佛手挥发油对B16细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响

为检测佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响,采用台盼蓝排斥法测定了细胞存活率、瑞-姬氏混染法观察了细胞形态变化、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测了细胞的凋亡与坏死,用酶学方法测定了细胞中酪氨酸酶活性.结果表明:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性;62.50,125.00和250.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞6 h后,细胞核染色质凝聚于核膜内侧,呈固缩状或圆珠状,表现为典型的细胞凋亡特征;500.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞后,细胞膜破裂,出现细胞碎片,说明细胞已经坏死.酪氨酸酶活性检测结果显示:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.     

佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响

观察了佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响．以B16黑色素瘤细胞感染小鼠建立动物肿瘤模型,设正常对照组、阴性对照组和阳性对照组及佛手挥发油低、中、高剂量组,各组荷瘤小鼠予以相应的药物实施干涉14d,每天观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,14d后测定荷瘤小鼠的心、肝、肾中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量．与阴性对照组相比,50mg／kg剂量佛手挥发油能显著抑制雌性荷瘤小鼠移植瘤的增殖（P〈0．05）,显著提高其肝脏中SOD活性（P〈0．01）．表明佛手挥发油对B16移植瘤具有抑制作用．     

空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响

初步探讨了空间环境对黑色素瘤B16细胞致瘤基因和蛋白质表达的影响。选择经第20颗返回式卫星搭载的B16细胞,进行体外和体内实验后,筛选出性状变异明显的空间诱变B16细胞株,检测空间诱变B16细胞基因和蛋白质表达的变化。将筛选出的空间诱变B16细胞接种于C57BL/6小鼠,2周后,处死荷瘤小鼠,取出移植瘤,利用免疫组化方法,检测接种空间诱变B16细胞的荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白的表达情况;利用RT-PCR方法,检测蛋白质水平上表达变化明显的空间诱变B16细胞melan-a,gp100,bag-3和l-pgds基因的表达情况。与对照细胞相比,1株空间诱变B16细胞荷瘤小鼠移植瘤细胞Melan-A和VEGF蛋白表达明显增加,其他细胞2种蛋白质的表达无明显变化。RT-PCR结果显示:此株细胞的melan-a,gp100和l-pgds基因表达增加,bag-3基因表达降低。空间环境的复合因素可诱导B16细胞基因和蛋白质表达产生变化。     

银杏叶多糖对人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

研究了银杏叶多糖(PGBL)对人恶性黑色索瘤(A375)细胞增殖的影响.采用50μg·ml-1、100μg·ml-1和200μg·ml-1浓度的PGBL作用于A375细胞,MTT法检测细胞生长和增殖情况.结果表明,不同浓度的PGBL都可抑制A375细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性.证明PGBL对恶性黑色素瘤有一定的防治作用.     

银杏叶多糖对人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

研究了银杏叶多糖(PGBL)对人恶性黑色素瘤(A375)细胞增殖的影响。采用50μg.ml-1、100μg.ml-1和200μg.ml-1浓度的PGBL作用于A375细胞,MTT法检测细胞生长和增殖情况。结果表明,不同浓度的PGBL都可抑制A375细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性。证明PGBL对恶性黑色素瘤有一定的防治作用。     

人参皂甙Rg1对3T3细胞增殖作用的研究

利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同浓度GRg1对3T3细胞增殖的影响.发现GRg1在适当浓度范围内可以促进3T3细胞的增殖,为进一步探讨GRg1的药理作用及对胚胎发育的作用机理提供一些研究基础.     

人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的增殖抑制的研究及对Bcl-2/Bax表达的影响

摘 要 目的：研究人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2/Bax表达的的影响。方法：1.MTT法测定人参水溶性总蛋白对黑色素瘤B16细胞株的增殖抑制率。2. RT-PCR（Real-time PCR）法检测Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。3.Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果：1.人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞株有明显的增殖抑制作用,其抑制率随着加药浓度的增加而升高,并与加药浓度呈现一定的量效关系。2.随着人参水溶性总蛋白浓度的增高（0,100,500,1000ug/mL）,RT-PCR检测的Bcl-2 mRNA相对表达量逐渐降低,Bax mRNA相对表达量逐渐升高,当加药浓度为1000ug/ml时,Bcl-2的相对表达量最低,为0.20±0.05,Bax的相对表达量最高,为16.83±0.07;与对照组相比,Bcl-2和Bax基因的相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。3.经Western blot测定,各组Bcl-2蛋白的表达均低于对照组,各组Bax蛋白表达均高于对照组,且随着加药浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐升高。结论：人参水溶性总蛋白可以抑制小鼠黑色素瘤B16细胞株增殖,其分子机制可能与调控Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表达有关。     

右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16增殖及细胞周期的影响

目的:探讨右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:右旋一叶萩碱作用于小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期。结果:右旋一叶萩碱以时间和浓度依赖的方式抑制B16细胞生长;药物作用72 h IC50为63.34μmol/L;右旋一叶萩碱诱导B16细胞凋亡并显著减少S期、G2/M期细胞。结论:右旋一叶萩碱可以抑制黑色素瘤细胞的恶性增殖,其作用机制与诱导细胞凋亡、减少S期和G2/M期细胞有关。     

pEGFP-IFI16表达载体构建及其表达对Hep-2细胞增殖的影响

RT-PCR扩增的IFI16基因连接到pUCm-T载体并测序鉴定,经测序正确的IFI16基因再连接到pEGFP-C1载体构建pEGFP-IFI16重组质粒,重组质粒pEGFP-IFI16转染Hep-2细胞后用荧光显微镜及半定量RT-PCR分析其表达情况,并用流式细胞仪测定细胞生长曲线分析其表达对Hep-2细胞增殖的影响.结果显示pEGFP-IFI16重组质粒构建正确,转染Hep-2细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,半定量RT-PCR结果显示转染后Hep-2细胞IFI16基因条带亮度明显升高,细胞生长曲线测定结果显示转染后Hep-2细胞从第二天起其增殖速度变慢、至第三天时其增殖速度明显慢于对照细胞的增殖速度.说明成功构建了能在Hep-2细胞中表达EGFP-IFI16融合蛋白的pEGFP-IFI16重组质粒,pEGFP-IFI16重组质粒体表达能抑制Hep-2细胞的增殖.     

LMP3-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

为构建人LMP3-EGFP融合蛋白真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达及定位,通过基因重组的方法构建LMP3／pEGFP-N3重组真核表达载体,并通过酶切和基因测序鉴定。脂质体法转染HEK293细胞,用倒置荧光显微镜检测、分析其在HEK293细胞表达及定位。经酶切和基因测序鉴定LMP3／pEGFP-N3重组真核表达载体构建成功。转染HEK293细胞后,荧光显微镜检测显示融合蛋白仅在细胞浆中表达。说明基因重组技术可成功构建LMP3／pEGFP-N3重组体真核表达载体,重组表达的融合蛋白仅存在于细胞浆内。     

黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明,XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移,阻滞细胞周期于G0/G1期,并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取,降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD⁺/NADH比率,下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外,XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之,本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型,并发挥抗肿瘤增殖和转移活性,或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。     

组蛋白H3K27乙酰化激活TRIM11的表达进而促进结肠癌细胞增殖

研究组蛋白H3K27乙酰化（H3K27ac）对三基序蛋白家族11(TRIM11)的表达及结肠癌细胞增殖的影响。用RT-PCR分析TRIM11 mRNA的表达,蛋白印迹分析TRIM11及H3K27ac的表达水平;用乙酰化酶及去乙酰化酶抑制剂处理细胞,分析H3K27ac水平与TRIM11基因表达水平之间的关系。通过敲低或过表达TRIM11,用CCK8、细胞集落形成实验和Edu检测TRIM11对细胞增殖能力的影响。结果表明,TRIM11和H3K27ac在结肠癌组织中高表达,且呈正相关。去乙酰化酶抑制剂处理结肠癌细胞后,H3K27ac的表达明显增强,TRIM11的表达也随之增高;乙酰化酶抑制剂处理结肠癌细胞后,结肠癌细胞H3K27ac的表达显著降低,TRIM11的表达也随之降低。TRIM11高表达可促进结肠癌细胞增殖。TRIM11在结肠癌发生发展中起促进作用,有望成为结肠癌潜在标志物。     

CD8、Foxp3和CD1a在口腔潜在恶性病变中的表达及临床意义

目的:利用组织微阵列技术从组织学层面上探究细胞毒性T细胞(CD8),调节性T细胞(Foxp3)和树突状细胞的表面标记(CD1 a)在口腔潜在恶性病变(OPMDs)组织中的表达情况,评估CD8、Foxp3和CD1 a在人口腔黏膜上皮异常增生过程中不同阶段的表达规律及其临床意义.方法:采用免疫组织化学染色(IHC)技术检测...     

hNIS转基因介导131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG.采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况.CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况.结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS.CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8 min.131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01).结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

瞬态电磁脉冲对细胞增殖的影响

实验采用有丝分裂指数测定法及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法,研究瞬态电磁脉冲对人外周血淋巴细胞及艾氏腹水癌细胞增殖的影响。结果发现,没有植物凝集素ＰＨＡ时,１００ｋＨｚ和２００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲对淋巴细胞有丝分裂指数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量无显著影响;有ＰＨＡ时,１００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲促进淋巴细胞摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ,细胞有丝分裂指数增加,２００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲抑制淋巴细胞摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ,细胞有丝分裂指     

红景天苷和顺铂对SKOV3细胞增殖作用比较研究

目的：比较研究顺铂、红景天苷对卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用影响.方法：设置顺铂组、红景天苷组和空白组,培养SKOV3细胞至对数期,将不同浓度的顺铂和红景天苷分别作用细胞24 h、48 h和72 h,采用CCK-8法测定细胞OD值,计算药物对SKOV3细胞增殖的抑制率、半抑制浓度(IC₅₀),比较药物对SKOV3细胞的抑制率、半数抑制浓度.结果：顺铂、红景天苷对SKOV3细胞增值的抑制作用均呈浓度和作用时间的依赖性,即抑制率与药物浓度呈线性关系.两组药物对SKOV3细胞的抑制率与空白组比较差异极显著(P<0.01).顺铂对SKOV3细胞的抑制效果显著高于红景天苷;顺铂和红景天苷48 h和72 h的半数抑制浓度极显著低于24 h(P<0.01),72 h的半数抑制浓度极显著低于48 h.结论：顺铂、红景天苷对SKOV3细胞增殖的抑制率与药物浓度和作用时间呈依懒性,两药物组的IC₅₀均与药物作用SKOV3细胞时间呈依懒性,两药物的总体抑制效果相似.本研究可进一步开发红景天苷,从而为抗卵巢癌新药提供思路.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达情况.方法应用免疫组化SP法检测42例原发口腔鳞状细胞癌患者的癌组织和20例口腔良性肿瘤患者正常黏膜上皮组织中Foxp3的表达,采用χ2检验进行统计学分析.结果 Foxp3阳性的CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达显著高于正常口腔黏膜组织,差异具有显著统计学意义(P0.01).Foxp3蛋白表达与肿瘤分化程度相关,在高、中分化组为63.64%,低分化组为100%,差异具有统计学意义(P0.05).且其阳性率与肿瘤TNM分期相关,Foxp3蛋白表达在Ⅲ~+Ⅳ期阳性率为88.24%,在Ⅰ~+Ⅱ期表达的阳性率为60%(P0.05).Foxp3蛋白表达与患者年龄、性别、淋巴结转移未见明显相关性(P0.05).结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞在口腔鳞状细胞癌中的大量浸润与肿瘤的发生、发展、浸润、转移密切相关,可能是导致口腔鳞状细胞癌患者不能进行有效抗肿瘤免疫的重要原因之一.     

原发性肝癌患者射频消融后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞对预后的影响

目的研究射频消融术治疗原发性肝癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细水平与预后的关系.方法回顾性分析102例原发性肝癌患者经射频消融治疗后外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值与生存时间的关联.结果原发性肝癌患者射频术后CD4+CD25+Foxp3+细胞占CD4+T的比例显著降低,与临床分期、肿瘤大小、AFP水平相关.CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目与生存率相关.结论原发性肝癌患者射频消融治疗后外周血Treg水平是判断预后的独立预测指标.     

293T细胞转染表达ARG1及其对砷代谢的影响

研究含有ARGI基因的真核表达载体PcDNA3.1-IE-ARG1转染真核细胞后,在细胞中的表达及对细胞砷代谢的影响。由脂质体介导将PcDNA3.1-IE-ARG1转染入293T中,用real-timePCR方法检测ARG1基因的表达,用原子吸收分光光度法测定24h砷染毒后细胞内砷含量及细胞排砷量。重组质粒成功转入293T细胞中且表达良好;与转染前细胞比较,转染重组质粒的细胞在不同浓度砷染毒下细胞内砷含量明显降低(P0.05),并且细胞的排砷量也高于转染前的;此外,转染表达ARGI基因的细胞在砷染毒48h后其内GSH及GST的含量高于转染前细胞。这些表明,ARG1基因在真核细胞中相对高表达后在砷代谢排出中发挥了一定的作用。     

PinX1基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

探讨了PinX1 基因在乳腺癌MCF-7 细胞生长和细胞周期中的作用, 初步探讨了该基因用于乳腺癌临床治疗的可行性. 采用RT-PCR 技术从293-T 细胞中扩增PinX1 基因, 将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1 中, 再将重组质粒转染MCF-7 细胞. 通过real-time PCR 检测PinX1 基因的mRNA 表达, 用MTT 法检测转染前后细胞生长曲线的变化, 用流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变. 检测结果表明, PinX1 基因已经在转染后MCF-7 细胞的细胞核内稳定表达, 乳腺癌细胞生长明显减缓(P <0.05), 增殖变慢(P <0.05), 细胞生长阻滞于G0/G1 期, 说明PinX1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的生长和增殖.