嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达

报导了以启动子探测质粒pKK232-8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的研究.用限制性内切酶Hindl分别消化嗜碱芽孢杆菌NTT89染色体DNA和质粒pKK232-8,在体外重组,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子,结果从NTT89染色体DNA中克隆到一系列带有启动子活性的DNA片段,并在大肠杆菌中得到表达,这些转化子抗氯霉素水平在34～500mg/L不等,随机挑选10个转化子,提取其重组质粒进行限制性酶切,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高,插入片段大小在500～5500bp之间,通过地高辛标记的点杂交和Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体DNA.     

鸡源凝结芽孢杆菌的筛选鉴定及益生性能评价

凝结芽孢杆菌作为产芽孢的乳酸菌,其抗逆性和益生作用备受关注。为获得优良凝结芽孢杆菌菌种,本研究通过热处理从芦花鸡粪便中分离鉴定出22株潜在优良的凝结芽孢杆菌,并对其抗逆性及益生性能进行评价,结果表明：在高温(90℃)、酸(pH=2.0)和胆盐(0.5%)条件下,菌株NCUBCG003、NCUBCG004和NCUBCG014存活率达85.0%以上。通过主成分分析法可知,这三株凝结芽孢杆菌在高温和胃肠道环境下的综合耐受性强于其他凝结芽孢杆菌;其次,菌株NCUBCG003、NCUBCG004和NCUBCG014有较高的乳酸产量和胆固醇降解能力,乳酸产量达5.0 g·L-1以上,胆固醇去除率可达50.0%;最后,凝结芽孢杆菌有一定的抗氧化活力,特别是菌株NCUBCG003的羟自由基清除能力可达64.03 U·mL-1,DPPH自由基清除率可达76.57%,而菌株NCUBCG014总抗氧化能力最突出,相当于3.52mM的FeSO4溶液。综上可知,菌株NCUBCG003、NCUBCG004、NCUBCG014综合益生性能强于其他凝结芽孢杆菌,且安全可靠,具备在人和动物体内发挥益生作用的潜力,可作为优良微生物菌种资源,为凝结芽孢杆菌的工业化生产和应用奠定基础。     

不同温度下苏云金芽孢杆菌对金银花尺蠖幼虫的致病力

为了掌握苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）对金银花尺蠖（Heterolocha jinyinhuaphaga Chu）幼虫致病的最佳条件,测定了不同温度、不同浓度下的苏云金芽孢杆菌对金银花尺蠖幼虫的致死作用.结果表明,在15~35 ℃,苏云金芽孢杆菌浓度为1×10⁴,1×10⁵,1×10⁶,1×10⁷,1×10⁸,1×10⁹芽孢·mL^-1,各浓度下对金银花尺蠖幼虫均有一定的致死作用,在31 ℃时校正死亡率达到最大,分别为60.32%,67.24%,72.41%,79.31%,84.48%和91.38%,同一温度下的校正死亡率随着浓度的升高显著上升.方差分析显示,温度和浓度的交互作用对金银花尺蠖幼虫的校正死亡率没有显著影响（p>0.05）.由所建立的拟合模型计算可得各浓度对应的校正死亡率最大温度分别为29.88,31.54,32.50,31.17,33.28和32.75℃.毒性分析表明,31 ℃时苏云金芽孢杆菌的毒性最强,LC₅₀值为2.70×10³芽孢·mL^-1,高于或低于31℃,其毒性有所下降.     

基于神经网络模型及遗传算法的贝莱斯芽孢杆菌发酵沙丁鱼下脚料抗氧化活性的条件优化

微生物发酵技术是提升海洋鱼产品加工副产物价值的一种重要而有效的途径,而作为沙丁鱼加工副产物的鱼头是一种优质蛋白质和生物活性物质的绝佳来源.本文拟利用从传统鱼露中分离筛选的具有多种蛋白酶活性的贝莱斯芽孢杆菌SW5发酵沙丁鱼下脚料鱼头制备抗氧化活性物质,采用人工神经网络与遗传算法(ANN-GA)相结合方法,以DPPH自由基清除率和蛋白水解度(DH)为考察指标,确定最佳发酵条件.结果表明,沙丁鱼下脚料抗氧化物质最佳发酵条件为发酵时间42 h,发酵温度37℃,接种量3%,并在此条件下通过实验验证DPPH自由基清除率为91.26%.研究结果可为SW5菌株在海洋蛋白质资源的有效利用及功能性海洋食品生产应用上提供数据参考.     

枯草芽孢杆菌proA基因突变对提高大肠杆菌转化子渗透压耐受能力的影响

将付啦芽孢杆菌93151野生型菌株的proB基因和耐盐突变株93151—14的proA基因，进行体内重组，筛选出含有野生到proB和突变掣proA杂合基凶的转化子．此杂合基因能够与脯氨酸营养缺陷掣大肠杆菌JM83功能互补．分别测定了大肠杆菌JM83三种转化子（分别含有野生型proBA基因，双突变proBA基因和杂合proBA基因）的耐盐能力，发现含有杂合proBA基因转化子的耐盐能力（0．45mol／L）尽管比含有双突变proBA基因的转化子（0．5mol／L）要低一些，但比含有野生型proBA基因的转化子（0．3mol／L）要高得多．测定了3种转化子在不同盐浓度下生长时的胞内自由脯氨酸含量，发现其含量均随着盐浓度的上升而提高，表明其耐渗透胝胁迫能力的提高与胞内自由脯氢酸的积累密切相夫．但在相同盐浓度下，含有杂合proBA基因转化子的胞内自由脯氨酸含量要低于含有双突变proBA基因的转化子的胞内自由脯氯酸含量，但明显高于含有野生型proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量．说明尽管proB基因的突变在提高细胞耐高渗胁迫的能力中，有重要作用但proA基因的突变也发挥了不可忽视的作用．     

饲料中添加复合芽孢杆菌对三疣梭子蟹生长性能和消化酶活性的影响

通过室内和室外养殖试验,探讨饲料中添加复合芽孢杆菌(纳豆芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌)对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus Miers)生长性能、消化酶活性及养殖效益的影响.试验结果表明:添加1‰(T1)和21‰(T2)的复合芽孢杆菌饲料组幼蟹的蜕壳率、成活率和增重率均高于对照组(T0);摄食率随着芽孢杆菌浓度上升而呈现下降趋势;T1和T2组分别降低幼蟹饲料系数为15.38%和18.80%.芽孢杆菌添加显著影响胃、胰蛋白酶以及肝胰腺脂肪酶活性,但淀粉酶活性没有明显变化.室外池塘养殖结果表明:商品饲料中添加2‰复合芽孢杆菌的饲料组(D2)平均产量最高,比只投喂商品饲料组(D1)增产14.4%;D2组起捕时蟹平均壳宽比D1组大3.4%.饲料系数方面,D1组和D2组差异不大.认为三疣梭子蟹养殖饲料中添加2‰的芽孢杆菌具有较好的效果.     

高渗环境对枯草芽孢杆菌和粘质沙雷氏菌胞内自由氨基酸库含量和组成的影响

在基本培养基中９６ｈ培养下，４％ＮａＣｌ可完全抑制粘质沙雷氏菌（ＡＢ９００２５）生长，而枯草芽孢杆菌（９３１５１和９３２１５）则可耐受高达８％ＮａＣｌ．与无ＮａＣｌ条件下相比，粘质沙雷氏菌在２％ＮａＣｌ浓度下，胞内谷氨酸、丙氨酸和苯丙氨酸含量分别增加６１５％，１３５７％和１２７０％，为该菌的主要渗透调节物质．枯草芽孢杆菌在无ＮａＣｌ条件下，胞内未测出脯氨酸，而在８％ＮａＣｌ浓度下脯氨酸成为胞内含量最高的氨基酸，在每克干细胞中含量高达３３．３ｍｇ，是枯草芽孢杆菌体内合成的主要相容溶质．     

贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株与外源蛋白酶协同发酵对鳀鱼鱼露品质的影响

为进一步研究接种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) SW5菌株对发酵鳀鱼鱼露品质的影响,以低值鳀鱼为原料,通过接种贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株,并添加多种蛋白酶协同发酵鳀鱼鱼露.测定氨基酸态氮(AA-N)质量浓度、pH值和总酸质量浓度的变化,采用电子舌和色差仪测定鱼露发酵完成后发酵液的鲜味成分含量和色泽,与商品鱼露和酶解液进行对比.结果表明在发酵过程中,采用贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株与中性蛋白酶协同发酵,发酵第7天AA-N质量浓度达到最高,为13.93 g·L^-1,符合市售一级鱼露标准.3个处理组的色泽和鲜味成分含量与商品鱼露相近.综上所述,通过接种贝莱斯芽孢杆菌SW5菌株和蛋白酶对鳀鱼鱼露进行协同发酵可以缩短发酵周期,提高鱼露的产量以及AA-N和鲜味成分的含量.因此,该菌株可用作海洋蛋白源物质的发酵深加工.     

MIDI Sherlock微生物自动鉴定系统鉴定方法的建立——以贻贝中分离的蜡样芽胞杆菌为例

研究了用MIDI Sherlock微生物自动鉴定系统对贻贝中分离的蜡样芽孢杆菌自动鉴定方法的建立,通过培养基和取菌量的不同展开分析,并用生理生化鉴定和PCR鉴定来验证其准确性.结果表明：MIDI鉴定系统对于用TSBA培养基培养的蜡样芽孢杆菌鉴定的准确率比用营养琼脂培养基培养的要高,而且取菌量为100~120mg组鉴定时的准确率要高于其他取菌量的组,说明培养基和取菌量的不同都会对该系统的鉴定结果产生影响.最后确定蜡样芽孢杆菌鉴定方法为：TSBA培养待检微生物,获菌量控制在100~120 mg之间,生理生化鉴定和PCR鉴定验证了该方法的准确性.     

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．