黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质

黄牛肝菌(Boletus fulvus)经生理盐水浸提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose及Sephacryl S-100分子筛层析后得到黄牛肝菌凝集素(BFL).经SDS-PAGE电泳及Sephacryl S-100分子筛层析检测表明,所得的BFL是由两个分子量约15.8kDa、非二硫键相连的亚基组成的表观分子量为32kDa的二聚体.BFL可快速凝集兔血红细胞,其最低凝集浓度为3.9μg/mL;糖抑制试验表明,胃粘蛋白、甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和卵清蛋白均可抑制BFL活性.当温度在70℃以下和pH值在6.0~9.8之间时,BFL凝血活性基本不变.然而当温度至90℃以上和在极端pH值下,BFL凝血活性减弱甚至完全丧失.不同浓度的脲和盐酸胍对BFL凝血活性的影响表明:随着变性剂浓度的增加,BFL的结构逐渐被破坏.     

香葱凝集素的分离纯化及其部分性质的研究

香葱叶片经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５和Ｂｏ－ＧｅｌＰ－３０柱层析分离得到香葱凝集素。该凝集经聚丙烯酰胺凝胶电泳、糖蛋白色均显示单一条带。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两条带相对分子质量分别为２９０００和２３０００，表明该凝集素是由两个不同的亚基组成。     

大豆凝集素的分离纯化及血凝效果研究

为研究不同品种大豆中凝集素相对含量高低及血凝效果,用0.9%Na Cl溶液抽提不同品种大豆中的凝集素,通过观察凝集素提取液与2%红细胞悬液的凝集反应程度,来初步判断凝集素的含量高低;再通过测定凝集素提取液与2%红细胞悬液作用后上清液吸光值,以及凝集红细胞沉淀的干重,进一步确定不同品种大豆中凝集素的相对含量。结果表明,利用血凝法可快速测定大豆中的凝集素含量,‘晋科5号’、‘长豆34号’凝集素含量最高,‘晋豆25号’、‘晋遗57号’凝集素含量次之,‘晋遗59号’含量最低。     

大豆凝集素的分离纯化及活性鉴定

以D-半乳糖胺为配基、 FF-sepharose 4B为固定相, 制备大豆凝集素亲和层析填料. 分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白, 测定其纯度、 免疫原性和凝集活性, 并与美国Sigma公司的标准品比较. 结果表明： 每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10 mg大豆凝集素; 纯化获得的大豆凝集素分子量为30 000; SDS-PAGE测定纯度大于98%; Western blot结果为阳性; 1 mg/mL SBA血集效价为1/2^10; 其纯度、 免疫原性和凝集活性等指标与大豆凝集素标准品相同, 与理论值相符.     

甘薯品种岩8-6凝集素的分离纯化及其性质

甘薯品种岩8－6的叶片组织依次经硫酸铵分级沉淀,甲壳素亲和层析及Sephadex G-75分离纯化得到一种凝集素（IPomoea Batatas Lectin,简称IBL）,纯化的IBL电泳显示一条蛋白质着色带,IBL的亚基相对分子质量为47000,IBL对兔红细胞有凝集作用,凝血活性可被D－果糖明显抑制,IBL对热不稳定,加热到70度时,活性完全丧失,IBL对碱敏感,IBL含有16种氨基酸,富含Asp和Glu,中性糖含量为5．07％。     

菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究

以Bean Saint esprit a oeil rouge菜豆鲜荚为试验材料,优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺,研究了提取剂、料液比、p H值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响,建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明:以磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶25,p H值6~8,浸提时间8 h,菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-52阴离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析,冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带,血凝法检测有血凝活性。     

木菠萝凝集素的纯化与性质研究

木菠萝种子经抽提、４０－６０％饱和度度硫酸铵沉淀和Ｇａｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析，得到纯化的木菠萝凝集素（Ｊａｃａｌｉｎ）。Ｊａｃａｌｉｎ分子量约为５８２００，由分子量分别是１４０００和１５８００的亚基组成，等电聚焦电泳显示多条区带，其ＰＩ为５．７－８．６５，Ｓｃｈｉｆｆ’ｓ试剂染色证明它是一种糖蛋白，Ｎ－末端为精氨酸和甘氨酸。Ｊａｃａｌｉｎ能凝集除山羊、鸡以外的多种动物和人Ａ、Ｂ、Ｏ和Ａ     

甘薯糖蛋白的分离纯化技术

采用正交设计法确定甘薯中糖蛋白最适的分离纯化技术，探讨了影响提取率的主要因素，分离纯化甘薯糖蛋白粗品，从而得出不同方法所分离出不同质量的糖蛋白。     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

芦荟凝集素提取及促免疫活性功能初步研究

分别从3种有经济价值的芦荟品种,即中华芦荟（Aloe vera .ver.chinensis(Haw））,库拉索芦荟（Aloe barbadensis Mill)和木立芦荟（Aloe arborescens Mill)中采用凝胶层析法提取了3种凝集素,Lecl,Lec2和Lec3,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其为单一成分的糖蛋白,比较了3种凝集素的糖和蛋白的含量,得出库拉索芦荟凝集素Lec2糖含量最高,木立芦荟凝集素Lec3蛋白含量最高,免疫学实验证明,库拉索芦荟凝集素的凝集效价最高,其次为木立芦荟,中华芦荟,3种凝集素对淋巴细胞转化功能都有明显的促进作用,其中库拉索芦荟凝集素Lec2的促淋巴细胞转化率最高,因此芦荟凝集素在治疗免疫功能低下方面可能有一定的应用价值。     

AtGT-3b基因克隆及原核表达与纯化

GT-3b转录因子是一个受NaCl和病原体诱导表达的GT-1-like转录因子,它能与GT-1 cis-element( GAAAAA)相互作用,促进下游基因的表达,在植物耐盐中起着重要的调节作用.通过分离了拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtGT-3b基因,克隆到原核表达载体pCold TF中,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中进行融合表达;通过纯化得到AtGT-3b融合蛋白,以期用于研究其与GT-1顺式作用元件在体外的相互作用.     

羊布鲁菌外膜蛋白OMP2b的克隆，原核表达及纯化

研究羊布鲁菌外膜蛋白 OMP2b 基因的克隆,原核表达,以及纯化。根据羊布鲁菌 M5株外膜蛋白 OMP2b 蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为1130bp 的目的基因片断,克隆入融合表达载体 pGEX-4T-1,构建重组质粒 pGEX-4T-1-omp2b。在大肠埃希菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用 Western-blot 分析方法鉴定纯化蛋白。结果成功构建了 pGEX-4T-1-omp2b 原核表达载体并在大肠埃希菌中表达了 omp2b 基因,纯化后所获得的蛋白与目的蛋白大小一致且与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应,说明其为布鲁菌 OMP2b 蛋白。本研究成功构建了 pGEX-4T-1-omp2b 原核表达载体,并且在大肠埃希菌中进行表达,纯化的 OMP2b 蛋白具有良好的免疫原性。     

羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化

研究羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d基因的克隆,原核表达,以及纯化,根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白Omp25d蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为650bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-Omp25d。在大肠杆菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用Western-blot分析方法鉴定GST-Omp25d蛋白。结果成功地构建了pGEX-4T-1-Omp25d原核表达载体并在大肠杆菌中表达了Omp25d基因,纯化后所获得的融合蛋白与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应。表明研究成功构建了pGEX-4T-1-Omp25d元和表达载体,并且在大肠杆菌中进行表达,纯化的融合蛋白具有良好的免疫原性。     

基于克隆选择的小世界优化算法

针对小世界算法在多极值等复杂函数优化中存在算法后期种群多样性退化、全局搜索效率下降等问题,提出一种基于种群克隆选择的小世界优化算法。该算法以小世界现象信息传递的高效性改进克隆过程中体细胞高频变异的随机性,实现克隆增殖、克隆选择以及小世界网络短连接等算子在局部空间的搜索,克隆删除与小世界随机长连接在全局空间的搜索。实验结果表明:各种克隆算子与小世界变异算子相结合,增加了种群的多样性,扩大了搜索范围。与其他算法相比,该算法在收敛速度和多极值点函数搜索能力等方面具有明显改善。     

Expression,purification and spectra characterization of neuroglobin

The expression, purification and spectra characterization of recombinant human neuroglobin （NGB） are reported. The pET3a plasmid with the gene of NGB was transformed to E. coli BL21 （DE3） plys cells and expressed in TB culture medium. The results indicated that the expression amount of NGB is about 10 percent of the total protein in cells. The NGB protein was purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose anion exchange column, Hiload 16/60 superdex 75 size exclusion chromatography and a Hiprep 16/10 Q FF anion exchange column, and a red soluble protein was obtained which showed a single band in electrophoresis. Electrospray ionization mass spectrometry （ESI-MS） showed that its molecular weight is 16930.0 Da. UV-spectra indicated that the reduced NGB has a strong absorption peak at 425 nm, and two weak peaks at 531 and 559 nm, which can be assigned to γ, β and α bands of porphyrin, respectively, and the oxidized NGB has a strong absorption peak at 413 nm which corresponds to the transition of π electrons in the porphyrin ring. The fluorescence maximal excitation wavelength is at 281 nm and its maximal emission wavelength is at 338 nm. CD spectra indicated that its secondary structure is a typical α helix, and has a positive peak at 410 nm induced by heme, The NGB protein is stable when the pH is higher than 4.     

从海带根中提取纯化褐藻硫酸多糖

海带根粉碎后，经过酶解，去除褐藻酸，得到酶解液；通过DE-41、DE-80离子交换柱层析，得到海带硫酸多糖(FGS)F1-F8的8种不同组分；再用Sepharose 2B凝胶柱层析纯化，获得层析纯F1-F8的FGS．我们初步测定了8种FGS的分子量、单糖组分及其摩尔比．FGS为一类含有鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、半乳糖以及硫酸根的杂多糖．     

山梗菜嫩茎无性系的建立

以山梗菜的嫩茎为试验材料,先后对其愈伤组织培养、愈伤组织分化、分化芽生根和试管苗的栽培进行了研究．结果证明：MS＋ KT0．2mg·L -1＋2,4-D1．4mg·L -1是愈伤组织诱导培养的理想培养基;1/2MS＋ NAA0．1 mg · L -1＋ZT0．1 mg · L -1＋AgNO30．3 mg · L -1是愈伤组织分化培养的理想培养基;1/2MS＋NAA0．1 mg · L -1＋IAA0．2 mg · L -1＋ABT2号1．0 mg · L -1是试管苗生根继代增殖培养和不定芽生根培养的适宜培养基．试管苗移栽成活率为94．2％;定植成活率达到了99％以上．定植的试管苗不仅具有野生山梗菜所有植物学性状,而且还能在翌年正常开花结果．     

基于AST的克隆序列与克隆类识别

为了减少代码冗余,改善程序结构,提出一种新的基于抽象语法的代码克隆识别方法,归纳出常见的代码克隆形式并给出相应的重构技术.用二叉树表示源程序的抽象语法(BAST),逐条判断各语句BAST子树的同构性,识别出相似的语句序列作为克隆序列;根据子树同构识别一元克隆类,然后通过克隆类的连接操作,逐步识别二元及任意元数的克隆类.实验分析了多个开源软件,识别出了其中的克隆序列以及克隆类,从中归纳出4种常见的代码克隆,其基本特征分别为:相同的程序点访问同类对象的不同属性、部分变量名不同、针对不同的数据类型实施相同的操作、修改克隆区域外定义的变量,并对这4种代码有效地实施了重构.     

天花粉蛋白基因的克隆、表达和活性鉴定

用PCR（Polymerase Chain Reaction)扩增出天芬粉蛋白（Trichosanthin,TCS)基因全长序列，插入表达载体，经双酶切鉴定及测序分析，表明阅读框正确，表达His-TCS活性融合蛋白并纯化天花粉蛋白，鉴定出其具有RNA N－糖苷酶活性和抗原抗体结合活性。