Taura 综合征病毒主要结构蛋白的表达与纯化

根据Taura综合征病毒(TSV)基因组,设计特异性引物,从感染病毒组织中提取组织总RNA后扩增,分别将3个主要结构蛋白基因VP1、VP2和VP3克隆到pGEM TEasyVector.与表达载体连接后,导入大肠杆菌中诱导表达,并纯化目的蛋白.诱导表达的融合蛋白分子量分别为54.2×103、43×103和57.1×103,在变性条件下过柱纯化VP1和VP2,一次可以纯化10mg以上纯度较高的蛋白.     

幽门螺杆菌临床菌株主要蛋白抗原表达及其诱导宿主产生抗体差异性的研究

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为选择幽门螺杆菌基因工程疫苗抗原提供依据．实验结果显示,rUreB、rHpaA、rVacA、rCagAl、rNapA、rFlaA和rFlaB表达量分别约为细菌总蛋白的35％、32％、15％、230．4、56％、25％和20％．各重组抗原均能与商品化幽门螺杆菌抗血清（DAKO）产生阳性WesternBolt结果,免疫家兔能产生特异性抗体．从332例慢性胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜活检标本中,分离获得145株幽门螺杆菌,其阳性率为43．8％．所有幽门螺杆菌临床菌株均表达UreB、HpaA、FlaA和FlaB,52．4％、91．7％和93．1％菌株分别表达VacA、CagA和NapA．145例幽门螺杆菌感染的病人血清中,UreB、HpaA、VaeA、CagA、NapA、FlaA和FIaB的IgO抗体阳性率分别为100％、86．9％、42．8％、70．3％、89．7％、84．8％和79．3％．此外,不同胃疾病标本中幽门螺杆菌分离率均无显著性（P〉0．05）,但菌株VaeA和NapA表达率与疾病严重程度相关（P〈0．05）．综合分析实验结果,ureB是研制幽门螺杆菌基因工程疫苗首选抗原,其次是NapA和HpaA;各病种与幽门螺杆菌感染率无关,但与菌株毒力有关．     

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化E.coli BL21-codonPlus (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原 ;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.     

动态高压微射流技术对乳清蛋白结构的影响

采用动态高压微射流技术处理乳清蛋白溶液,研究其分子量、巯基含量以及二级结构的变化。结果表明:动态高压微射流处理前后的乳清蛋白的分子质量几乎没有发生改变;而其巯基含量及紫外吸收基团的含量随着微射流压力的增大表现为先增后减;红外光谱分析表明动态高压微射流处理后乳清蛋白在3 295.2cm-1处的吸收峰发生红移,1 650cm-1处的吸收峰强度有所降低,说明其二级结构发生了变化,但变化幅度不大。     

Saxiphilin蛋白分离纯化及其活性测定

Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素（PSPs）特异性结合的可溶性血清蛋白,利用超滤离心及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化Saxiphilin活性蛋白使其达到一定纯度,通过酶联免疫检测技术对其活性进行研究.结果表明：分离纯化目标蛋白时,采用pH值为6.5的Tris-HCl缓冲液,使用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为5.9和11.2,回收率为67.8%和50%.通过SDS-聚丙酰胺凝胶电泳验证其分子量为90 kDa,并通过毒素粗蛋白的结合曲线可得粗蛋白与PSP浓度比达到46.86时,目标蛋白结合PSP毒素的量达到饱和.将Saxiphilin蛋白应用于微量滴定板来检测PSPs,具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点.     

Saxiptlilin蛋白分离纯化及其活性测定

Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素(PSPs)特异性结合的可溶性血清蛋白,利用超滤离心及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化Saxiphilin活性蛋白使其达到一定纯度,通过酶联免疫检测技术对其活性进行研究.结果表明:分离纯化目标蛋白时,采用pH值为6.5的Tris-HCl缓冲液,使用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为5.9和11.2,回收率为67.8%和50%.通过SDS-聚丙酰胺凝胶电泳验证其分子量为90kDa,并通过毒素粗蛋白的结合曲线可得粗蛋白与PSP浓度比达到46.86时,目标蛋白结合PSP毒素的量达到饱和.将Saxiphilin蛋白应用于微量滴定板来检测PSPs,具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点.     

不同豆类蛋白组成、结构和功能特性

以10种豆类为原料,采用碱提酸沉法提取蛋白,分析了不同豆类中蛋白质的氨基酸组成、分子量分布、结构和功能特性。结果表明,在10种豆类蛋白的氨基酸组成中,均为谷氨酸（Glu）含量最高,蛋氨酸（Met）含量最低;不同豆类蛋白中必需氨基酸含量最高是鹰嘴豆蛋白,最低是豌豆蛋白。SDS-PAGE表明不同属间豆类品种的蛋白亚基及分子量分布组成差异显著。同时,各豆类蛋白表现出不同的结构特征,刀豆蛋白紫外吸收最强,鹰嘴豆蛋白的紫外吸收最弱;豌豆蛋白的表面疏水性最强,刀豆蛋白表面疏水性最弱;鹰嘴豆蛋白的表面巯基含量最高,刀豆蛋白的表面巯基含量最低。蛋白的功能性质方面,刀豆蛋白持水性最高,豌豆蛋白持水性最低;黑豆蛋白持油性最高,豇豆蛋白持油性最低;大豆蛋白和刀豆蛋白具有较好的起泡性和泡沫稳定性,黑豆蛋白泡沫稳定性最好,但起泡性较差;黑豆蛋白乳化性最好,但乳化稳定性较差,鹰嘴豆蛋白乳化性较差,而乳化稳定性最好,而芸豆蛋白具有较好的乳化性和乳化稳定性。因此,在以豆类蛋白为基料的食品加工中,可根据加工生产需要选取最适宜的豆类品种,本研究结果对豆类蛋白质资源的开发与利用具有一定的指导作用。     

酵母双杂交筛选抑癌基因SuFu相互作用蛋白

以Hedgehog信号通路关键负调控因子Suppressor of Fused(SuFu)蛋白作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从人均一化cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质,共获得160个阳性克隆,包括Hedgehog信号通路蛋白Gli3和一些肿瘤蛋白如乙醛脱氢酶1(ALDH1A1)、激酶、转运蛋白、转录因子等.通过免疫共沉淀和免疫细胞化学实验证实,SuFu与ALDH1A1发生相互作用,后者可能参与Hedgehog信号通路的调控.     

与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

绿色荧光蛋白的结构、发光机制及其应用研究

源自水母的绿色荧光蛋白作为生物标记物有其独特优点.近年来的研究揭示了其结构、发光特性和发光机制,并使之广泛应用于生物学的各个领域.     

猪松果体提取液对雌激素诱导的小鸡生殖器官代谢的作用

猪松果体提取液对雌性小鸡输卵管和雄性小鸡睾丸核酸和蛋白质合成均有刺激作用．猪松果体提取液还可加强雌二醇对小鸡输卵管的刺激，削弱雌二醇对小鸡睾丸的抑制作用．猪松果体提取液和雌二醇共同作用也会加速小鸡松果体蛋白质的合成．人工合成的乙烯雌酚对小鸡的生殖器官代谢的作用与雌二醇不完全相同     

5,10,15,20—四（4—甲氧基苯基）卟啉锌,钴配合物的合成与表征

合成了两种新配合物:Zn[T(4-MOP)P]及co[T(4-MOP)P],进行了元素分析,电子光谱,红外光谱和质子核磁共振波谱研究。