程。     

栀子苷与热处理大豆分离蛋白相互作用机理

为探究栀子苷与不同热处理大豆分离蛋白的相互作用的机理,以Zeta电位、粒径及微观样貌观察(SEM)为指标对栀子苷-热处理大豆分离蛋白复合物进行表征,并采用荧光光谱法探究栀子苷与不同热处理大豆分离蛋白之间的淬灭方式、结合位点数、结合作用力类型。结果表明,栀子苷会使热处理大豆分离蛋白的Zeta电位绝对值增大,粒径减小,且栀子苷与80℃热处理大豆分离蛋白的复合物Zeta电位绝对值最大,粒径最小;栀子苷与热处理大豆分离蛋白之间淬灭过程是自发的,机制为静态淬灭,相互作用类型为范德华力和氢键,并形成了结合位点数近似于1的复合物。     

SARS-CoV S蛋白的原核表达及其粘膜免疫效应

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的S（Spike）蛋白是病毒表面最主要的膜蛋白，在病毒的感染过程中起重要作用，是冠状病毒的主要抗原．以SARS冠状病毒的cDNA为模板，通过PCR得到S△1（151～1200bp）、S△2（1201～2250bp）和S△3（2251～3150bp）3段基因序列，克隆到表达载体pET-32a，在大肠杆菌BL21中诱导表达得到包涵体蛋白，经Western blot检测正确后，将此作为抗原以滴鼻和腹腔注射两种小同的途径免疫BALB／c雌性小鼠，3次免疫之后采集小鼠的血清和肺洗液，经酶联免疫吸附实验（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）检测其中的抗体IgG和IgA．结果表明S蛋白通过滴鼻途径既能刺激产生一定的血清IgG，更能诱导肺粘膜产生特异IgA抗体．进一步比较分析发现，诱导粘膜免疫的效应区域主要位于S△2（401～750aa）蛋白区段．     

基于光谱学技术结合分子模拟研究芹菜素与大豆分离蛋白的相互作用

以大豆分离蛋白(SPI)与芹菜素(API)为研究对象,通过采用荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法和圆二色光谱法并结合分子模拟技术研究芹菜素与大豆分离蛋白之间的相互作用。荧光滴定结果表明,芹菜素对大豆分离蛋白的荧光有较强的猝灭作用,为静态猝灭机制。获得的热力学参数熵变与焓变均为负值,表明芹菜素与大豆分离蛋白间的相互作用力主要为氢键和范德华力。同步荧光实验表明,芹菜素与大豆分离蛋白结合导致酪氨酸残基周围微环境疏水性增加和色氨酸残基周围微环境极性增加。三维荧光光谱和圆二色光谱实验表明,芹菜素与大豆分离蛋白作用使得蛋白质多肽链部分伸展,蛋白质表面疏水性下降,巯基含量增加,进一步的分子模拟显示芹菜素分子分别插入到大豆分离蛋白的SPI-7s和SPI-11s的疏水空腔中,与LEU226,GLN77,THR75,HIS76,ASN74以及THR353,THR328,MET329,LEU354,ASP342,LYS113,THR358,LYS330等氨基酸残基发生相互作用,并与HIS76,ANS74以及ARG340,LYS330,THR358,THR328和SER339氨基酸残基形成氢键。     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）．利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ＰＥＸ．ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表达具有明显的抑制作用，从而为在真核水平上利用反义ＲＮＡ对Ｘ基因进行调控的研究提供了有利的基础．     

用酵母双杂交系统系统发现HaNPV衣壳蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用

成功的构建了棉铃虫细胞（Hz-AM1)的cDNA文库（Ha-cDNA）,然后以棉铃虫核型多角体病毒衣壳蛋白VP39（HaNPV-VP39)作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system),在棉铃虫细胞cDNA文库中钓到了VP39的相互作用因子基因,通过DNA测序和氨基酸序列分析表明,该基因为棉铃虫的肌动蛋白（actin)基因,本实验从一个侧面反映了VP39蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用。     

幽门螺杆菌临床菌株主要蛋白抗原表达及其诱导宿主产生抗体差异性的研究

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为选择幽门螺杆菌基因工程疫苗抗原提供依据．实验结果显示,rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB表达量分别约为细菌总蛋白的35％、32％、15％、230．4、56％、25％和20％．各重组抗原均能与商品化幽门螺杆菌抗血清（DAKO）产生阳性WesternBolt结果,免疫家兔能产生特异性抗体．从332例慢性胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜活检标本中,分离获得145株幽门螺杆菌,其阳性率为43．8％．所有幽门螺杆菌临床菌株均表达UreB、HpaA、FlaA和FlaB,52．4％、91．7％和93．1％菌株分别表达VacA、CagA和NapA．145例幽门螺杆菌感染的病人血清中,UreB、HpaA、VaeA、CagA、NapA、FlaA和FIaB的IgO抗体阳性率分别为100％、86．9％、42．8％、70．3％、89．7％、84．8％和79．3％．此外,不同胃疾病标本中幽门螺杆菌分离率均无显著性（P〉0．05）,但菌株VaeA和NapA表达率与疾病严重程度相关（P〈0．05）．综合分析实验结果,ureB是研制幽门螺杆菌基因工程疫苗首选抗原,其次是NapA和HpaA;各病种与幽门螺杆菌感染率无关,但与菌株毒力有关．     

白杨素与人免疫球蛋白结合作用的光谱行为

在模拟人体生理条件下,采用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱法研究了在不同温度下,白杨素与人免疫球蛋白结合反应的光谱行为。结果表明,白杨素与人免疫球蛋白的相互作用为静态猝灭过程,求出了不同温度下的猝灭常数。根据Frster的非辐射能量转移理论,计算出白杨素在蛋白质中的结合     

3G终端拼音输入法字库搜索算法的设计与实现

手机现有拼音输入法在字库容量较大时,输入效率比较低,搜索算法和结构还不是很合理,本文设计的编码采用了树型数据结构,并根据此结构设计了1种优秀的搜索算法,添加的辅助信息,可提高用户的文本输入效率,且所占空间少,该新的拼音输入法已成功移植到3G终端开发板中。     

甲醇与金属离子相互作用的DFT研究

采用量子化学的DFT理论,在B3LYP水平上模拟了光催化H2O还原CO2的目标产物CH3OH与几种金属离子在基态时的相互作用,研究发现相对高价的金属离子在基态低配位数时会使甲醇分子离解,而高配位且电荷被大部分中和后则不会使其离解,中间价态的离子配位数达到4(含)以上则不会使其离解,     

一种通用的Beyond 3G Multi-Radio接入架构

下一代移动通信网(Beyond 3G)是多种无线接入(Multi-Radio)共存的融合网络.如何有效集成异构无线网络,优化使用全部的无线资源是B3G研究领域内关键课题之一.在分析目前多种异构无线网络整合方案的基础上,借鉴欧洲IST 6th框架中Multi-Radio接入架构的基本思想,考虑在链路层实现异构无线网络之间的整合,从而提出一种通用B3G Multi-Radio接入架构模型,该模型可以无缝融合多种无线接入技术、有效利用全网无线资源.     

一类重试率为常数的M [X ]/G/1重试排队模型的适定性

运用Hille-Yosida 定理与Phillips 定理证明服务失效的状态为吸收状态及重试率为常数的M [X]/G/1重试排队模型存在唯一的正时间依赖解。     

四羧基锰(Ⅲ)酞菁与ONOO-的相互作用

研究了四羧基锰（Ⅲ）酞菁（Mn（Ⅲ）TcPc）与ONOO^-的相互作用及其对ONOO^-硝基化酪氨酸（Tyr）和损伤DNA的影响．结果表明Mn（Ⅲ）TcPc能与ONOO^-作用，并可促进ONOO^-对Tyr的硝基化，该硝基化作用能被谷胱甘肽（GSH）或抗坏血酸（Vit C）等生物还原剂抑制；该硝基化作用与pH值有关，以pH7为最合适，Mn（Ⅲ）TcPc能抑制ONOO^-对DNA的损伤作用，GSH对Mn（Ⅲ）TcPc有还原作用，并对上述的促进或抑制Tyr硝基化反应的机理进行了理论解释。     

荧光光谱法研究罗丹明B与DNA的相互作用

在pH=7.4的三羟甲基胺基甲烷-盐酸(Tris-HCl)的缓冲溶液中,利用荧光分光光度法研究了小分子染料罗丹明B(RB)与小牛胸腺DNA(CTDNA)的相互作用.实验考察了离子强度、阴离子猝灭剂KI对RB-DNA体系的影响.结果表明:DNA的存在使得RB的荧光强度显著降低,RB以沟槽模式与DNA相互作用.     

基于几何不变量的蛋白质三维分子结构比对

为了解决蛋白质三维结构比对需要处理大量的旋转、平移变换，直接用动态规划将变得十分繁琐这一问题，在保留蛋白质空间结构属性特征的基础上，对蛋白质三维数据进行了预先的处理．通过计算蛋白质结构在旋转和平移下的几何不变量，将蛋白质的三维结构坐标变换为具有旋转、平移不变性的一维序列．进一步给出了“距离”以及“相似得分”的定义．在此基础上采用动态规划方法给出了新的蛋白质结构比对算法．对专家分类的蛋白质结构数据库进行测试，结果显示准确、快速．     

荧光光谱法探索多巴酚丁胺与BSA的相互作用

用荧光光谱法研究在人体生理pH条件下药物多巴酚丁胺与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明,多巴酚丁胺对BSA内源性荧光有较强的猝灭作用,且猝灭类型为静态猝灭.根据猝灭结果求得了298、301、304 K3个不同温度下多巴酚丁胺与牛血清白蛋白结合作用的结合位点数、结合常数以及反应的热力学参数,由此确定出2者之间的主要作用力为疏水作用力.而应用竞争实验确定了多巴酚丁胺在BSA上的结合位点为II位;用同步荧光光谱法探讨多巴酚丁胺对BSA构象的影响.