新疆双峰驼乳清蛋白组分对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的:探讨新疆双峰驼乳清蛋白组分对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定新疆双峰驼乳蛋白组分对HeLa细胞增殖的抑制作用;荧光染色检测HeLa细胞凋亡的形态变化;倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察HeLa细胞的形态变化;用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率、线粒体膜电位的变化.结果表明:新疆双峰驼乳清蛋白组分TR35可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01);倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察到典型的凋亡特征,荧光显微观察到凋亡小体;Annexin-Ⅴ/PI双染检测出现早期凋亡细胞;线粒体膜电位去极化,并将细胞周期阻滞在S期.结论:新疆双峰驼乳清蛋白组分TR35可抑制HeLa细胞的增殖和诱导细胞凋亡,TR35组分诱导细胞凋亡的途径可能与线粒体通路有关.     

葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究

构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B,SEB）基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段,T—A克隆后测序,构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量,Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较,所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础．     

p16蛋白对B型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡的影响

以流感病毒 B/沪防 93- 1株感染 He L a细胞 ,通过 Hoechst332 5 8荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 ,并用免疫组化技术测定 p16蛋白的表达 ,探讨 p16蛋白表达对 He L a细胞凋亡的影响 .结果表明 ,B型流感病毒感染 He L a细胞可诱导其凋亡 ,感染 2 4h后 ,细胞凋亡数达 84.5 % ;He L a细胞凋亡伴随 p16蛋白的表达 ,2 4h达高峰 ,阳性率为 49.2 3± 1.70 .研究结果提示 ,B型流感病毒感染诱导 He L a细胞凋亡过程与 p16基因激活相关 ,p16蛋白可能是介导流感病毒诱导细胞凋亡的另一重要途径 .     

FK506协同NGF促进缺氧神经细胞突起生长

为探讨免疫抑制药物FK506对缺氧神经细胞的影响和相关保护机制,构建了神经细胞缺氧模型,对比分析并定量检测了常氧与缺氧状态下,不同浓度FK506对类神经细胞PC12细胞突起生长的影响,通过蛋白免疫印迹法检测FK506在常氧与缺氧条件下对PC12细胞热休克蛋白HSP70、缺氧诱导因子HIF-1α表达的影响,探讨FK506保护缺氧性神经元受损的可能性机制.结果表明:在缺氧及常氧状态下,1~1 000nmol·L-1浓度范围内FK506均可协同神经生长因子(NGF)促进PC12细胞突起的生长,其中,FK506 100nmol·L-1与NGF 10ng·mL-1对缺氧后PC12细胞突起生长的协同作用最为显著.该配比的FK506协同NGF对缺氧相关保护蛋白表达具有促进作用,其抗氧化损伤的作用可能与促进HSP70和HIF-1α的表达有关.     

不同海洋饵料微藻对抗生素的敏感性差异分析

以细胞数量和叶绿素a含量为观测指标,研究了氯霉素、遗传霉素(G418)、青霉素对3种海洋饵料微藻:小球藻(Chlorella vulgarisBeij.),金藻8701(Isochrysis galbanaParke 8701)和小新月菱形藻(Nitzschia clos-teriumEhr.)生长的影响.结果表明:低于100 mg.L-1的氯霉素对小球藻的生长影响差异不显著(p>0.05),200mg.L-1时抑制作用显著;低于25 mg.L-1的氯霉素促进金藻8701的生长,大于100 mg.L-1时显著抑制;小新月菱形藻的生长随着氯霉素浓度的增高而不断下降,表现出明显的负相关性.不同浓度的G418对3种藻的生长均有明显的抑制作用.低于100 mg.L-1的青霉素能够促进3种藻的生长,随着浓度的升高,相对增长率逐渐下降.实验结果可为3种海洋饵料微藻的无菌系建立提供参考.     

羟丙基壳聚糖接枝丝素肽的合成及其性能

以转谷氨酰胺酶为催化剂,在水相条件下将丝素肽(SFP)接枝到羟丙基壳聚糖(HPCS)分子链上制备了一系列不同取代度的羟丙基壳聚糖-丝素肽(HPCS-SFP),采用Fourier变换红外光谱(FT-IR)表征其结构,通过单因素实验法分别探究反应温度、反应时间、反应底物质量比对HPCS-SFP取代度的影响,并考察了不同取代度HPCS-SFP的性能。实验结果表明,随着取代度的增加,HPCS-SFP清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基和羟基自由基的能力增强,说明丝素肽的引入提高了抗氧化性能;吸湿保湿性能也随着取代度的增加而提高;同时,HPCS-SFP还具有良好的细胞相容性。     

水溶性壳聚糖浸种对小麦幼苗抗性相关酶活性的影响

利用0.5 g/L的5 种水溶性壳聚糖分别对小麦进行浸种处理,在幼苗发育的5 个时期对叶内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性进行测定.壳聚糖处理降低叶内苯丙氨酸解氨酶活性.多酚氧化酶活性变化不显著,初期酶活性较对照高,随幼苗发育先降后升.壳聚糖浸种处理显著提高叶内过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性.5种分子量中以10×103的壳聚糖C浸种处理小麦幼苗叶内抗性相关酶活性强.     

螺旋藻C-藻蓝蛋白亚基分离及抗肿瘤活性研究

为解决C-藻蓝蛋白分子较大,难以直接与细胞发生作用的问题,对藻蓝蛋白亚基的分离纯化方法进行研究,并初步探讨了其对肿瘤细胞的抑制作用.对通过热变性、盐析和自制的羟基磷灰石吸附层析,从钝顶螺旋藻中获得高纯度的藻蓝蛋白(C-PC,A620/A2804.5).C-PC用8 mol.L-1的尿素溶液变性,过CM-Sepharose F.F.阳离子交换层析、透析、复性,获得具活性的C-PC亚基.用CCK-8试剂盒分别研究了C-PC、α和β亚基对一个肺腺癌细胞株SPC-A-1的生长的影响,结果表明藻蓝蛋白及其亚基对该细胞株的生长具有抑制作用,β亚基效果最好,预示着它们具有一定的抗肿瘤潜力.     

半胱胺修饰的FePt纳米颗粒对HeLa细胞的毒性

为探究半胱胺修饰的FePt纳米颗粒的抗肿瘤特性,本文采用化学还原法,制备出直径约3nm的FePt纳米颗粒,再用半胱胺(cysteamine,Cys)重新修饰其表面,将得到的FePt-Cys纳米颗粒分别与HELF(人胚肺成纤维细胞)和HeLa细胞(人宫颈癌细胞)孵育,用CCK-8法评估其细胞毒性,并通过流式细胞仪分析其对两种细胞周期分布的影响.结果发现,在一定浓度范围内,FePt-Cys纳米颗粒可以显著抑制HeLa细胞的增殖,但不影响HELF细胞的生长,其机制可能是通过细胞周期调节作用来产生细胞毒性.基于其对肿瘤细胞显著的杀伤作用和对正常细胞良好的生物相容性,FePt-Cys纳米颗粒将来可能作为一种有效的化疗药剂.     

羧丁酰壳聚糖-丝素肽/氧化魔芋可注射水凝胶的制备及性能

利用丝素肽对羧丁酰壳聚糖进行接枝改性,再以氧化魔芋（OKGM）作交联剂,通过Schiff碱反应制备得到一种可注射的羧丁酰壳聚糖-丝素肽/氧化魔芋（NSGM）水凝胶。样品的红外光谱和磁共振氢谱证实了改性、接枝和交联反应的发生,扫描电镜结果表明该水凝胶具有内部连通的孔结构。性能研究结果表明,该水凝胶具有35～70 s可调节的凝胶时间,溶胀率最高可达1 259%,室温下24 h后最多可维持21.1%的水分,同时具有良好的生物相容性。     

固定化酵母酿造黄酒试验初报

本文用海藻酸钙凝胶固定活酵母细胞酿造黄酒试验在实验室获得成功,试验结果表明:(1)黄酒发酵周期为10天,与传统生产工艺相比可缩短50—70天;(2)本试验制成之黄酒含乙醇16％(v)左右,糖份为0.6(g/1OOml),总酸为0.4(g/100ml)以下。     

小鼠B7-1cDNA克隆、测序、表达及其抗瘤效应的初步探讨

用反转录ＰＣＲ的方法,从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后,插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与文献报道一致．通过脂质体介导将ｐＣＤ－ｍＢ７．１导入Ｂ７－１的小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６（Ｆ０）中,经ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交初步证实Ｂ７－１在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达．同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用ＬＤＨ释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性,结果显示,与野生型和模拟转染的Ｂ１６细胞相比,Ｂ７－１基因转染的Ｂ１６细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型Ｂ１６细胞的特异杀伤活性（ｐ＜０．０２）．这说明,将Ｂ７－１基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性,诱导有效的抗肿瘤免疫反应     

新月菱形藻(Nitzschia closterium)制备参数对藻球性质及去氮磷效果的影响

为了制备出高效的固定化藻球, 完善固定化藻球的制备工艺, 以新月菱形藻为藻种, 采用褐藻胶包埋技术和单因子试验, 研究了不同褐藻酸钠质量分数(2.0％、2.5％、3.0％)和不同溶剂(海水、蒸馏水、NaCl溶液)对藻球形状、强度、传质性、去除氮磷效果及藻细胞生长的影响. 结果表明: 不同褐藻酸钠质量分数对藻球形状影响显著(P<0.05), 褐藻酸钠质量分数为2.0％和2.5％时藻球呈球形, 为3.0％时藻球呈不规则的水滴形; 不同溶剂种类对藻球形状则无影响. 不同褐藻酸钠质量分数对藻球强度影响显著(P<0.05), 随着褐藻酸钠浓度的增加, 藻球强度逐渐增强; 不同溶剂对藻球强度的影响显著(P<0.05), 影响大小的排序为海水>NaCl>蒸馏水. 不同褐藻酸钠质量分数和不同溶剂对藻球传质性影响显著(P<0.05), 随着褐藻酸钠浓度的增加, 藻球传质性也逐渐增强; 溶剂对传质性影响的强弱排序为海水>NaCl>蒸馏水; 不同褐藻酸钠质量分数和不同溶剂对固定化藻球藻细胞生长及去氮磷效率影响显著(P<0.05), 其中以3.0％褐藻酸钠+海水的藻细胞生长最快, 去除氮磷效率最佳.     

pEGFP-MEK1/Q56P重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达

构建第56位氨基酸发生突变的MEK1基因(MEK1／Q56P)与增强绿色荧光蛋白(EGFP)报道基因融合表达的真核重组质粒pEGFP-MEK1／Q56P，经限制性酶切及测序鉴定后，将其导入293T细胞中，用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，同时进行Western blot检测。酶切鉴定及测序结果表明构建的pEGFP-MEK1／Q56P与预期结果一致，荧光观察及Western blot结果表明MEK1／Q56P和EGFP在293T细胞中能以融合蛋白的形式表达，且MEK1／Q56P能特异性活化ERK1／2，本研究成功构建了含有MEK1／Q56P的绿色荧光蛋白真核表达质粒，便于对Raf／MEK1／ERK1／2信号传导通路做进一步研究。     

蛛丝和蚕丝的 SEM和 EDX 研究

应用扫描电镜观察蛛丝和蚕丝 10个样丝形态 ,并测量了这几种天然纤维的直径. 结合 X 射线光电子 能谱分析,对样丝的化学无素(氯、钾、钙、铁、硅、铬)及其含量(原子个数百分比)作了分析比较.     

固定化假单胞菌产L-多巴

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量，过高的底物加入量不利于固定化细胞的重复使用     

低分子量壳聚糖纳米粒子缓释蛋白质药物性能的研究

低分子量壳聚糖(LCS)和三聚磷酸钠(TPP)以一定的浓度和体积配比在室温下搅拌，制得了LCS和经聚乙二醇修饰的LCS纳米粒子．用透射电镜观察纳米粒子的形貌，傅立叶红外光谱和X-衍射图谱表征其结构．并利用牛血清蛋白(BSA)作蛋白质模型药物，研究LCS纳米粒子包封和缓释蛋白质药物的性能，包封率达90％以上，在pH7．4的磷酸盐缓冲溶液中，释放达1周以上．并将LCS纳米粒子和高分子量壳聚糖(HCS)纳米粒子进行对比，粒径分别为20nm和210nm，蛋白质包封率分别为91．1％和93．2％，8d内总释放率分别为73．9％和17．6％．增加聚乙二醇的用量可降低蛋白质的包封率，加快释放速度．     

稳定表达egfp基因细胞的构建与克隆

将增强的绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent pprotein,EGFP）基因插在HCMV（humancytomegolovirus）启动子下游,构建了表达质粒pCA13-eG,用脂质体Lipofectin介导分别转染HeLa细胞、Vero细胞,仅通过细胞传代,就最能稳定高效表达EGFP的绿色细胞,比较发现,质粒pCS13-eG转染后,产生能高效表达EGFP的HeLa细胞其比率高于Vero细胞;EGFP高效表达对Vero细胞的毒性大于对HeLa细胞的毒性,本研究表明,绿色细胞轮廓清晰,由于其特有的性质,在用于细胞的形态观察、细胞分裂等研究时会有所作为。     

再生丝素固定葡萄糖脱氢酶的生物传感器

本文报导了以甲苯胺兰( TB)键合修饰浸蜡石墨电极为基体电极 , 用再生丝素将葡萄糖脱氢酶 (GDH) 、烟酰胺腺嘌呤二核苷(NAD+)固定在基体电极表面, 构成葡萄糖脱氢酶传感器. 在 pH=7. 6 的 NaOH-KH2PO4 介质中, 该传感器与葡萄糖浓度在 2. 0×10-5 ～ 5. 4×10-4mol·L -1范围内有良好的线性 关系, 响应时间为 20 s. 本文讨论了影响传感器响应电流的各种因素和测定葡萄糖的最佳条件. 用此传感 器测定了人血清中葡萄糖含量, 与酶法结果一致.     

杯芳烃交联壳聚糖的合成及吸附性能研究

双缩水甘油基杯[4]芳烃与壳聚糖中的氨基或羟基发生交联，得到了两种网状结构交联壳聚糖．分别考察了这两种交联壳聚糖对过渡金属离子Co^2 ，Cu^2 ，Zn^2 ，Ni^2 及碱金属离子Na^ ，K^ ，Cs^ 的吸附性能．结果表明：N-交联壳聚糖对碱金属离子的吸附能力远远大于未交联壳聚糖；两种交联壳聚糖对过渡金属离子的吸附与交联方式有关．