真空液相层析: 一种高效快速的有机物分离方法

液相柱层析是有机化学实验室最常用和有效的分离手段。其中常压柱层析(Gravity columnchromatography或称Open column chromatography),干柱层析(Dry column chromatography),快速柱层析(Flash column chromatography)等方法已为大家熟悉和广泛使用。本文介绍一种近年来在国外有机化学实验室流行的“柱”层析方法——真空液相层析(Vacuum Liquid Chromatography,以下简称VLC)。VLC法具有操作快速简便、高效价廉、样品处理量大等     

快速层析

柱层析技术是有机化学实验室必不可少的分离手段。但一般的柱层析非常费时,而高效(压)液相层析(HPLC)则需昂贵的设备、特殊处理的溶剂,目前也难于在一般实验室普遍使用。近年来出现的所谓FlashChromatography或其它类型的加压层析技术,克服了这二者的缺点,既快速简便,又有相当分离效果。这里简单介绍一种在我们实验室常用的快速层析方法。     

简便连续加压柱层析

简便连续加压柱层析蒲含林，汪波，朱可佳，郑其煌（中山大学化学系，广州５１０２７５）柱层析是有机合成，天然产物（化学等研究）中经常使用的一种分离提纯手段。实验室中，经常用的柱层析分离方法有３种：一是常压柱层析，洗脱剂依靠重力将混合物中各组分依次洗脱下来...     

离心纸上层析法

离心层析法是一种新的层析方法,其特点是在离心加速的作用下,进行物质的分离和鉴定。这种新的层析方式在各类层析技术中,都已获得了应用,从而出现了诸如离心纸上层析、离心柱层析、离心薄层层析和离心纸上电泳等层析方法。目前发展最迅速和应用最广泛的是离心纸上层析法(centrifugal paper chromatography)。本方法是在1955年首先由Caronna提出的,系将层析纸夹在两块圆形玻璃片中间,在离心旋转下,分离了生物碱类物质,仅需5—6分钟,即可获得满意的分离结果。1957年以来,McDonald等继续了这一研究,对离心加速装置和操作技术等进行了探讨。最近几年来,捷克斯洛伐克的分析工作者诸如Pavlicek和Deyl等,改进并制成了更完善的离心加速层析仪器,从而使这一新的层析技术成为分离和鉴定物质的快速方法。     

简易加压吸附柱层析法

柱层析是有机化学实验室中常用的有效分离提纯方法之一。传统的柱层析法是用洗脱剂靠重力作用将各组分从柱上依次洗脱下来,但存在的问题是:用颗粒较细的吸附剂,虽分离效果好,但非常费时;用颗粒较粗的吸附剂,洗脱速度快,但分离效果不够理想。为了解决这     

钙调蛋白分离纯化的吸附层析法

本文记叙了分离纯化猪脑钙调蛋白的一种新的吸附层析法。样品经DEAE一纤维素柱层析后,再经3520吸附树脂吸附层析即可获得电泳纯的样品。钙调蛋白在3520吸附树脂上的选择性吸附作用不依赖于钙离子的存在,EGTA或高浓度的盐溶液均不能洗脱,但可被50％乙醇洗脱,此结果表明钙调蛋白与吸附树脂的结合为疏水结合,与钙离子诱导的疏水区变化无关。此法兼备纯化、浓缩效果,收率较高,简便易行。     

蒲黄多糖的研究

蒲黄经热水提取,脱除蛋白质、乙醇沉淀,Sephadex G50柱层析分离,DEAE-Sephadex A25和DEAE-Cellulose离子交换柱层析分离得3种白色粉末状多糖TAA、TAB、TAC。经凝胶柱层析、醋酸纤维素薄膜电泳证明,三者为均一体。3种多糖经酸全水解、纸层析和气相色谱分析,确定了糖基的组成及摩尔组成比。用核磁共振、甲基化分析、NaIO_4氧化等方法对多糖结构进行了初步探讨。     

转Bt基因植物表达产物Cry1Ab蛋白的制备纯化方法研究

以转Bt基因水稻为试材,研究其表达产物Cry1Ab蛋白的提取、分离及纯化的方法。实验结果表明,DEAE-纤维素填料对Bt蛋白有较好捕获效果。根据生物信息学方法预测了目标蛋白和主要共存蛋白的等电点和疏水性差异。合理地选择了阴离子交换色谱与疏水作用色谱组合方法。提取液经DEAE-Sephadex A-50柱层析及Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析分离后,目标蛋白得到了显著的纯化。考察了疏水层析中用不同洗脱液洗脱Cry1Ab蛋白对活性回收率和纯度的影响,结果表明：以0．25mol／L KSCN作洗脱液对活性影响最小,HIC一步纯化倍数可达8倍,总纯化倍数达100倍。     

光度显色剂8-羟基喹啉-5-磺酸的纯化方法

报道了8-羟基喹啉-5-磺酸硅胶干柱层析纯化方法，探讨了固定相、淋洗剂、洗脱剂对产品纯化的影响，确定了以层析硅胶为固定相，以V(正(异)丙醇)：V(氨水)＝2：1为淋洗剂，以蒸馏水为洗脱剂的纯化条件。经过红外光谱和高效液相色谱分析证明，使用本方法可获得纯度大于99％的产品，结果满意。     

中国南海软珊瑚Sinularia microclavate 化学成份的研究

本文报导, 中国南海小棒短指软珊瑚的乙醇提取物经分配, 柱层析高压液相层析和气相层析等手段分离纯化得到11个化合物, 为弄清它的生理活性的起源, 本文对它的化学成份进行了研究。     

稻壳纤维的柱层析性能研究

试验了稻壳纤维作为柱层析介质的性能,并制成亲和层析介质经脂肪酶。结果表明稻壳纤维层析过程为化学物理混合吸附过程,亲和层析性能良好,层析可将脂肪酶纯化２倍,回收率达８１．６％。适合较大规模层析分离。     

多性能高速液相色谱仪试制成功

高速液相色谱是七十年代初发展起来的快速分离分析方法,它是在原有的液相柱层析基础上,采用了新颖层析填充料,高压输液泵和高灵敏检测器等实验技术,从而使液相色谱进入到一个新的阶段,成为既可以进行微量分离分析又可进行大量分离制备的高速高灵敏度的自动分析法。这种方法近年来已受到国内外的普遍重视和得到广泛应用。但商品高速液相色谱仪,目前还只有少数几个资本主义国家有生产。我所工人和科技人员遵照毛主席“中国人民有志气,有能力,一定要在不远的将来,赶上和     

层析用硅胶G再生的可行性及方法研究

以分离苦豆子中含有的生物碱为研究手段,讨论废弃的层析用硅胶经再生后重复利用的方法,以氯仿、甲醇为洗脱剂,通过改变两种溶剂的混合比例进行洗脱,硅胶经再生使用后分离得到了苦参碱、氧化苦参碱和其它生物碱的单体,鉴于其它生物碱无标准品,故本论文未加以讨论.苦参碱、氧化苦参碱的得率分别为23.6%,46.2%,其单体通过HPLC检测后,含量都达到了95%以上,因此废弃的层析用硅胶是可以经过再生而重复利用的.     

卵黄卵磷脂提取纯化及纯度鉴定实验设计

采用正交设计分离提取卵黄中的卵磷脂,进一步使用硅胶柱层析纯化手段,获得卵磷脂纯品,并对其进行薄板层析和紫外分光光度法的纯度鉴定,以此作为生物工程、生物技术专业综合性生物化学设计实验的教学内容。     

离子交换树脂层析分离多元醇的研究

本文研兖了木糖醇、阿糖醇、山梨糖醇在离子交换树脂层析柱上的分离。探讨了树脂类型、洗脱剂流量和酸度及层析温度等对分离的影响。研究结果为工业规模分离多元醇提供了理论依据。     

大孔吸附树脂对熊果酸吸附性能的研究

研究了从山楂叶中纯化熊果酸的柱层析工艺。静态吸附结果表明,X-5、NKA和AB-8树脂的吸附率分别为91.32%,72.28%和41.19%;以90%乙醇为洗脱剂,X-5、NKA和AB-8树脂的洗脱率分别为83%,70%,87%。静态实验表明X-5树脂具有较好的吸附解吸性能。动态实验优化了在X-5树脂中的流速、上样液的熊果酸浓度和上样体积。结果表明,流速为3BV/h(BV为倍量体积),上样液的熊果酸浓度为0.304mg/mL,上样体积为3BV为最优上样条件。动态洗脱中采用梯度洗脱方式,结果表明在90%的乙醇洗脱下,熊果酸纯度达93.21%。对层析工艺制备的熊果酸进行结晶处理,所获得的熊果酸纯度为98.61%,与熊果酸标准品的红外光谱一致。     

高效液相色谱法测定煤沥青中16种多环芳烃

建立了煤沥青中苯并[a]蒽、苯并[a]芘等16种多环芳烃(PAHs)的高效液相色谱分离检测方法。以甲苯为溶剂对煤沥青进行萃取,萃取液处理后经柱层析分离,层析洗脱液分组回收,然后进行液相色谱分析。采用ZORBAX Eclipse PAH柱分离,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,紫外检测器进行测定。结果表明,16种PAHs的线性范围为0.5~20 mg/L,相关系数(r)均大于0.999,检出限为0.0031~0.035μg/L,方法的回收率为97.2%~108.3%,相对标准偏差(RSD)为0.18%~3.5%。方法用于两种不同煤沥青中16种PAHs含量的测定,两种煤沥青中16种PAHs的含量分别为107.86 g/kg和103.71 g/kg,其中苯并[a]芘的含量分别为11.86 g/kg和13.82 g/kg。     

三七皂甙的离心薄层层析分离—单体皂甙Rg1、Rb1、Re的分离提纯

离心薄层层析法较经典柱层析法分离周期短,效果好,不仅可节省溶剂、固定相,尤其可节省大量时间。这种方法对小量纯品需求者是有效的分离提纯手段。 已知三七皂甙主要成分与人参皂甙相同。人参叶总皂甙的离心薄层层析分离已有报导,作者用含Na_2C_2O_4固定相的分配层析板分离三七皂甙,对梯度洗脱作了较深入研究,取得较好效果。     

核酸化学研究 Ⅳ.常见核糖核苷及其3′-核糖核苷酸柱层析

本文介绍以涂渍12％甲基三正烷基(C_8～C_(10))氯化铵的聚三氟氯乙烯细粉(160～200目)为交换剂的反相离子交换柱层析。用碳酸铵水溶液分级洗脱,可在三小时左右一次柱层析即能把常见核糖核苷和相应的3'-核糖核苷酸共八种组分的混合物分开,并可根据各组分的峰面积定量。各组分洗脱的次序为胞嘧啶核糖核苷(CR),腺嘌呤核糖核苷(AR),尿嘧啶核糖核苷(UR),鸟嘌呤核糖核苷(GR),3'-胞嘧啶核糖核苷酸(3'-CMP),3'-腺嘌呤核糖核苷酸(3'-AMP),3'-尿嘧啶核糖核苷酸(3'-UMP),3'-鸟嘌呤核糖核苷酸(3'-GMP)。表示各峰分离情况的分离度(R)除CR和AR之间为0.77分离略差外,其它各峰之间均大于1。各个组分含量达10～20微克(0.3～0.5A_(260))~*即可定量。定量分析标准误差σ=0.06。此法已成功地用于以化学方法合成的低聚核糖核苷酸的碱基组成的测定。     

食用色素的快速柱层析分离与测定

快速柱层析(亦称闪式柱层析)是国外七十年代末兴起的新技术,不仅操作简便、迅速、分离效果好,而且不需昂贵设备,因此深受有机分析界的重视。目前食用色素的测定方法