杜仲树皮,鹇叶片和杜仲愈伤组织块有效成分的含量测定

对杜仲树皮（市售）、杜仲新鲜叶片、杜仲幼苗各种愈伤组织块（茎段、幼叶、子房、花药经ＭＳ培养基附加生长调节素培养诱导而得的愈伤组织）的有效成分进行研究，证明它们有一些相同成分。用２，６－二氯酚靛酚滴定法测定了它们维生素Ｃ的含量；用紫外分光光度法测定了它们的桃叶珊瑚甙的含量；用薄层层析－分光光度法测定了它们的氯原酸的含量。     

杜仲叶片愈伤组织诱导及增殖培养条件的优化

以杜仲嫩叶为外植体,运用正交试验优选6-BA、NAA、2,4-D和PVP四种物质组合,进行杜仲愈伤组织诱导及增殖试验。结果表明:(1)这四种物质对杜仲愈伤组织诱导的影响顺序是6-BA>NAA>PVP,对增殖的影响顺序是6-BA>NAA>2,4-D。利用杜仲叶片诱导愈伤组织最佳培养基为MS+0.5 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1NAA+2%PVP。(2)增殖培养基中添加1.0 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-12,4-D为最适增殖组合,能明显提高杜仲愈伤组织增殖系数。应用优化的杜仲愈伤组织诱导及增殖培养条件,能获得较大量的愈伤组织,使规模化生产杜仲有效成分成为可能。     

杜仲愈伤组织的诱导及增殖效应

以杜仲（Eucommia Umoidues Olive）的幼茎为外植体，接种于附加NAA、2，4-D、KT、6-BA及其组合的MS培养基上，均能产生愈伤组织，但MS 2，4-D的培养基上愈伤组织容易褐化，其他均可正常生长，MS NAA0.5mg/L 6-BA0.5mg/L KT1.0mg/L的培养基是适合愈伤组织的增殖培养的。     

杜仲翅果主要有效成分提取工艺的研究

研究杜仲翅果所含主要有效成分———杜仲油、杜仲胶和桃叶珊瑚甙的提取工艺,试验结果表明,杜仲油提取最佳工艺条件为:原料水分8.86%、提取时间15min×8次,提取率可达12.59%;杜仲胶最佳提取工艺为:浸提温度65℃、提取时间20min×5次,提取率可达8.94%;桃叶珊瑚甙采用乙醇/乙醚法提取工艺,提取率可达4.03%。     

基于转录组高通量测序分析白光对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响

利用Illumina HiSeq 2500平台对光暗培养的杜仲愈伤组织进行了转录组高通量测序,利用BLAST软件进行差异表达基因的功能注释和富集分析,就白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响进行了研究.结果表明:通过Trinity软件合并组装后共获得62 030个Unigenes,通过BLASTX比对,共获得25 417(40.98%)个有注释信息的Unigenes.通过对KEGG通路进行深入分析表明,白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)培养杜仲愈伤组织18 d,与绿原酸合成相关的3种酶基因上调表达,它们分别为苯丙氨酸解氨酶(EC 4.3.1.24,phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、肉桂酸-4-羟基化酶(EC 1.14.13.11,trans-cinnamate 4-monooxygenase,C4H)、奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(EC 2.3.1.133,Shikimate o-hydroxyl-cinnamoyltransferase,HCT).由此推断,白光能促进杜仲愈伤组织中绿原酸的积累.研究结果为获取高产绿原酸资源和杜仲遗传分析提供有价值的资料.     

杜仲离体培养愈伤组织药物成份定性分析

本文对杜仲离体培养愈伤组织的药物成份进行了初步的定性分析,其结果和杜仲树皮的定性分析结果相一致,这表明该愈伤组织中仍保持了杜仲树体内所含有的次生物质,从而为杜仲通过细胞大量培养实现药物成份工业化生产提供了理论依据。     

山葵叶片愈伤组织诱导分析

MS基本培养基中加入BA与2.4-D和BA与NAA的比例均为1:3时的培养基配方叶片成愈率分别为46.8％和45.6％,在MS+BA0.5+2.4-D1.5和MS+BA1+NAA3的培养基中成愈率分别达87.5％和71％。     

苦皮藤愈伤组织中有效成分的提取与测定

为扩大苦皮藤有效成分的来源,减轻对野生植物资源的需求压力,以苦皮藤素A含量为比较标准,对苦皮藤愈伤组织中有效成分的提取及其含量进行研究结果发现,以甲醇为提取溶剂采用回流提取时,料液比1∶8、60℃提取1.5 h,苦皮藤种子、叶和茎为外植体的愈伤组织苦皮藤素A提取率最高,皮藤素A含量茎愈伤组织种子愈伤组织叶愈伤组织.说明苦皮藤种子、叶和茎为外植体的愈伤组织中含有以苦皮藤素A为代表的主要活性成分.     

甘蔗愈伤组织耐盐性研究:耐盐愈伤组织的筛选及脯氨酸、还原糖含量变化

在附加不同浓度NaCl及2.4-D2mg/L的MS培养基上,甘蔗愈伤组织表现出不同的生长效应。培养基中NaCl浓度低时(1％以下),甘蔗愈伤组织表现为适应性生长;而在高NaCl浓度时(2％以上),愈伤组织生长表现出盐害特征。脯氨酸、还原糖测定结果显示,在盐适应情况下,甘蔗愈伤组织中的脯氨酸含量较高,还原糖含量较低;在盐害情况下则相反。     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

杜仲离体培养与快速繁殖

杜仲无菌苗顶芽在ＭＳ＋细胞分裂素１．５～３．０（ｍｇ／Ｌ，下同）＋ＩＡＡ０．１＋ＩＢＡ０．１＋ＮＡＡ０．１培养基中分化效果最佳，在ＭＳ＋细胞分裂素０．１～１．０培养基中扩增效果最好，在２／３ＭＳ＋生长素０．１～１．０培养基中生根效果最好。     

模拟酸雨对杜仲光合生理及生长的影响

研究了模拟酸雨对杜仲光合生理及生长的影响,结果表明:在系列模拟酸雨胁迫下,无论春、夏、秋季,杜仲叶叶绿素(Chl)含量和Chl a／b值随酸雨pH值降低而降低,呈显著正相关．pH 4．0～5．6酸雨在春、夏、秋季对杜仲叶Hill反应活力、CO2补偿点、光补偿点、光饱和点和最大净光合速率无显著影响,而在pH 3．5～2．5强酸雨胁迫下Hill反应活力逐渐降低,CO2补偿点和光补偿点明显升高,光饱和点、最大净光合速率则显著下降．另外, 酸雨各处理组最大净光合速率与杜仲总生物量、杜仲叶药用有效成分(绿原酸、桃叶珊瑚甙和总黄酮)含量呈显著正相关,表明酸雨通过影响杜仲光合生理活性,进而影响其生长和药用有效成分含量．     

杜仲叶中抗氧化活性成分的提取

以体外总抗氧化能力为活性跟踪指标,采用单因素试验研究了超声波提取杜仲叶中抗氧化物活性物质的提取条件。结果表明,杜仲叶中总抗氧化物质的最佳提取条件为:以20%乙醇水溶液为提取剂,料液比为1:18,提取40 min,提取2次。     

云南楚雄杜仲叶挥发油的化学成分分析

利用水蒸气蒸馏法提取云南楚雄杜仲叶挥发油,采用毛细管气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术并结合计算机检索对其挥发油的香气成分进行分析,鉴定出99个成分.用色谱峰面积归一法定量测定了挥发油中各组分的相对百分含量,分别占总峰面积的97.80%.     

Isolation of a novel antifungal peptide from the bark of Eucommia ulmoides Oliv

A novel Eucommia antifungal peptide, named EAFP3, was isolated from the bark of Eucommia ul- moides by NaC1 extract, gel filtration and reverse phase high performance liquid chromatography. The molecular mass of EAFP3 is 4157.3 Da, and its partial amino acid sequence is -. LYQQLIAGITLNK.-. EAFP3 exerts an inhibitory activity against Candida albicans in vitro and the drug concentration required for 50% growth inhibition （IC50） is 31.25μg/mL.     

杜仲形成层活动周期及过氧化物酶和酯酶同工酶的变化

杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ Ｏｌｉｖ．）形成层３月中旬恢复活动,７月下旬形成层细胞停止分解,同时停止产生新的韧皮部细胞,但直到８月中旬才停止产生新的木质部细胞。１２月新形成的未成熟韧皮部和木质部组织都继续分化、成熟。形成层活动周期中,过氧化物酶同工酶谱和酶活性在形成层区域和木质部区域中变化最大。ＰＯⅠ和ＰＯⅡ组同工酶只在春季形成层恢复活动时期的活动状态发生变化。负极端的ＥＳＴⅢ￣Ⅴ组     

杜仲叶与皮中绿原酸的正交提取对比实验

对四川道地中药材杜仲叶与皮中所含有的一种重要的生物活性物质绿原酸进行提取工艺研究.采用乙醇—水溶液体系作浸提剂,以绿原酸提取率为指标,考察温度、乙醇浓度、料液比、溶剂pH对提取工艺的影响.结果表明,杜仲叶绿原酸的最佳工艺条件为A3B2C3D1,杜仲皮的最佳工艺条件为为A3B1,在此条件下,杜仲叶中绿原酸提取率为3.324%;杜仲皮中绿原酸提取率为0.647%.     

杜仲叶片蒸腾速率的因子分析

利用ＬＩ－１６００稳态气孔计测定了杜仲叶片蒸腾速率的日变化，以及水分胁迫下蒸腾速率的变化，探讨了环境因子对杜仲叶片蒸腾速率的影响。