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HPLC法对医学生血清维生素A含量的测定 总被引:1,自引:1,他引:0
建立快速提取血清中维生素A和运用HPLC测定其含量的方法。取待测血清200μL,加入无水乙醇液200μL,旋涡混合1min,再加入正己烷溶液400μL,旋涡混合3min,离心后取上清液,用高效液相色谱仪测定。色谱条件:分析柱为Kromasil100-5C18(150×4.6mm,5μm);流动相为甲醇∶水(98∶2,V/V);流速为1.2mL/min;检测波长为325nm。血清中维生素A分离良好,浓度在2—80μg/dL范围内呈线性关系,r2=0.9992。平均回收率为98.48%,日内、日间RSD均〈10%。所测医学生血清中维生素A的含量男性为(38.65±12.99)μg/dL,女性为(34.17±10.10)μg/dL。该法操作快速、样品处理简便易行,适用于血清中维生素A的快速提取和含量的测定。 相似文献
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采用反相 Apollo C1 8柱 ,甲醇 /水 (98/ 2 ,V/ V)为流动相 ,流速为 0 .8m L / min,检测波长为 2 92 nm,建立了一种测定泡腾保健品 (大豆异黄酮 VE VC)中 VE的高效液相色谱测定方法。VE在浓度为 0 .0 5 38—0 .4 30 4 mg/ m L内有良好的线性关系 ,回归方程为 y=4 .87× 1 0 6x 7.1 2× 1 0 4(r=0 .9999) ,平均回收率98.0 9%。该法简便、快速、准确。 相似文献
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反相高效液相色谱法测定花生红衣中白藜芦醇的含量 总被引:1,自引:0,他引:1
建立了反相高效液相色谱测定白藜芦醇的方法,采用Ultimate-C18色谱柱,以乙腈:水(30:70)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长306nm,采用外标法进行定量.结果为白藜芦醇在1.22×10-5-0.1g·L-1的范围内线性关系良好,检出限为3.6×10-7g·L-1.所建立的方法具有分析速度快、... 相似文献
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采用Nucleosil C18(250mm×4.6mm,4.5μm)色谱柱,以甲醇-磷酸水溶液(pH=3.0)为流动相,其比例为25∶75,检测波长为327 nm,流速1.0 mL/min,柱温29 ℃,建立金菊泡腾片和双黄连口服液中绿原酸含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法.绿原酸浓度在0.02-0.1 mg/mL与峰面积积分值呈良好的线性关系,A=0.9394C 0.3674(r=0.9991).该方法灵敏、简便、重现性好、结果准确,可用于金菊泡腾片中绿原酸含量的测定和产品质量控制. 相似文献
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采用液相色谱-质谱联用技术对Eupenicillium sp.UN88胞内活性物质进行定性鉴别,以高效液相色谱法测定其含量.色谱条件:色谱柱为Kromail C18 (4.6mm×250mm,5μm),以甲醇∶水(60∶40,V/V)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长230nm,柱温30℃.采用ESI-MS总离子流跟踪分析HPLC的洗脱液,并用低能量CID-MS-MS及CID-MS-MS-MS进一步确定目标离子峰.结果表明Eupenicillium sp.UN88胞内主要产布雷菲德菌素A(BFA).BFA在0.1-5.0mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999,n=6),平均回收率为100.6%,RSD为1.3%(,n=9),检出限为0.3μg/mL.因此,Eu penicillium sp.UN88发酵产生具有活性的胞内次级代谢产物与BFA同质;建立检测BFA的RP-HPLC快速、简便、准确可靠,为筛选BFA的高产菌和质量监测提供可靠依据. 相似文献
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在聚乙二醇-2000(PEG)-硫酸铵-食用色素双水相体系中,研究了PEG相中食用色素与蛋白质复合物光谱行为。实验了溶液酸度,盐浓度,PEG用量,反应时间,反应温度,共存物质等对体系测定的影响。结果表明,在pH 8的缓冲溶液条件下,樱桃红(BS)与人血清白蛋白(HSA)复合物的最大吸收在541 nm处,比单纯樱桃红红移13 nm,复合物表观摩尔吸光系数为9.4×104 L·mol-1·cm-1,用摩尔比法求得最大结合数为40,蛋白质浓度在0~21.07 mg·L-1范围内具有线性关系。用加入不同类型表面活性剂方法,探讨了食用色素樱桃红与蛋白质之间的作用机理。 相似文献
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溴酚蓝测定血清白蛋白质的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
用酸性染料为探针对蛋白质的定量已应用于临床医学及生命科学的研究中,本文利用分光光度法研究溴酚蓝(BPB)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)的反应。在pH=2.79的Britton-Robinson缓冲溶液中,血清白蛋白与溴酚蓝通过分子间力形成蓝色复合物使吸光度增加。λ=605 nm时,εBSA=5.20×10~5L·(mol·cm)-1,εHSA=5.12×10~5L·(mol·cm)-1;BSA在0-78.0 mg·L-1,HSA在0-81.6 mg·L-1范围内服从比尔定律。检出限分别为BSA:2.93 mg·L-1,HSA:3.12 mg·L-1。对7个人血清蛋白总量平行6次测定,相对标准偏差1.2%-3.1%,回收率91.9%-105.6%。 相似文献
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水杨酸与人血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究 总被引:24,自引:3,他引:24
在pH9.50含0.01mol/LKCl的硼砂缓冲溶液中,人血清白蛋白(HSA)与水杨酸发生相互作用,而导致两者的荧光谱发生变化。采用不同的方法测得这一反应的解离常数。 相似文献
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超声波有望强化双水相萃取分离过程。本文研究了超声波对聚乙二醇(PEG)/磷酸盐双水相系统(ATPS)组成及牛血清白蛋白(BSA)在其中分配的变化规律。在超声波作用下,由于PEG6000的分子量增大,引起PEG600010%(w/w)/PO43-6%(w/w)ATPS在混合过程的Gibbs自由能变化增大,所形成的两相间差别变大,相图节线变长;而且,PEG分子量增大改变了BSA在双水相系统的静电作用和盐析作用,超声波作用提高了BSA在ATPS上相中的含量,增大了分配系数,减少了下相分配率。 相似文献
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将经典光谱法与内滤光校正、取代实验和分子对接等技术相结合,较全面地研究了多西环素(DC)与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。通过荧光猝灭实验测得在298和310 K时,DC与HSA的结合常数分别为2.73×105和0.74×105 L·mol-1,二者有一个结合位点,表明DC与HSA间具有较强的结合作用,属于静态猝灭。根据Vant’Hoff公式计算的热力学参数(ΔH=-83.55 kJ·mol-1,ΔS=-176.31 J·mol-1·K-1)表明,两者间主要作用力为氢键和范德华力。根据Fster能量转移定律求得DC与HSA的Trp-214之间的结合距离为4.98 nm。取代反应结果表明,DC键合在HSA的亚域IIA内。三维荧光光谱结果显示,DC使HSA疏水性增加,改变了HSA的构象。DC与HSA作用前后红外光谱二级结构的定量分析结果表明,DC能使HSA结构松散。分子对接技术进一步表明DC通过氢键和范德华力等键合在HSA的亚域IIA疏水腔中,结合距离与光谱法计算结果相近。实验结果为研究药物小分子与人血清白蛋白的相互作用提供了理论依据和可靠数据。 相似文献
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秋水仙碱与人血清白蛋白相互作用的谱学研究 总被引:2,自引:1,他引:1
采用紫外、荧光和圆二色光谱研究了秋水仙碱与人血清白蛋白之间的相互作用。结果发现秋水仙碱使人血清白蛋白的紫外吸收增强,特征荧光峰猝灭,并且随温度升高猝灭常数KSV降低。求算了不同温度下秋水仙碱与人血清白蛋白相互作用的平衡常数与结合位点数。根据Van’t Hoff方程计算出ΔH=-11.66 kJ·mol-1,ΔS=51.507 J·(mol·K)-1,得出二者之间的作用力主要是静电作用力。圆二色光谱测得加入秋水仙碱后人血清白蛋白的α-螺旋降低,二级结构改变,表明秋水仙碱对人血清白蛋白的荧光猝灭机制属于形成配合物所引起的静态猝灭。 相似文献
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氟罗沙星(FLRX) 是一种含氟喹诺酮类抗菌素,有关它对人血清白蛋白(HSA)的影响及作用机理,特别是对HSA二级结构的影响及内滤光(影响荧光数据的准确性)校正的研究报道较少。采用多光谱法和分子模拟技术探究了FLRX 与HSA的相互作用。荧光光谱结果表明,FLRX对HSA的猝灭是由于形成结合常数在105 L·mol-1水平上的1∶1 FLRX-HSA基态复合物引起的静态猝灭作用。由Van’t Hoff方程确定的FLRX与HSA结合过程中的ΔH=-107.99 kJ·mol-1和ΔS=-240.99 J·mol-1·K-1,表明FLRX与HSA之间的主要作用力是氢键和范德华力。同步荧光光谱、红外光谱和三维荧光光谱结果表明,静态猝灭过程所产生的中间复合物使HSA的构象发生改变。通过对HSA与FLRX作用前后红外光谱酰胺Ⅰ带进行傅里叶去卷积和分峰拟合,获得代表HSA二级结构的不同子峰,对各子峰进行二级结构归属,根据各子峰的积分面积计算出各二级结构的相对百分含量。结果表明:FLRX与HSA结合后,α-螺旋从51.5%减小到33.2%,β-折叠从30.3%减小到20.7%,β-转角从15.6%增加到33.6%。取代实验显示FLRX与HSA的结合位点在HSA的site Ⅰ(亚域ⅡA)。分子对接实验结果表明,FLRX可以通过氢键、疏水作用和范德华力等多种作用力很好的结合在亚域ⅡA的疏水腔中。实验获得的可信数据将有助于阐明FLRX与HSA的作用机制,也有助于理解FLRX在储运过程中对蛋白质功能的影响。 相似文献
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山姜素与人血清白蛋白相互作用的荧光光谱法研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用荧光光谱法和紫外-可见光谱法研究了山姜素与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。证实了山姜素对HSA的荧光猝灭为动态猝灭过程,并测定了不同温度下的猝灭常数; 根据Fōrster非辐射能量转移理论,计算出山姜素在蛋白质中的结合位置与色氨酸残基间的距离为4.05 nm; 由求得的热力学参数,推断了山姜素与HSA之间主要靠疏水作用力结合;用三维荧光光谱及同步荧光光谱技术探讨了山姜素对HSA构象的影响。 相似文献
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纳米材料与蛋白质等生物大分子的相互作用是纳米材料生物效应和安全性研究的重要基础。本实验利用荧光光谱、同步荧光光谱、圆二色谱(CD)等方法研究了四种结构特性不同的水溶性羧基化碳纳米管(long-SWCNTs-COOH,short-SWCNTs-COOH,DWCNTs-COOH,MWCNTs-COOH)与人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)的相互作用。实验结果显示:四种水溶性羧基碳纳米管均能猝灭HSA的内源荧光,但猝灭能力有所不同,相同浓度下不同水溶性羧基化碳纳米管对HSA的荧光猝灭作用遵循如下规律:DWCNTs-COOH<MWCNTs-COOH<long-SWCTs-COOH<short-SWCNTs-COOH;四种碳纳米管对HSA的同步荧光光谱影响表明,MWCNTs-COOH的作用位点更靠近色氨酸(Trp)残基,而DWCNTs-COOH的作用位点更靠近酪氨酸(Tyr)残基,而long-SWCNTs-COOH和short-SWCNTs-COOH对两种氨基酸残基的作用无明显差别;在碳纳米管作用下,HSA 的圆二色谱有微弱的变化,且与α-螺旋、β-折叠含量变化基本一致。结果表明,不同碳纳米管对HSA的荧光猝灭能力与它们的结构特性有关,两者作用过程中HSA构象基本不变,二级结构有微小变化,但无明显的剂量-效应关系。根据实验结果对可能的作用机制进行了讨论。 相似文献
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光谱法研究FCLA与人血清白蛋白的相互作用 总被引:1,自引:1,他引:0
在生物学和医学中活性氧的检测非常重要。海萤荧光素类似物FCLA是检测单态氧(1O2)和超氧阴离子(O-2)的一种高灵敏的化学发光探针。文章用光谱法研究了FCLA与人血清白蛋白(HSA)的结合反应,发现FCLA对HSA的荧光有很强的猝灭作用。从荧光猝灭结果求得了FCLA与HSA的结合位点数。根据Frster非辐射能量转移机理探讨了二者相互结合时其给体-受体间的距离和能量转移效率, 从而证实了它们的结合作用为静态猝灭过程。阐明了由于能量转移所导致的HSA荧光的猝灭及FCLA荧光的产生机理。通过光谱法对FCLA与HSA的相互作用的研究,阐明FCLA的运输过程及其在体内的作用机制,对实现利用探针在体检测活性氧具有一定的意义,同时也为药物动力分析、体内药物转运的研究提供了基础。 相似文献