一种与HBx蛋白相互作用未知蛋白抗体的制备及其应用

本研究构建UK蛋白的原核表达载体pET28-UK，转化BL21宿主菌，经过IPTG诱导、表达、纯化，获取UK蛋白，制备抗原，免疫杭州大耳白兔．经过3次免疫后心脏采血，吸取血清作为抗体．经过ELISA和免疫荧光试验验证，陔抗体町以识别机体UK蛋白．本研究为深入阐明HBx与UK蛋白的相互作用的功能性试验，以及完全阐明UK蛋白在细胞内的功能奠定了基础．     

拉格朗日形式与物理学

物理学中的拉格朗日形式是一种数学形式化语言，它成功地表达了许多重要领域的物理理论，例如，力学，经黄场论，量子场论，规范场论等。它不仅能精确表达理论，而且揭示了物理定律与空间一时间属性之间的关系，很可能也是统一场论和处理束缚体系的表达方式。     

猪瘟病毒石门株E2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了猪瘟病毒石门株的Ｅ２基因．扩增片段大小为１１８４ｂｐ，与预期大小一致．经ＳａｃＩ酶切和巢式ＰＣＲ证实了Ｅ２基因的特异性．将Ｅ２基因扩增片段首先克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，进行全序列测定，将该基因再克隆到表达载体ｐＢＶ２２１．采用温控诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示Ｅ２基因获得表达．ＥＬＩＳＡ表明Ｅ２基因表达产物可与猪瘟阳性血清起特异性反应．     

太阳黑子、QBO对杭州地区梅雨的影响

分析了1953～2001年杭州梅雨量的周期性振荡特征度其与赤道平流层纬向风之间的关系．结果表明,杭州梅雨量的变化存在着22年左右和准两年左右的周期振荡,雨量和赤道平流层纬向风的准二年振荡（QBO）之间具有相关关系,其相关关系受到太阳活动的调控．在厄尔尼诺年的同期或者后期,QBO和梅雨之间的关系往往会出现异常．     

PVDF压电计在低应力下的动态标定

PVDF是一种新型的高分子压电型传感器材料，应用于冲击载荷时，其压电灵敏系数的动态标定是个关键技术．采用改进的SHPB实验技术对低应力下的PVDF压电计的动态K值的标定进行了研究，并分别对3种不同引线方案的PVDF压电计进行了动态标定，发现动态K值的大小与引线面积之间存在一定的关系．     

分子伴侣GroE系统相互作用中结构与功能关系研究

根据大肠杆菌分子伴侣GroE系统的晶体结构数据，分析了GroEL顶端区域在其靶蛋白和GroES结合前后结构与功能的关系，讨论了GroEL的结构转变对其中心通道可及性和疏水特性的影响．提出了一种用以分析蛋白质之间相互作用趋势的方法，并用该方法分析了GroEL和GroES相互作用的3个氨基酸，得到了很好的结果。在此基础上，进一步用SwissPDBViewer对GroEL的核酸结合口袋进行了分析，结果表明活性中心与ADP磷酸键结合的残基Thr30可能与能量的传递有关．     

水稻"斑马叶"叶绿素含量及几种酶活性的变化

以具“斑马叶”性状的水稻1103S、武金4B以及对照武金3B为材料,研究了该性状表达过程中叶片叶绿素、蛋白质含量及几种酶活性的变化．结果表明,性状表达期叶片叶绿素、蛋白质含量减少,过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性降低,过氧化物酶(POD)活性上升;随着叶片复绿,各项指标又回复到低温处理前的水平．该性状的表达是由于阶段性叶绿素代谢异常所致,它不仅与叶绿素含量有关而且与POD、CAT、SOD等几种酶活性之间存在一定关系．     

基于cDNA宏阵列的系统聚类分析猪发育阶段的基因表达谱

取杜洛克猪胚胎第33,45,55，65．75天的背最长肌样本．用cDNA Macroarray分析方法和聚类分析技术分析了327个EST在骨骼肌内不同发育阶段的基因表达谱．结果表明有98条EST在不同发育时期显著差异表达．第33天和第45天两阶段基因表达状态相似．第55天和第65天基因表达状态相似．而第75天的基因表达与第55天和第65天两个阶段的基因表达具有相近的聚类关系．表达状态相近，基因功能相似的基因大都被聚类在一起．     

猪胃蛋白酶原A基因cDNA的克隆及其表达

根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A（pepsinogen）基因序列设计引物，采用RTPCR技术，成功获得了猪胃蛋白酶原A基因，该基因全长1240bp，将该基因克隆到表达载体pPIC3．5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒，通过电转化方法将重组质粒转化毕赤酵母GS115，检测结果表明猪胃蛋白酶原A基因在毕赤酵母中得到了表达．     

SARS-CoV S蛋白的原核表达及其粘膜免疫效应

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的S（Spike）蛋白是病毒表面最主要的膜蛋白，在病毒的感染过程中起重要作用，是冠状病毒的主要抗原．以SARS冠状病毒的cDNA为模板，通过PCR得到S△1（151～1200bp）、S△2（1201～2250bp）和S△3（2251～3150bp）3段基因序列，克隆到表达载体pET-32a，在大肠杆菌BL21中诱导表达得到包涵体蛋白，经Western blot检测正确后，将此作为抗原以滴鼻和腹腔注射两种小同的途径免疫BALB／c雌性小鼠，3次免疫之后采集小鼠的血清和肺洗液，经酶联免疫吸附实验（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）检测其中的抗体IgG和IgA．结果表明S蛋白通过滴鼻途径既能刺激产生一定的血清IgG，更能诱导肺粘膜产生特异IgA抗体．进一步比较分析发现，诱导粘膜免疫的效应区域主要位于S△2（401～750aa）蛋白区段．     

中间体3-甲酰四氢噻喃的合成

3-甲酰四氢噻喃是噻草酮的重要中间体,3-甲酰四氢噻喃的合成采用以丙烯醛和硫化氢为原料首先得到3-甲酰-5,6-二氢噻喃,然后3-甲酰-5,6-二氢噻喃在催化荆作用下氢化得到目标产物的合成路线．合成3-甲酰-5,6～二氢噻喃中,对丙烯醛投料方式、硫化氢投入量和催化剂选择进行了优化试验,提出了新的反应机理,使3-甲酰-5,6-二氢噻喃反应收率和质量分数分别达到93％和95％以上．制备3-甲酰四氢噻喃中,对催化剂进行了选择试验,发现用Raney-Ni作催化剂,目标产物的质量分数和收率达到92％和94％以上．     

重组真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ的构建及其在胃癌细胞MGC80—3中的表达

目的构建新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因的真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ（pEGFP—cec），检测其在肿瘤细胞中的表达情况，探讨抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制和抗菌肽抑瘤作用效果．方法应用基因重组技术，将新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因克隆到真核表达载体pEGFP—C1，通过酶切和测序的方法鉴定重组质粒pEGFP—cec的正确性．将pEGFP—cec经脂质体法转染到胃癌细胞MGc80—3，48h后观察EGFP瞬时表达情况；72h后，应用RT—PCR，检测抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；96h后，消化细胞，经台盼蓝染色，检测重组质粒pEGFP—cec表达产物对肿瘤细胞的影响．结果细胞转染48h后，荧光显微镜下可观察到EGFP的表达，发出绿色荧光；转染72h后，RT—PCR检测到胞内有抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；表达产物能够抑制肿瘤细胞的生长．结论成功构建了真核表达载体pEGFP—cec，并在肿瘤细胞中可见抗菌肽cecropin—XJ和EGFP基因的有效表达以及表达产物具有显著的抗肿瘤活性．为深入开展抗菌肽抑制肿瘤的研究奠定基础．     

小鼠卵透明带3(mZP3)cDNA的克隆、测序及mZP3 DNA疫苗的构建

卵透明带3（ZP3）蛋白是透明带中的一种主要蛋白，在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用，抗ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用，ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原，本文根据小鼠卵透明带（mZP3)cDNA序列（1317bp）设计了上游和下游引物，从小鼠卵巢中提取总RNA，经RT－PCR克隆了鼠卵透明带3基因的cDNA，将其亚克隆至pUCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆，酶切鉴定后测序比较，与Gene Bank小鼠ZP3 cDNA序列完全相同，证明克隆出正确的小鼠ZP3 cDNA。将mZP3克隆至真核表达质粒pCMV4上，构建完成了DNA避孕疫苗的载体pCMV4-mZP3，为应用DNA疫苗免疫小鼠达到控制鼠害的研究奠定了基础。     

利用噬菌体展示技术制备识别酵母RNR_3原核表达片段的单链抗体

选取酵母细胞RNR_3蛋白序列中高保守片段:145-298位氨基酸序列,命名为RNR_3h进行原核表达.并利用噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选到能与该原核表达产物特异性结合的单链抗体.得到的3种单链抗体均识别原核表达片段的空间抗原位点.为寻找酵母RNR1和RNR_3的诱导表达水平与DNA损伤信号的相互关系,将真核生物RNRs发展为检测环境化学致痛物DNA损伤效应的生物标志物进行了尝试.     

过渡金属对Ru/Al_2O_3催化剂改性的影响

应用浸渍法制备了一系列钌基催化剂,以水煤气变换为探针反应,并采用TPR、XRD、TEM和活性比表面测定等手段研究了过渡金属对Ru/Al2O3催化剂的改性机制。结果表明,过渡金属(特别是Mo)的加入提高了Ru/Al2O3催化剂的活性和耐热性能,降低了钌基催化剂的还原温度,增大了Ru/Al2O3催化     

Er3+:CaO-La_2O_3-B_2O_3玻璃的制备及其光谱性能

采用传统的熔融冷却技术制备了Er3+:CaO-La2O3-B2O3(Er:CLB)玻璃。玻璃的转变温度为647℃,析晶起始温度741℃。测试了样品的红外光谱、吸收光谱和发射光谱。Er:CLB玻璃在790 nm和970 nm附近均存在吸收峰,与AlGaAs和InGaAs激光二极管输出波长吻合。Er:CLB玻璃在1 530 nm附近存在     

Tb3+掺杂纳米WO3的制备及其光催化性能

用Na2WO4和盐酸反应新生成的H2WO4与Tb(NO3)3,H2C2O4作起始原料,制备了稀土离子Tb3+掺杂的WO3纳米粉体,并采用透射电子显微镜(TEM)、X-射线粉末衍射(XRD)、漫反射光谱(DRS)和光电子能谱(XPS)等手段对其结构进行了表征.实验证明,稀土离子Tb3+的掺杂能拓展WO3的光响应范围,显著提高WO3对可溶性染料罗丹明B的光催化降解率和抗光腐蚀性.     

掺Nd3+的Sr3 Gd(BO3)3晶体的激光特性

介绍了一种新的硼酸盐激光晶体Nd^3＋：Sr3Gd（BO3）3的激光特性．采用氙灯作为泵浦源，获得激光输出为17．84mJ，总效率ηo=0.092％，曲线的斜效率ηs=0.27％．实验表明Nd^3＋：Sr3Gd（BO3）3晶体是一种新的有潜在应用价值的激光晶体．     

HBV X蛋白与宿主APOBEC3G蛋白之间的相互作用

将原核重组质粒双酶切后释放的χ基因与真核表达载体连接，构建真核重组质粒pcDNA3.1-X，然后与真核重组质粒pcDNA3.1-APOBEC3G共转染HepG2细胞，提取蛋白进行免疫共沉淀并用Western blot分析结果。免疫共沉淀后，HA-APOBEC3G融合蛋白能够在抗HBx的免疫沉淀物中检测出来，在抗HA标签的免疫沉淀物中也能检测到HBx。揭示了这两种蛋白能在受体细胞内形成复合物。结果表明乙肝病毒X蛋白与APOBEC3G蛋白在细胞内能发生相互作用，提示APOBEC3G抗HBV作用可能与乙肝病毒X蛋白有关。