青霉葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究

从青霉(Penicillium amagasakiense)发酵液中分离纯化葡萄糖氧化酶(简称GOD),通过DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,获得比活力为472 U/mg电泳单一纯酶制剂,采用SDS-PAGE电泳,表明该酶含有两个同型的亚基,分子量为150 ku.酶学性质研究表明:该酶催化葡萄糖氧化酶反应的最适pH为5.6,最适温度为40℃.酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5～8.5区间和温度低于50℃下稳定.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.该酶以葡萄糖为底物的米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52 μmol/(L·min)(pH 7.0,37℃).     

萤火虫荧光素酶分离纯化及其特性的研究

萤火虫荧光素酶只在萤火虫体内产生,一般通过养殖和用化学法提取。研究了以基因工程菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ－Ｌｕｓ－Ｊ－１为材料,从它的对数生长期发酵液中提取萤火虫荧光素酶。经检测其分子量为５×１０４,动力学性质研究表明它是非典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对荧光素作用动力学曲线为Ｓ型,最适ｐＨ为７．５,最适温度为１５℃,且对光和盐浓度非常敏感。     

葡萄糖氧化酶催化反应动力学特征及其抑制剂

研究了葡萄糖氧化酶—过氧化物酶—４－氨基氨替比林－２,４－二氯苯酚酶偶联反应的动力学性质及一部分金属离子对反应的影响。Ａｇ＋、Ｈｇ２＋离子是该酶催化反应的较强抑制剂,最小抑制浓度分别为５μｇ·Ｌ－１及４ｍｇ·Ｌ－１,Ｉ５０分别为２０μｇ·Ｌ－１及７７ｍｇ·Ｌ－１。     

狗小肠新生物活性肽的分离纯化及结构测定

研究了一种新的胃肠肽的分离纯化及其部分氨基酸序列测定．沸水处理后的狗小肠经醋酸提取、海藻酸吸附、盐酸洗脱、氯化钠盐析和乙醇沉淀，再经Sephadex G-25（fine）层析和两次RP-HPLC分离，从中纯化出一个热稳定多肽．用Tris-Tricine-SDS-PAGE鉴定其相对分子质量约为4 kD．该肽经胰酶水解，产物片断经RP-HPLC分离后，取其中之一主峰经CapLC-ESI-MS-MS（Q-TOF2）质谱仪测定氨基酸顺序为：T-E-Y-T-A-L-N-V-L-A-T-T-E-E-N-G．蛋白质数据库（Gen Bank和SWISS-PROT）查寻证明：此肽为首次发现的新多肽，正在进一步研究其生物学功能．     

大肠杆菌噬菌体的分离、纯化及其特性研究

探讨了从生活污水中分离、纯化大肠杆菌噬菌体的方法.经富集,从厦门大学、厦门港的生活污水中获得3种噬菌体.一是:蝌蚪状不可收缩尾的噬菌体,其头部为二十面体,直径约110～120 nm,尾部长220～230 nm,尾宽13～15 nm,无尾鞘、基板、尾丁、尾丝等结构.二是蝌蚪状可收缩尾的噬菌体,其头部为三十面体,约70 nm×110 nm,尾部长约120～130 nm,尾宽约18～22 nm,有尾鞘、基板、尾丁、尾丝等结构,该类噬菌体在污水中占绝大多数.三是短尾噬菌体,其头部为二十面体,大小为20 nm,尾部长约2～3 nm,在污水中占有一定的比例.2种噬菌体在-18℃冰箱可存活56天.经噬菌体处理的污水,总菌数下降了30%左右,大肠杆菌总数下降90%以上.     

聚苯胺固定化葡萄糖氧化酶电极的生物电化学性质

利用电化学方法将葡萄糖氧化酶和聚苯胺膜同时固定在石墨电极表面,酶电极在０．５～１０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖浓度范围内具有良好的线性响应,而且酶电极在较长的时间具有良好的稳定性。     

葡萄糖氧化酶在丝素膜中的固定化及其性能和应用于生物传感器(英文)

应用二种中性盐溴化红和氯化钙作为溶解蚕丝丝素的试剂,制成了二种固定化葡萄糖氧化酶丝素膜。经酶比色法和红外分光光度法分析,结果表明这二种丝素膜都是良好的固定化酶的生物材料。葡萄糖氧化酶经这些丝素膜固定以后对热和pH稳定性得到明显改良。这些酶膜性能稳定,具有高的活性得率,能长期存放。以这些固定化葡萄糖氧化酶丝素膜和氧电极为基础,研制的流动注射分析式电流型葡萄糖生物传感器性能较稳定,具有较宽的葡萄糖线性响应范围(0.5～15.0mmol/L),相关系数为0.999,可以反复测定葡萄糖一千次以上。     

疏水色谱法及其在生物大分子分离纯化中的应用

综合评述了疏水相互作用色谱法（hydrophobic interaction chromatography,HIC)的理论及其在生物大分子分离纯化方面的研究进展。     

壳聚糖酶的分离纯化及其特性研究

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25凝胶过滤层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析,将曲霉TCCC45017产的壳聚糖酶进行纯化,纯化倍数为57.21,回收率为26.55%,比活力提高至587.55 U/mg.经过SDS-PAGE电泳测得其分子质量为3.75×104 u.该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5.5,50℃以下保温1 h内酶的热稳定性较好,pH稳定范围为5.5～7.0,添加金属离子Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+对该酶有激活作用,Cu2+、Fe2+、Zn2+、Al3+则对酶有抑制作用.     

异淀粉酶产生菌的分离纯化及生长特性

自然界是微生物的大本营，工业微生物几乎都是从自然界选育来的。我们从兰州市淀粉厂附近的土壤中分离到产异淀粉酶的菌株，将样品于富集培养基中进行富集养后，分离、纯化筛选出酶活较高的菌株，对其进行了鉴定。依据新版伯杰细菌鉴定手册，鉴定该菌株为地衣芽胞杆菌（Bacillus Licheniformis)，与文献^[1,2]中所报道的异淀粉酶菌的产生菌是一致的对该菌株的生长特性进一步研究的结果是2－18小时是该菌的对数生长期，在16小时时菌体生长最快，18小时以后菌体生长进入稳定期。菌体32℃摇瓶发酵培养不同时间后能在540nm处测基OD值计算其酶活发现该菌的产酶是伴随着菌体的生长同时发生的，当菌体生长达稳定期后，产酶量迅速增加，到48小时，产酶量达最多，48小时以后产酶量逐渐趋于稳定。     

固定化酶催化合成头孢克洛与产物的分离纯化

应用来源于粪产碱杆菌的青霉素G酰化酶催化合成头孢克洛,并对生物转化反应过程进行了研究.在反应条件:pH 7.0、25℃、磷酸钠缓冲体系、加酶量3 U/mL和底物浓度60 mmol/L时,转化率达到85%,表明粪产碱杆菌青霉素G酰化酶具有较高的催化活力.研究了新型分离纯化方法,经过树脂分离的产物纯度超过95%,主要杂质含量小于0.5%,可以达到药典要求,为生物法合成头孢抗生素走向产业化奠定了基础.     

植物钙调素的分离纯化及其特性研究

本文以烟草愈伤组织和花椰菜这花序为材料，分离纯化钙调素。所得ＣａＭ的纯度用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定；生物活性用其对牛心肌环腺苷酸磷二酯酶（ＰＤＥ）的激活作用测定（ＣａＭ）的产量用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定。并比较了上Ｐｈｎｅｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱前对ＣａＭ溶液的不同处理。纯化的烟草愈伤组织和菜花ＣａＭ，具有牛脑ＣａＭ所特有的一些性质。它对牛心肌ＰＤＥ有明显激活作用，在含有Ｃａ＾２＋     

扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉 (Pen .expansum)WMC2 0 718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤 ,其酶纯化了 18.5倍 ,获得了比活性为 4 2 0 0U mg的纯碱性脂肪酶 ,提取得率 4 8.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和高效反相色谱 (RP HPLC)检测 ,分别达到了SDS PAGE电泳纯和RP HPLC色谱纯。经SDS PAGE和SephadexG 15 0凝胶过滤色谱 ,分别测得酶的相对分子质量为 2 75 0 0和 2 82 0 0 ,表明该酶以单体形式存在。N末端 2 0个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为 30℃ ,在 35℃以下稳定 ,4 5℃处理 30min仅残留 30 %酶活性 ;pH稳定范围在 6 .5～ 10 .5之间 ,最适pH值为 10 .0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大 ,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内 ,对脂肪酶的活性影响较小。     

不同组织来源透明质酸的分离纯化及收率比较

以鸡冠和人脐带为原料，分别利用水浸提乙醇沉淀法以及酶解法提取透明质酸粗品．前者经DEAE-纤维素纯化得高纯度的透明质酸，后者经乙酸钠纯化得纯品．经测定，红外扫描图谱与文献报道一致．     

纳米材料的特性及其在催化领域的应用

纳米材料科学是现代材料科学的重要组成部分,由于其特殊的晶体结构及表面特性,使得纳米材料的催化活性高于传统催化剂.介绍了纳米材料的特性及其在催化领域的应用研究成果.     

沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定

以人工自花授粉3d后的沙田柚（Citrus grandis var.Shatinyu Hort.）花柱为材料,切取1/2部位处花柱组织,匀浆后,进行抽提和硫酸铵盐析,得到35%级分的蛋白质粗提液,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白质带;经ConA-Sepharose4B亲和柱层析,特异峰（S^#）仅显示1条蛋白质带,恰好是35%级分中近正极端的2种蛋白质中的一种最优势蛋白质;部分生化性质测定结果表明,该蛋白质为碱性糖蛋白,糖含量为9.2%,由2个亚基组成,相对分子质量分别为38.0ku,32.0ku,等电点分别约为7.5,7.2;生物活性测定结果表明,该蛋白质能抑制离体（in vitro)萌发自花花粉花管的生长;氨其酸序列分析表明,32.0ku组分N-端15个氨基酸序列与矮牵牛,花烟草等的N-端相应序列极相似。     

用生物磁粒分离纯化小麦种胚中DNA的研究

用表面修饰有羧基的生物磁粒对小麦种胚提取液中ＤＮＡ的纯化做了系统的研究,得到提取纯化的最佳条件。结果表明,在提取温度５０￣５５℃,提取时间１ｈ,磁粒用量２０μＬ条件下,处理１５ｍｇ样品可得到纯度很高的ＤＮＡ约４３μｇ。此法可直接在离心管中操作,具有不离心,不接触氯仿,酚等有机萃取剂等特点。     

扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉（Pen.expansum）WMC20718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤,其酶纯化了18.5倍,获得了比活性为4200U/mg的纯碱性脂肪酶,提取得率48.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和高效反相色谱（RP-HPLC）检测,分别达到了SDS-PAGE电泳纯和RP-HPLC色谱纯。经SDS-PAGE和Sephadex G-150凝胶过滤色谱,分别测得酶的相对分子质量为27500和28200,表明该酶以单体形式存在。N末端20个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为30℃,在35℃以下稳定,45℃处理30min仅残留30%酶活性;PH稳定范围在6.5-10.5之间,最适PH值为10.0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内,对脂肪酶的活性影响较小。