置换色谱及其在生物分子分离纯化中的研究进展

介绍了置换色谱及其实验条件, 总结了该技术在生物分子分离纯化方面的研究进展。     

气相色谱-红外光谱联用分离鉴定烷基膦酸酯类同分异构体

1　引　　言烷基膦酸 O 烷基酯是禁止化学武器公约禁控化学品附表中一类重要的化合物。这类化合物的结构中有 3个烷基基团 ,进行组合搭配后可产生多种同分异构体。因此 ,化学武器履约核查时很难对这类化合物进行分离并作出明确鉴定。异丙基膦酸二正丙酯和异丙基膦酸乙基丁基酯是一对同分异构体 ,是国际联试中由中国提供的样品 ,性质非常相似 ,普通方法很难分离。本文利用GC Tracer FTIR仪器Tracer接口的ZnSe片可移动的特点 ,优化色谱条件 ,实现了两化合物的完全分离。同时通过联合运用红外光谱鉴定其结构 ,获得了满意的结果。2　实验…     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定饲料中9种雄性激素类药物

建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析动物饲料中违禁添加的去氢睾酮(BOL)、表睾酮(epiAn)、氟甲睾酮(FT)、去氢甲睾酮(美雄酮)(MD)、甲睾酮(MT)、丙酸诺龙(NP)、诺龙(N)、丙酸睾酮(TP)和睾酮(T)9种药物的分析方法。样品经乙酸乙酯振荡提取,再用基质固相萃取方法净化处理后,采用UPLC-Q-TOF-MS分析检测。在电喷雾正离子模式和飞行时间模式下,输入各化合物的精确分子离子质量数得到相应的提取离子色谱图,以色谱峰面积进行定量分析。通过碰撞诱导解离模式(CID)得到各化合物碎片离子的精确质荷比,进一步对各化合物进行定性分析。各化合物的质量精确度均小于5×10-6,9种化合物在0～1000μg/L范围内均呈良好的线性关系,线性系数均大于0.99。除诺龙和去氢甲睾酮外,本方法对各药物的检出限(LOD)均低于6μg/L;去氢睾酮、表睾酮、氟甲睾酮、去氢甲睾酮(美雄酮)、甲睾酮、丙酸诺龙、诺龙、丙酸睾酮和睾酮的定量限(LOQ)分别为16,10,20,43,20,12,15,10g和16μg/kg。3个添加水平(LOQ,2LOQ,4LOQ)的回收实验表明,化合物的回收率在70.0%～99.7%范围内,相对标准偏差(RSD)均小于10%。本方法的定性准确度明显高于文献报道的方法,可用于饲料中的禁用雄性激素药物的测定。     

置换色谱法分离表阿霉素和阿霉素异构体的研究

采用置换色谱法在Kromasil KR100-10C18色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.,10 μm)上成功地分离了二元异构体表阿霉素和阿霉素的混合物,并研究和探讨了置换剂类型、浓度、流动相的组成及流速对分离的影响。结果表明：选用30 g/L的海胺1622为置换剂,流速0.2 mL/min,以及在有机相比例较低的流动相中加样,而将置换剂溶解在有机相比例稍高的流动相中进行置换展开,可以达到较好的分离。在最佳分离条件下,采用置换展开方式可以在分析色谱柱上一次分离30 mg异构体的混合物。该结果充分     

高速逆流色谱对芦荟有效成分的制备性分离研究

1　引　　言由于高速逆流色谱具有两大突出优点 :(1 )聚四氟乙烯管中的固定相不需要载体 ,因而消除了液相色谱中由于使用载体而带来的吸附现象 ,特别适用于分离极性物质和具有生物活性的物质 ;(2 )由于其与一般色谱的分离方式不同 ,使其特别适用于制备性分离。芦荟的叶汁干燥品为一传统的常用中药。它除用作药物外 ,在化妆品行业己将芦荟系列作为我国今后的主要化妆品系列之一。另外 ,在饮料及食品等工业中 ,它得到了广泛应用。其化学有效成分主要是芦荟甙 ,以及一些少量的芦荟大黄素、异芦荟甙、β 芦荟甙等蒽醌类活性成分。2　实验部分2 .…     

高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查保健食品中10种雄性激素类非法添加物

建立了快速筛查保健食品中10种雄性激素类非法添加物的高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)法。样品经直接超声或液液萃取,C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm,1.8μm)分离,以0.1%甲酸溶液(含10 mmol/L乙酸铵)-0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,采用HPLC-Q-TOF MS检测。构建10种雄性激素的一级精确质量数据库和二级谱库,通过化合物的精确质量数、保留时间、同位素比值、二级谱图等信息对检测结果进行自动检索,实现对实际样品快速准确的定性分析。结果表明,10种雄性激素在2～500 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r²)均大于0.999,在固体基质、液体基质和油性基质中的检出限为0.01～0.06 mg/kg,定量下限为0.03～0.2 mg/kg,平均回收率为74.3%～113%,相对标准偏差(RSD)为1.2%～7.7%。该方法利用自建标准谱库检索实现快速筛查,样品前处理方法简单,具有专属性好、快速、灵敏、高效等优点,适用于缓解体力疲劳类保健食品中非法添加物的快速筛查和识别。     

薄层色谱在有机物顺反及对映异构体分离中的应用

体异构体和光学异构体分离技术的发展已有较综合的论述ｌ‘”‘］。利用ＴＬＣ对光学异构体进行拆分的方法主要有两种。１）使用手性同定相ｌ’,‘］;２）利用手性流动相在非手性固定相上进行拆分ｒ‘。本文对立体异构体的分离采用一般的ＴＬＣ法,对对映异构体的分离选用ｐ－ＣＤ手性流动相,＊一奎宁手性流动相和手性固定相纤维素板及非手性Ｃ;ｓ反相板对三哇及氨基酸进行了拆分,并初步探讨了方形板及楔形板展开对分离效果的影响。１实验部分１．１试剂及材料二哩类化合物及标样均为自制,标样均通过元素分析;Ｄ,Ｌ一色氨酸,Ｄ一色…     

环糊精-十二烷基硫酸钠胶束电动色谱分离光学异构体的模型及色谱条件优化

建立了环糊精-十二烷基硫酸钠胶束电动色谱中可电高及电中性-光学异构体的分离模型。通过计算机模拟预测了多种操作因素对手性分离可能产生的影响，并通过对丹磺酰化氨基酸及十八甲基炔诺酮旋光异构体的分离对理论预测进行了验证。研究表明，环糊精及SDS浓度对旋光异构体的分离有很大影响。利用该理论模型可以指导选择和优化实验条件。     

金属-有机骨架材料在色谱分离中的应用

金属-有机骨架材料（Metal-organic frameworks,MOFs）,因其具有较好的热稳定性、化学稳定性、可设计性等特点,广泛应用于气体吸附、物质分离、提纯、催化等领域,同时也作为模板制备各种功能材料.MOFs作为色谱分离的材料已得到了较多的研究与应用.按照被分离物质的类别,综述和总结了不同MOFs材料作为色谱固定相的分离效果,重点介绍了MOFs材料的色谱分离机理.MOFs材料的孔径、功能基团和不饱和金属位点在分离中起到重要的作用,最后对MOFs在色谱分离应用中的问题和前景进行了分析和展望.     

反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备

用反相高效液相色谱（RPLC）对两种化学合成多肽－－32肽和21肽进行了分离、纯化和制备。在用分析型RPLC色谱柱对多肽样品的制备过程中，对其进样量和洗脱梯度进行了选择。每次进样量为5mg，在最优化色谱条件下，用RPLC一步就可对21肽进行分离纯化，其纯度达到98.6%。而32肽由于样品组分更加复杂，RPLC一步纯化后其纯度仅有80％。通过对色谱分离条件的再次优化，对32肽进行二次分离纯化，纯度达杂，RPLC一步纯化后其纯度仅有80％。通过对色谱分离条件的再次优化，对32肽进行二次分离纯化，纯度达到96.4%。在其最优化条件下，通过多次样品收集和冷冻干燥，分别制备了高纯度的21肽和32肽各100mg。     

高效液相色谱-质谱分离分析血浆、尿样中异亮氨酸异构体

建立了用邻苯二甲醛和N-乙酰-L-半胱氨酸为柱前手性衍生化试剂,反相高效液相色谱法分离生物样品中异亮氨酸4个异构体,并以电喷雾电离质谱(ESI-MS)进行检测的高灵敏度的分析方法。对D-Ile、D-al-lo-Ile和L-allo-Ile检测的线性范围为5~500ng,相关系数分别为0.9967、0.9968和0.9993;对L-Ile检测的线性范围为50ng~5μg;相关系数为0.9990。在正常人血浆中检测出了L-Ile(204(113.8mg/L)和L-allo-Ile(1·16±0.71mg/L),在正常人尿样中检测出了L-Ile(6.10±2.24mg/L)和D-allo-Ile(0.53±0.17mg/L)。     

基于点击化学的色谱分离材料研究新进展

自诺贝尔奖获得者Sharpless教授2001年首次提出点击化学概念以来,该类反应凭借条件温和、反应迅速、产量高、副产物少、分离提纯简单等优势,迅速拓展至材料和生命等诸多科学领域,成为一种强大的模块化合成工具。目前,点击化学反应已成为设计制备分离材料的重要手段,展现出蓬勃发展的现状。本文首先简要地回顾了点击化学的发展历程并介绍了其独特优势,然后聚焦于柱色谱和膜色谱两大分离领域,系统地综述了近5年发表的基于点击化学的色谱分离材料相关报道,重点归纳了叠氮-炔、巯基-烯和巯基-炔这3种常见点击反应类型在色谱分离材料研究中的最新进展,最后对点击化学在开发高效分离材料方面的发展前景进行了展望。     

基于亲水作用色谱的寡糖色谱分离新进展

亲水作用色谱(HILIC)作为一种分离极性化合物的液相色谱模式,可以作为反相液相色谱的重要补充,解决极性化合物的分离问题。近几年,HILIC研究发展十分迅速,应用领域也不断拓展,其中寡糖分离是HILIC最典型的应用领域。HILIC适合分离强极性和亲水性样品,是寡糖分离的理想色谱模式。基于HILIC的寡糖分离技术发展迅速,本文以近期发表在主要国际刊物的几个工作为典型案例,介绍HILIC用于寡糖色谱分离的若干进展。     

高效液相色谱手性固定相法分离R基-3-吡啶基亚砜对映体

利用正相高效液相色谱法在一种纤维素衍生物手性固定相（OB-H）上成功分离了一系列（7个）的R基-3-吡啶基亚砜的对映异构体。通过考察流动相中异丙醇的含量和温度对手性分离的影响，优化色谱分离条件。随着流动相中异丙醇含量的增加，除了带有支链的化合物Ⅲ外，其他6个化合物对映体的容量因子k’和分离度Rs都会减少。柱温变化对分离度的影响不大。长的碳链和支链都会使溶质与固定相的作用减弱，因此，容量因子k’和分离度Rs也会减小。所有测试结果显示：该固定相对这类化合物有较好的分离效果。最佳分离条件是流动相中含有30％的异丙醇，柱温为25℃。     

液相色谱-质谱联用分离拉呋替丁的顺反异构体

拉呋替丁是一种新型非竞争性组胺H2受体拮抗药，目前正处在报新药阶段。本品存在顺反两种异构体，主要成分为顺(Z-)式异构体，含少量反(E-)式异构体。随着药物构效关系研究的深入，药物异构体的分离分析日益被人重视。到目前为止，分离检测拉呋替丁的顺反异构体未见文献报道。本研究利用聚酰胺型ChiraSpher色谱柱，考察了拉呋替丁的顺反异构体的分离。     

固定金属离子亲和色谱--蛋白质分离的方法、原理、特性和应用

介绍了固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的方法原理、金属螯合柱的制备、固定金属离子与蛋白质的相互作用以及影响这些作用的因素、不同色谱条件下各种作用力对蛋白质保留值的贡献、蛋白质的洗脱原理和IMAC在蛋白质分离纯化中的应用,论述了IMAC的特点、不足、克服的方法和今后应解决的问题。     

线性柱色谱分离过程的递推方程

依据非平衡热力学分离理论中的局域平衡假设和流体力学的Lagrangian描述方 法，首次提出了线性柱色谱分离过程中溶质带迁移和扩散的状态递推方程，克服了 以经典动力学为基础的塔板理论不能准确预测时变控制条件下溶质扩散的局限性。 反相色谱梯度洗脱的实验数据支持递推方程的理论预测，与基于塔板理论的预测方 法比较，状态递推方程法更具优越性。状态递推方程还为采用动态优化控制柱分离 过程奠定了基础。     

几种核苷的毛细管胶束电动色谱分离

在胶束电动色谱模式下,考察了影响核苷分离的缓冲溶液、SDS浓度、pH、表面活性剂、有机添加剂、分离温度及外加电压等重要因素,并优化了关键的分离条件,建立了一种简单快速的利用毛细管胶束电动色谱DAD检测器分离分析核苷的新方法。当缓冲溶液为36 mmol/L硼酸缓冲液(pH 9.0)、30 mmol/L SDS和3%(V/V)乙腈,分离电压为25 kV和分离温度为25℃时,5种核苷在6 m in内实现了令人满意的基线分离。在优化的条件下,对其线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明,核苷的迁移时间的重现性<1%;面积的重现性<3%。所建立的分离方法的线性范围宽,检出限低,重现性好。     

色谱累加进样分离实验条件的研究

在采用反相液相色谱或亲和色谱完成蛋白质等大分子分离时,根据溶质保留值随溶剂梯度变化曲线上突变点的差别,可以通过累加进样分离法进行样品制备或直接柱内富集分析,但这一方法并非在任意条件下、对任何样品都适用。该文根据不同形式的保留值方程从理论上探讨了样品保留值与进样时间差、梯度洗脱速率等实验条件之间的关系;结果表明：两次进样的出峰时间差与进样时间间隔成正比关系,也与其在等度情况下的容量因子有关。样品中的两种组分在间隔进样时的流出时间差主要由两组分的容量因子决定,当样品中存在两种以上保留性能相近组分时,若保证指定的分离度,进样时间间隔存在一极大值,超出该范围,分离条件将不能满足