吖啶黄共振光散射法检测脱氧核糖核酸

1　引　　言对于核酸的定量测定 ,是人们关注和研究的重要课题 ,它的测定对于研究核酸的生物化学反应 ,发展核酸医药制品以及对疾病的诊断和防治均有重要的意义 ,同时可为生物化学和临床分析中微量生物大分子的测定开辟新的途径。核酸含量的测定方法很多 ,其中 ,以分光光度法和荧光光度法使用较多。近年来 ,共振光散射 (RLS)法作为一种新兴的分析方法 ,因其灵敏度高 ,选择性好 ,且方法简便 ,用于测定核酸已引起了广泛关注。就目前的研究来看 ,大多是利用DNA与探针分子相互作用后产生强烈的RLS强度增强 ,根据增强信号值与DNA浓度的关系…     

流动注射-共振瑞利散射法测定盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪

在HCl介质中,12-钨磷酸(TP)分别与盐酸氯丙嗪(CPZ)和盐酸异丙嗪(PMZ)反应形成离子缔合物,导致溶液的共振瑞利散射(RRS)显著增强,并产生新的RRS光谱.它们的最大RRS峰位于359 nm (TP-CPZ)和346 nm (TP-PMZ),并且在一定范围内,CPZ和PMZ的浓度与散射强度呈线性关系,据此提出流动注射-共振瑞利散射 (FIA-RRS) 联用技术测定CPZ和PMZ的新方法,CPZ和PMZ的检出限分别为1.7和3.0 μg/L.实验优化了流动注射(FIA)参数和反应条件,并以灵敏度较高的CPZ为例,考察了共存物质的影响.本方法具有良好的选择性和重复性;用于药片和猪肝中CPZ的测定,结果满意.     

吖啶黄与脱氧核糖核酸加成反应机理及其在微量DNA测定中的应用

研究了微量脱氧核糖核酸与吖啶黄的加成反应,并对反应条件作了优化,基于在pH6.5的B-R缓冲溶液中,脱氧核糖核酸(DNA)浓度与吖啶黄最大吸收波长444 nm处的吸光度线性降低的关系,建立了测定微量DNA的方法。在小于8.0 mg.L-1浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 8,对3个模拟试样中DNA含量作了测定,结果的RSD值及回收率的测定结果分别在1.4%~3.0%及98.3%~104.0%之间。对此加成反应的机理也作了初步探讨。     

共振瑞利散射淬灭法的分析应用

对共振瑞利散射(resonance Rayleigh scattering, RRS)淬灭法在蛋白质、核酸、药物及金属离子测定中的分析应用进行综述. 结合共振瑞利散射增强原理,对实验中出现的散射淬灭现象及淬灭原因进行归纳总结,为RRS淬灭分析方法的建立提供新的思路.     

氯化铁-铁氰化钾体系共振瑞利散射法测定白藜芦醇

在pH 1.8的B-R缓冲溶液中,白藜芦醇(RES)使[Fe(CN)6]3-还原为[Fe(CN)6]4-,后者与铁(Ⅲ)反应生成普鲁士蓝,其共振瑞利散射(RRS)急剧增强。于最大RRS峰314nm处测定其散射强度IRRS,扣除空白溶液的散射强度,RES的质量浓度在0.05~5.0mg·L-1范围内与散射强度差ΔI呈线性关系。RES的检出限(3s/k)为15μg·L-1。应用此方法测定了葡萄叶和虎杖中RES的含量。所得结果与高效液相色谱法测得的结果相符。用标准加入法进行回收试验,测得回收率在96.0%~104%之间。测定值的相对标准偏差(n=5)在1.7%~4.3%之间。对反应体系的RRS增强的机理也进行了探讨。     

乙基紫-脱氧核糖核酸共振发光体系的研究及其分析应用

研究了碱性染料乙基紫与小牛胸腺脱氧核糖核酸(ctDNA)体系的结合反应及其共振发光光谱.在pH5.0～10.0范围内,乙基紫在595nm处有一特征吸收峰,加入DNA后,吸收峰消失,而在507nm处出现新的吸收峰,表明有新的结合物形成.在510nm处出现共振发光峰,其发光强度与DNA浓度呈线性关系,线性范围为0～500ng/mL;检出限(3σ)为1.54ng/mL.方法具有较高的灵敏度和准确度.将该体系用于核酸试样的测定,结果令人满意.     

盐酸氯丙嗪作探针共振瑞利散射法测定环境水样中某些阴离子表面活性剂

在pH 3.0～5.0的HAc-NaAc缓冲溶液中, 盐酸氯丙嗪与十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、十二烷基硫酸钠(SDS)和十二烷基磺酸钠(SLS)等阴离子表面活性剂反应形成离子缔合物时, 能导致共振瑞利散射(RRS)的显著增强并产生新的RRS光谱, 最大RRS峰分别位于277, 369和277 nm处, 方法对SDBS, SDS和SLS的检出限分别为0.018, 0.046和0.200 μg/mL, 其线性范围分别为0.09~10.0, 0.15~15.0 和0.67~12.5 μg/mL. 研究了适宜的反应条件及分析化学性质, 提出了一种用RRS技术灵敏、简便并快速测定阴离子表面活性剂的新方法.     

共振瑞利散射法测定盐酸丙咪嗪

在pH 6.5的弱酸性条件下,盐酸丙咪嗪(IPH)能将Fe3+还原为Fe2+,根据Fe2+与K3[Fe(CN)6]反应生成可溶性的普鲁士蓝(Fe3[Fe(CN)6]2),使体系的共振瑞利散射强度显著增强,可以间接测定盐酸丙咪嗪的含量。据此建立了共振瑞利散射法测定盐酸丙咪嗪含量的新方法。盐酸丙咪嗪在0.04~3.50 mg/L范围内与共振瑞利散射强度增加值呈良好的线性关系,检出限为0.034 mg/L。考察了体系的共振瑞利散射光谱、紫外-可见吸收光谱特征,研究了适宜的反应条件以及共存物质的影响。该方法用于盐酸丙咪嗪片剂和尿样中盐酸丙咪嗪含量的测定,回收率在97.8%~103.3%之间。     

花菁-脱氧核糖核酸的共振光散射光谱及其分析应用

研究了一种苯并噻唑阳离子花菁与脱氧核糖核酸(DNA)作用的共振光散射光谱,在pH 6.0的六次甲基四胺-HCl缓冲介质中,痕量DNA的加入使花菁在590nm的共振光散射强度显著增强。在最佳实验条件下,增强的共振光散射强度与DNA浓度具有良好的线性关系,据此建立了一种测定DNA的共振光散射光谱法。方法的线性范围为:小牛胸腺DNA(CT DNA),0～20μg/mL,鱼精子DNA(FS DNA),0～15μg/mL;检出限分别为0.005μg/mL和0.008μg/mL。该方法已用于合成样品中DNA的测定。     

铁(Ⅲ)与脱氧核糖核酸作用的共振瑞利散射光谱研究

研究了Fe3 与脱氧核糖核酸(DNA)的共振瑞利散射(RRS)光谱和适宜的反应条件。实验结果表明,在pH2.20的Britton-Robinson缓冲溶液中,Fe3 与DNA自身的共振瑞利散射峰均较弱,但当二者发生静电作用形成缔合物后,体系的共振光散射峰增强,最大散射峰位于320.0 nm处。当Fe3 浓度为2.75×10-5mol/L时,在0~8.4 mg/L范围内,共振光散射强度与DNA的浓度呈线性关系。检出限为2.60μg/L。据此建立了一种定量测定DNA的简便、快速的新方法。本方法用于合成样品中痕量DNA的测定,回收率为93%~101%。     

金纳米微粒与盐酸氯丙嗪相互作用的共振Rayleigh散射光谱研究及其分析应用

在pH 1.8~3.3的酸性介质中,金纳米微粒本身有一定的共振瑞利散射(RRS)强度,但盐酸氯丙嗪本身的RRS强度十分微弱,当二者共存时,溶液的RRS强度显著增强并出现新的RRS光谱,在280~368 nm之间产生强烈的散射带,其最大散射波长位于368 nm,并在284、440、498 nm处有明显的散射峰。在一定条件下,盐酸氯丙嗪在0~0.08 mg/L范围内与ΔIRRS强度成正比,方法具有较高的灵敏度,对盐酸氯丙嗪的检出限(3σ)达到1.75μg/L。本文考察了反应体系的RRS光谱特征,研究了适宜的反应条件、影响因素及分析化学性质,研究了共存物质的影响,表明方法具有较好的选择性,据此发展了一种用金纳米微粒作RRS探针测定盐酸氯丙嗪的新方法。     

盐酸吡格列酮与曙红Y相互作用的荧光和共振光散射光谱研究

在HCl-NaOAc酸性缓冲介质中,曙红Y(EY)与盐酸吡格列酮(PGH)反应形成1∶1的离子缔合物,不仅引起曙红Y的荧光猝灭(FLU),更能导致共振散射(RRS)的显著增强。荧光猝灭的激发和发射波长分别为λex=524nm和λem=544nm;最大共振散射波长为308nm,并在540nm处产生一共振峰。方法的线性范围分别为9.04×10-7～2.05×10-5mol/L(FLU)和1.6×10-7～5.1×10-6mol/L(RRS),检出限分别为1.88×10-7mol/L(FLU)和4.82×10-8mol/L(RRS)。研究了荧光和共振散射的光谱特征、适宜的反应条件及影响因素,据此建立了灵敏、简便、快速测定抗糖尿病药物盐酸吡格列酮的新方法。     

盐酸表柔比星与核酸相互作用的共振瑞利散射光谱研究及其分析应用

用共振瑞利散射光谱研究了盐酸表柔比星(EPI)与小牛胸腺DNA(ctDNA)、鲑鱼DNA(sDNA)、鲱鱼精DNA(hsDNA)和酵母RNA(yRNA)等核酸之间的相互作用. 实验表明在pH 2.0左右的酸性介质中, 表柔比星及核酸本身的共振瑞利散射(RRS)均十分微弱, 但是当它们相互作用形成结合产物时, 将导致RRS增强并出现新RRS光谱. 不同核酸与表柔比星结合产物的RRS 光谱特征略有差异, 散射增强程度则各不相同, 其相对散射强度的顺序是ctDNA≈sDNA＞hsDNA＞yRNA . 在一定范围内核酸浓度与散射强度成正比, 据此可以建立一种新的用表柔比星测定DNA的 RRS 法, 方法具有高灵敏度, 对于不同DNA 其检出限(3s)在24.0 ng/mL 至28.0 ng/mL 之间, 用于合成样品分析, 结果满意. 文中还研究了适宜的反应条件, 影响因素和结合产物的分析化学性质. 结合吸收光谱和荧光光谱特征对表柔比星与DNA 的反应机理进行了讨论.     

罗丹明6G-阴离子表面活性剂体系的共振瑞利散射光谱及分析应用

在pH2．00～3．42的B—R缓冲溶液中,罗丹明6G与十二烷基苯磺酸钠（SD—BS）、十二烷基硫酸钠（SDS）阴离子表面活性剂反应形成离子缔合物,导致共振瑞利散射（RRS）增强,并产生新的RRS光谱,最大RRS峰位于375nm,方法对SDBS、SDS的检出限分别为6ng／mL、5ng／mL,其线性范围分别为0．02～5．6μg／mL、0．02～14．0μg／mL。研究了适宜的反应条件,方法具有较高的灵敏度,用于合成水样和环境水样中阴离子表面活性剂含量的测定,结果满意。     

蛋白质与玫瑰桃红R共振瑞利散射的研究及应用

研究了蛋白质与玫瑰桃红R的反应及共振瑞利散射的光谱特征。实验发现,在酸性（pH3．7）的邻苯二甲酸氢钾一盐酸缓冲溶液中,玫瑰桃红R染料与蛋白质结合形成复合物时能使共振瑞利散射急剧增强,在300～450nm的范围内呈现高的散射强度,其最大散射波长均位于320nm处,体系在室温下反应30min后稳定,并且散射强度与牛血清白蛋白（BAS）、人血清白蛋白（HSA）、卵蛋白（AE）的质量浓度在一定范围内均成正比,实验测得其线性范围分别为0～6．5、0～14．0、0～22．0mg／L。对BSA、HSA、AE的检出限分别为2．72、35．58、6．55μg／L。该法操作简便、灵敏度较高,用于测定正常人尿液、奶粉和牛血清中的微量蛋白获得满意的结果。     

靛蓝胭脂红共振瑞利散射法测定蛋白质

在pH 2.34的B-R缓冲溶液中,靛蓝胭脂红及蛋白质的共振瑞利散射(RRS)均十分微弱。但两者结合时,形成的复合物能使RRS信号急剧增强,最大散射波长为393 nm。测定人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白的线性范围分别为0.1~3.7、0.08~3.0、0.05~2.0、0.1~2.4 mg/L;相应的检出限分别为24.6、20.7、20.4、25.7μg/L。本法用于人血清、牛奶、豆浆、尿液中总蛋白质的测定,结果与经典的考马斯亮蓝法一致。     

苋菜红—蛋白质体系的共振光散射光谱研究及其分析应用

研究了染色剂苋菜红与蛋白质的结合反应,在ＰＨ３．８７的Ｃｌａｒｋ－Ｌｕｂｓ缓冲介质中,苋菜红与蛋白质通过分子间作用力形成复合物。使最大波长约为３６４ｎｍ的共振光散射光谱得到加强。以苋菜红为标记物根据其共振光散射的增强程度。可用于蛋白质的定量测定,其线性响应范围为０－５．０ｍｇ／Ｌ。方法的稳定性及选择性良好,用于人血清试样中总蛋白的测定,结果与经典的考马斯亮兰法一致。     

Interaction Between Mitoxantrone Metal Complex and Titan Yellow by Resonance Rayleigh Scattering Spectra and Its Analytical Application

In a pH 2.4 Britton-Robinson buffer medium,the anthracycline antibiotics mitoxantrone(MXT) could react with metal ions such as Pd(Ⅱ),Co(Ⅱ) and Cu(Ⅱ) to form 1:2(molar ratio) cationic chelates,which further reacted with the anionic dye titan yellow to form 1:2 ternary ion-association complexes by electrostatic interaction. As a result,the intensity of resonance Rayleigh scattering(RRS) was enhanced greatly. These RRS spectral characte-ristics of various metal ion systems were similar,and the maximum RRS wave...     

共振瑞利散射法测定百草枯的研究

在pH=7.0的NaAc-HAc缓冲溶液中,单独的碘化钾汞试剂或者百草枯溶液的共振瑞利散射(RRS)十分微弱。碘化钾汞试剂和百草枯反应形成疏水性较强纳米微粒,导致RRS急剧增强,从而建立了一个灵敏的测定百草枯的RRS新方法,且对RRS增强的机理进行了初步探讨。实验表明:在λ=497nm处,RRS强度与百草枯浓度有良好的线性关系,线性范围在0.01～13.0mg/L,检出限为8.0μg/L。本法用于大米中百草枯含量的测定,结果满意。     

Analytical Application of Resonance Rayleigh Scattering,Frequency Doubling Scattering,and Second-Order Scattering Spectra for the Sodium Alginate-CTAB System

Three new methods for the determination of trace amounts of sodium alginate (SA) based on the reaction of SA with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) by resonance Rayleigh scattering (RRS), frequency doubling scattering (FDS), and second-order scattering (SOS) have been investigated. The SA can react with CTAB in a pH 10.0 Britton–Robinson buffer to form a new product, which can lead to a significant enhancement of RRS, FDS, and SOS intensities and appearance of new spectra. The maximum scattering wavelengths, λex/λem, appear at 351 nm/351 nm for RRS, 240 nm/480 nm for SOS, and 870 nm/435 nm for FDS, respectively. The increments of the scattering intensities (ΔI) are proportional to the concentration of SA in a certain range. The detection limits (3σ) for SA are 3.69 ng mL^?1 for the RRS method, 6.91 ng mL^?1 for the FDS method, and 7.45 ng mL^?1 for the SOS method under optimum conditions. The proposed methods were applied to the determination of SA in real samples with satisfactory results.