儿童大肠埃希菌产ESBLs检测及耐药分析

目的分析吉林地区儿童产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药特点,以指导临床用药.方法用双纸片协同试验检测115株大肠埃希菌产ESBLs的情况,并用K-B纸片扩散法对其耐药性进行了检测.结果产ESBLs大肠埃希菌为36株,阳性率为31.3%;产ESBLs大肠埃希菌对多种抗生素的耐药率高于非产ESBLs大肠埃希菌;所有大肠埃希菌均对亚胺培南敏感.结论吉林地区儿童产ESBLs的大肠埃希菌检出率高并呈多重耐药性.临床治疗中应严格掌握抗菌药物应用指征,并动态监测其耐药性变迁,防止ESBLs大肠埃希菌的局部流行.     

产AmpC酶和ESBLs菌检测及其耐药性分析

目的：检出产AmpC酶和ESBLs的菌株，通过药敏试验分析本院细菌耐药的趋势。方法：纸片扩散法检测染色体AmpC酶，三维试验和改良三维试验检测质粒AmpC酶和ESBLs。结果：44株菌染色体AmpC酶、质粒AmpC酶和ESBLs的阳性率分别为18．18(8／44)、34．09％(15／44)，68．18％(30／44)，44株菌对亚胺培南均敏感，对左氧氟沙星较为敏感，对其它抗生素对药性较强。结论：加强产酶菌株检测，为临床提供合理的药敏结果是临床治疗产酶菌株感染不可缺少的手段。     

产毒素大肠杆菌LTB-K99融合基因的构建

利用PCR技术从原始菌种中扩增得到K99和LTB基因,将K99和LTB基因连接起来,构建了LTB-K99融合基因.融合基因克隆到pBS-T载体上,转化大肠杆菌top10,经Bam HI和Xho I双酶切鉴定重组质粒.测序分析结果表明,该融合基因有正确的阅读框,为以后转入表达载体的构建奠定了基础.     

动物源大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素耐药关系研究

为检测动物源性大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素类药物耐药性的关系,选取22株头孢菌素类药物耐药菌作为受试菌株,采用K-B纸片法测定了其对7种头孢菌素的敏感性,采用PCR测序的方法进行受试菌染色体ampC基因调控区和部分编码区碱基突变分析.结果表明:受试菌对7种头孢菌素的耐药率均在50%以上,20株受试菌ampC基因调控区和部分编码区碱基发生了突变,占90.9%;共有10种突变组合,突变频率最高的为+185,+58,+122,+126,-88,-82,-18,-1位.ampC基因调控区和部分编码区碱基突变与β-内酰胺类药物耐药性有关.     

大肠杆菌F107菌毛A亚单位基因的克隆与鉴定

用PCR技术，从水肿病大肠杆菌临床分离株中扩增出F107A亚单位基因（fedA)的510bp的全序列。将该PCR扩增产物在BamHⅠ和EcoR Ⅰ位点克隆进pUC18质粒载体，并转化大肠杆菌TG1，再根据限制性内切酶酶切分析筛选出含有fedA的重组质粒pf107G。将重组质粒进行序列测定，结果表明，此重组质粒中的插入序列与发表的fedA是一致的，证明该重组质粒就是含有fedA基因的重组质粒。     

成都市武侯区动物性食品源大肠杆菌耐药表型的检测与分析

采用K-B纸片扩散法对36株从2011年到2013年期间分离的携带有毒力基因的动物性食品源大肠杆菌进行氨苄西林、四环素、头孢曲松、环丙沙星等12种抗菌药物的药敏试验.结果表明受试菌株对头孢噻肟、四环素、氨苄西林、诺氟沙星、阿米卡星、氯霉素和环丙沙星有较高耐药率,分别为88.89%、77.78%、69.44%、61.11%、58.33%、47.22%和47.22%.大部分受试菌株普遍存在多重耐药性,耐药谱集中在3耐、5耐、6耐和7耐,特别是5耐以上的耐药菌株占到72.1%.菌株对氯霉素、庆大霉素、四环素和氨苄西林的耐药性随时间推移有上升趋势,并推测携带eae A毒力基因型的大肠杆菌与AMK、CTX、AZT、TET和AMP耐药性之间具有一定关联性,携带aggR毒力基因型的大肠杆菌与TET、CTX、NOR、AMP和CIP耐药性之间具有一定关联性.研究结果揭示了成都市动物性食品源大肠杆菌耐药性普遍和严重,为成都市大肠杆菌耐药性的安全评价提供依据.     

三重PCR方法对猪、鸡源细菌中四环素类药物耐药基因的检测

针对GenBank上已公开的四环素类耐药基因tetA、tetC、tetM序列进行比对分析,设计特异性扩增引物,建立三重PCR法快速检测方法.结果表明,单重PCR和三重PCR的符合率为100%.应用本检测方法和传统药敏试验方法(药敏纸片法)对412猪、鸡源细菌的四环素耐药基因和表型同时进行检测.PCR检测实验结果显示,在412株待检细菌中,tetA、tetC、tetM的检出率分别为47.57%,38.35%和34.95%.药敏实验结果表明,待测细菌对四环素的耐药率最高,为95%;对多西环素的耐药率次之,为92%;对米诺环素耐药率相对最低,为84%.比较两种方法,发现其检出结果的符合率为88%.说明两种方法具有较高的一致性.本研究建立了一种猪、鸡源细菌四环素类药物耐药基因三重PCR检测方法,并进行了初步应用.     

规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因调查及其共转移研究

为了解全国20家规模化鸡场粪样和苍蝇产CMY-2大肠杆菌中耐药基因与毒力基因的流行现状及其共转移情况,对2013-2015年间分离自粪样和苍蝇中的549株大肠杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）方法筛选出blaCMY-2阳性菌株;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析blaCMY-2阳性菌株的遗传进化关系;K-B纸片法检测阳性菌株对13种抗菌药物的耐药性;利用PCR技术检测19种相关耐药基因以及14种毒力基因;接合转移试验和质粒复制子分型研究耐药基因及毒力基因的传播方式。结果,33株大肠杆菌呈CMY-2阳性,阳性率为6.0 %,且均表现为多重耐药;检测到15种耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、blaOXA-1、qnrBDS、aac(6’)-Ib-cr、oqxA、tetA、tetC、sul1、sul2、sul3、rmtB和flor）和4种毒力基因（iutA、traT、fyuA和VagC）;33株携带blaCMY-2基因菌株中有21株接合转移成功,blaCMY-2基因可通过lncA/C或lncI1质粒与耐药基因（blaTEM-1、blaCTX-M-55、tetA或sul2）和（或）毒力基因（traT或VagC）共同转移。本研究阐明了规模化鸡场产CMY-2大肠杆菌携带耐药基因与毒力基因的情况,证实了细菌中质粒介导的耐药与毒力的共转移,为耐药性传播及疾病防控提供了参考。     

鸡源大肠杆菌对17种抗菌药的药敏测定

对从滩坊市主要养鸡场分离邮的20株致病性大肠杆菌进行了17种抗菌药的药敏实验，结果表明，这20种菌株除对氟哌酸（NOR）头孢哌酮（CFP）和头孢三嗪（CRO）未产生耐药性外，对其余14种抗菌药均有不同程度的耐药性，对红霉素（ERY），苯唑青霉素（OXA）和头孢潜新（CFX）普遍产生耐药性，20株菌中有14种耐药谱型，且多数为6种以上联合耐药性。     

鸽源大肠杆菌分离鉴定、毒力基因检测及药敏试验

为了确定疑似细菌感染鸽的病原菌,以病死鸽为研究对象,进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16S rDNA序列分析、血清型检测、动物致病性试验、毒力基因检测以及药敏试验。结果表明:此次分离的1株优势菌株,命名为QH-1,是短杆状、中等大小的革兰氏染色阴性菌,且其形态特征和生化鉴定特性与大肠杆菌相符;经16S rDNA序列分析进一步证实菌株QH-1为大肠杆菌;血清型检测结果显示,分离菌株QH-1为O26血清型分离株;动物致病性试验结果显示,分离菌株QH-1能引起鸽和小白鼠感染发病,且试验鸽发生与自然感染病例相似症状;毒力基因检测结果显示,大肠杆菌QH-1携带irp2,FyuA毒力基因;药敏试验结果显示,大肠杆菌QH-1对头孢曲松敏感;对阿莫西林、环丙沙星等耐药。疑似细菌感染的鸽病例为大肠杆菌的感染,可以选择头孢曲松进行防控。     

大肠埃希菌ESBLs检测及其耐药性分析

目的探讨本地区大肠埃希菌分离株中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的阳性率及产酶株对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法采用双纸片协同法检测菌株的ESBLs,并用Kirby-Bauer法检测了415株产ESBLs的大肠埃希菌对16种β-内酰胺类抗生素的耐药性,并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果ESBLs总检出率为50．8％,其中ESBLs检出率较高的科室为普外科、脑外科、肾内科、骨科、呼吸内科。所有大肠埃希菌分离株均对Imipenem和Meropenem敏感。产ESBLs株对其他14种β-内酰胺类抗生素的耐药性均高于非产酶株。结论本地区ESBLs检出率较高,分布科室有特殊性,产ESBLs株对抗生素的耐药性高于非产酶株。     

50例大肠埃希菌超广谱β─内酰胺酶检测结果及分析

目的：了解非临床标本中大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBb)的情况及检测最佳底物，以利于ESBLs菌的监控，防止ESBLs菌的传播和区域性流行．方法：用NCCLS推荐的双纸片协同筛选试验和表型确证试验对50例大肠埃希菌进行ESBLs的检测．结果：非临床标本分离的大肠埃希菌产ESBLs阳性率为896，用于ESBLs筛选的最佳底物是CTX，其次为CRO，而CAZ敏感性较差．结论：检测ESBLs，应用双纸片协同法进行初筛，对可疑菌株再用表型确证实验确证．对底物选择应使用两种以上的头孢类抗生素．     

产超广谱-内酰胺酶和AmpC酶阴沟肠杆菌的表型检测及耐药性分析

目的:监测江汉大学附属医院临床标本中分离出的阴沟肠杆菌产超广谱-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC-内酰胺酶的状况及其耐药性,为临床治疗提供依据.方法:用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的确证实验进行ESBLs的检测,用表型筛选法进行AmpC酶的检测;用纸片扩散法进行药敏试验.结果:从75株阴沟肠杆菌中检出ESBLs阳性9株(12.0%),AmpC酶阳性11株(14.7%);产ESBLs株对亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、丁胺卡那等药物的耐药率较低,产AmpC酶株对亚胺培南、头孢吡肟、丁胺卡那等药物的耐药率较低.结论:本院分离的阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶情况尚好;临床治疗应在药敏试验的基础上,针对不同的产酶株,选用亚胺培南、头孢吡肟和丁胺卡那等药物.     

产超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶阴沟肠杆菌的表型检测及耐药性分析

目的：监测江汉大学附属医院临床标本中分离出的阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpCβ-内酰胺酶的状况及其耐药性,为临床治疗提供依据．方法：用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的确证实验进行ESBLs的检测,用表型筛选法进行AmpC酶的检测;用纸片扩散法进行药敏试验．结果：bk75株阴沟肠杆菌中检出ESBLs阳性9株（12．0％）,AmpC酶阳性11株（14、7％）;产ESBLs株对亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、丁胺卡那等药物的耐药率较低,产AmpC酶株对亚胺培南、头孢吡肟、丁胺卡那等药物的耐药率较低．结论：本院分离的阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶情况尚好;临床治疗应在药敏试验的基础上,针对不同的产酶株,选用亚胺培南、头孢吡肟和丁胺卡那等药物．     

在耐药性研究中的大肠杆菌

随着抗生素应用于临床和生产,许多疾病得到了较好的控制,同时也出现了细菌的耐药问题.大肠杆菌能够通过畜禽产品的加工及储藏等传播给人类,许多耐药菌株引起的疾病治疗非常困难.本文就大肠杆菌耐药性的研究现状、耐药原因、耐药机制、以及耐药性的消除做一扼要概述.     

外源基因在大肠杆菌中表达的优化

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但基因的表达受多种因素的影响,现就各种影响因素综述了外源基因表达的优化策略,这将有助于采取有效方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率.     

STEC的耐药性监测和分析

目的了解各种标本来源的产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)对常用抗生素的敏感性.方法采用WHO推荐的K-B法,进行分鉴定菌株对18种抗生素的药物敏感试验,依照NCCLS判定结果.结果各种来源产志贺样毒素的大肠杆菌共46株,O157型23株,其余为非O157型.全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%(13株),氨苄西林为30.4%(14株),红霉素为69.6%(32株),而且有5株对至少4种以上抗生素产生多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-红霉素-氨苄西林.非O157型STEC耐药菌次为122,而O157型为63.结论非O157型STEC对抗生素可能较易形成耐药性.     

大肠杆菌SD序列与基因表达水平的关系

依据基因表达水平的理论预测方法从１３７３个大肠杆菌基因中选出了７３个甚高表达基因和１００个甚低表达基因,研究了这两类基因编码区起始密码子ＡＴＧ前－１到－２１位点（包含ＳＤ序列）的碱基构成与基因表达水平的关系。结果表明,ＳＤ序列中的富嘌呤区（约在－７到－１２位点）Ｇ和Ｔ的概率分布曲线中心到ＡＴＧ的距离（记为ＬＨ）与基因表达水平有明显的关系。甚高表达基因ＬＨ约为１０,甚低表达基因的ＬＨ约为８,另外在－     

微量量热法研究大肠杆菌对黄柏中活性成分和泰乐霉素的耐药性

应用微量量热法测定了不同浓度的黄柏总生物碱、小蘖碱、泰乐霉素对大肠杆菌代谢作用的热功率一时间曲线,建立了生长速率常数与药物浓度的关系．进而确定了最小抑菌浓度．在亚抑菌浓度下培养耐药菌,得到了生长速率常数与传代次数之间的关系,进而得出了大肠杆菌对三种药物耐药性的规律．同时利用该方法测出了药物间的交叉耐药性、同时用药耐药性规律及间隔用药的耐药性规律,并做了比较．结果发现。大肠杆菌对小蘖碱、黄柏总生物碱、泰乐霉索均有耐药性,但对小蘖碱、黄柏总生物碱的耐药性产生慢且容易消失;小蘖碱、黄柏总生物碱与泰乐霉索之间无交叉耐药;且与泰乐霉索间隔使用或同时使用可以减缓泰乐霉索耐药性的产生。     

大肠杆菌ATCase抗反馈抑制突变体的构建及其对胞苷积累的影响

为解决胞苷生物合成途径中天冬氨酸氨甲酰转移酶受胞苷三磷酸反馈抑制调节的问题,通过对其碱基序列和蛋白质结构分析,利用基因定点突变的方法构建了大肠杆菌的ATCase突变酶,得到三个突变体:M1(H20L)、M2(K60E)、M3(K94E),并在E.coli DH5α中对融合蛋白进行了表达.酶活测定表明,M1、M2、M3的ATCase酶相对活性都比野生型M0的高,分别为野生型M0的1.10、1.22和1.37倍,且比活力都有不同程度提高.与含野生型pyrBI基因的M0相比,含突变型基因的M1、M2和M3均对15,mmol/L的CTP具有强的抗反馈抑制作用,且M1、M2和M3的抗CTP反馈抑制作用分别是M0的5.4、6.0和8.5倍.最后将各突变质粒转入到E.coli Cyt10(Δcdd)中进行发酵培养,结果表明,与未含突变基因菌株相比,各含突变基因菌株的胞苷积累量均有不同程度的提高,说明ATCase定点突变使胞苷的合成积累途径得到了不同程度的强化.