固定化酶流动注射化学发光法测定尿酸

本文制备了高活性和长寿命固定化尿酸酶,并用流动注射化学发光分析在线测定了人血清和尿中尿酸含量。线性范围为40～1000ng/mL,检测下限为16ng/mL,对200ng/mL尿酸测定,相对标准偏差为2.6％。尿和血清中其它物质均无干扰,血清取样量只需50μL,每次测定时间少于1min。     

固定化D-氨基酸氧化酶催化DL-氨基酸去消旋化制备非天然L-氨基酸

在过氧化氢酶和氧气存在下,固定化D-氨基酸氧化酶(D-AAO)对映选择性催化DL-氨基酸中的D-对映体氧化脱氨为相应酮酸,L-对映体保留.研究了D-AAO的底物特异性并对反应条件进行了优化.结果表明:D-AAO具有较宽的底物谱,能够催化疏水性α-氨基酸的D-对映体氧化脱氨.在最优反应条件下,D-AAO催化DL-2-氨基丁酸、DL-2-氨基戊酸去消旋化,L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率分别为48%和47%,ee分别为99.5%和99.8%.进一步地利用Pd-C/HCOONH4催化氧化脱氨过程中产生的亚氨基酸原位还原,有效提高了L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率并保持高的光学纯度.     

溶胶凝胶固定化酶流动注射化学发光法测定人体血清中的胆固醇

采用溶胶凝胶技术分别固定了胆固醇脂酶和胆固醇氧化酶,制成固定化酶柱;人体血清中胆固醇脂在胆固醇脂酶的催化作用下生成胆固醇,胆固醇在胆固醇氧化酶的催化作用下被氧化产生H2O2,将其与鲁米诺发生耦合的化学发光反应,在模拟酶血红蛋白的催化作用下产生较强的化学发光。结合流动注射技术,建立了溶胶凝胶固定化酶流动注射化学发光法测定胆固醇的新方法。实验发现,发光强度与胆固醇的浓度在一定范围内呈良好的线性关系,总胆固醇的线性范围为1.01×10-6～2.02×10-4mol/L(r=0.9975);检出限为7.5×10-7mol/L;游离胆固醇的线性范围为5.0×10-8～2.18×10-5mol/L(r=0.9991);检出限为5.0×10-9mol/L。用生化分析仪(东芝TBA-120FR)与本方法进行对照,两种方法无显著性差异。本方法已应用于临床血清样品中胆固醇的检测。     

反相流动注射-化学发光法测定氨基酸

1　引　　言氨基酸是组成蛋白质的基本单元 ,是合成人体中各种酶、激素和抗体的重要物质 ,氨基酸在人体中含量的多少直接影响到人体的健康。目前测定氨基酸的方法主要有采用经液相色谱分离后再用分光光度法、荧光法检测其衍生物的方法 ,但衍生反应操作复杂且测定灵敏度较低 ;用氨基酸分析仪测定氨基酸可获得较高的灵敏度 ,但由于仪器设备价格昂贵 ,需专业人员操作且操作复杂 ,难以在中小型企业普及 ,限制了它们的广泛应用。此外 ,还有电化学、化学发光等方法 ,采用铁氰化钾 鲁米诺体系测定多种氨基酸的方法尚未见报道。2　实验部分2 .1　仪…     

反相流动注射-化学发光法测定氨基酸

基于碱性条件，氨基酸对次氯酸钠-一鲁米诺化学发光体系的显著增敏作用，建立了反相流动注射-化学发光法测定氨基酸的新方法。该法不需对氨基酸进行衍生或转化，检出限为0．016μg/mL，采样频率为150次／h，对1μg／L的组氨酸进行连续12次平行测定，其RSD为0．9％。对氨基酸注射液样品中的氨基酸测定的回收率在98．6％～102．1％之间，并和经典的茚三酮比色法进行了对照。     

尿中磺酸化胆汁酸的流动注射固定化酶化学发光法

肝胆系统有疾患，会导致尿中磺酸化胆汁酸浓度的增加。根据尿中磺酸化胆汁酸的浓度可以判断肝脏机能是否正常。基于流动注射分析原理，利用化学发光法和固定化酶反应，建立了一个新的尿中磺酸化胆汁酸的临床快速分析法。进样量为20μL；分析速度30样/h；检出限为0.1μmol/L；RSD小于2.2%；线性范围在0.1-12μmol/L之内。     

酶的固定化及其应用

酶的固定化研究始于1960年代中期,从1970年代初开始酶的固定化技术研究发展很快,至1980年代初,每年约发表1000篇以上的文献和近200篇专利,所报道的固定化方法达100种以上[1].1980年代中以后,酶和细胞固定化研究的发展速度开始减慢,从而有人认为,对酶的固定化技术应予以重新评价     

固定化酶的制备及应用

酶的固定化及其酶促反应是最具发展前景的生物技术前沿领域之一。固定化酶已经广泛应用于生物化学、生物技术与工程、生物医学工程、化学化工等方面,将在人类社会可持续发展中发挥重要作用。本文综述了近期固定化酶制备及应用研究的进展。     

Preparation of Non-natural L Amino Acids via Deracemization of DL-Amino Acids Catalyzed by Immobilized D-amino Acid Oxidase

在过氧化氢酶和氧气存在下,固定化D-氨基酸氧化酶（D-AAO）对映选择性催化DL-氨基酸中的D-对映体氧化脱氨为相应酮酸,L-对映体保留.研究了D-AAO的底物特异性并对反应条件进行了优化.结果表明：D-AAO具有较宽的底物谱,能够催化疏水性α-氨基酸的D-对映体氧化脱氨.在最优反应条件下,D-AAO催化DL-2-氨基丁酸、DL-2-氨基戊酸去消旋化,L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率分别为48%和47%,ee分别为99.5%和99.8%.进一步地利用Pd-C/HCOONH4催化氧化脱氨过程中产生的亚氨基酸原位还原,有效提高了L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率并保持高的光学纯度.     

Amperometric Determination of Lactic Acid. Applications on Milk Samples

Abstract

A hydrogen peroxide electrochemical sensor, coupled with immobilized lactate oxidase and covered with a cellulose acetate dialysis membrane has been applied in flow analysis of lactate in milk samples. The hydrogen peroxide produced by the enzymatic reaction is measured with a platinum electrode polarized at +650 mV versus Ag/AgCl. Milk samples were analyzed and compared with a spectophotometric reference method. The developed procedure is very simple and the short response time allows its use in assaying milk samples on dairy farms.     

固定化酶法测定血清中葡萄糖和胆固醇

本文讨论了一种灵敏、高选择性的方法分别测定葡萄糖和胆固醇,并介绍了成二醛固定化酶(葡萄糖氧化酶或胆固醇氧化酶)后产生的过氧化氢借助于鲁米诺-铁氰化钾发光反应由流动注射法测定。对血清中样品的前处理和反应试剂浓度的影响也分别作了研究。本法有良好的线性工作范围,连续进样100次仍能保持工作的稳定性,相对标准误差为3.8～5.2%。     

氧化锌纳米颗粒增强鲁米诺-EDTA化学发光测定咖啡酸

在ZnO纳米颗粒( ZnO nanoparticles, ZnO NPs)和EDTA存在的条件下,无需外加氧化剂,鲁米诺( Luminol)即能产生很强的化学发光,由此建立了化学发光体系Luminol-EDTA-ZnO NPs。基于咖啡酸能够有效抑制Luminol-EDTA-ZnO NPs化学发光,结合流动注射技术测定了咖啡酸含量。在最佳的实验条件下,咖啡酸浓度在1.0伊10-7~1.0伊10-5 mol/L范围内,相对发光强度与咖啡酸浓度对数分段呈线性关系,检出限为1.8伊10-8 mol/L (3滓),对4.0伊10-7 mol/L咖啡酸平行测定11次,相对标准偏差(RSD)为3.5%。利用本方法测定片剂中咖啡酸的含量,回收率为97%~101%。     

基于固定化酶的流动荧光法测定血清中的葡萄糖

本文将固定化酶柱，光纤以及停流技术结合起来，研究了以廉价而易得的硫胺素为荧光底物的葡萄糖的荧光分析，提出了一种快速、简便、精确地测定葡萄糖的新方法。其线性范围为１．０￣６０．０ｍｇ／Ｌ，线性相关系数为０．９９９，检测限为０．１５ｍｇ／Ｌ。以５．０ｍｇ／Ｌ的葡萄糖作精度试验，ＲＳＤ％＝２．１％（ｎ＝１１）。该方法已成功地用于血清中葡萄糖的测定，结果与光度法相符。     

流动注射化学发光法测定尿酸

在碱性条件下,铁氰化钾氧化鲁米诺,产生化学发光,尿酸对该体系的化学发光有显著的增强作用（亚铁氰化钾存在时）。基于此,建立了一种直接测定尿酸的流动注射化学发光分析法。方法的线性范围为２．０×１０－８～５．０×１０－６　ｇ／ｍＬ;检测限（３σ）为６．７×１０－９　ｇ／ｍＬ;相对标准偏差为１．１％（尿酸１．０×１０－７　ｇ／ｍＬ,ｎ＝１１）。用于血清及尿样中尿酸的分析,结果令人满意。