Hochdruck-flüssigkeits-chromatographische Analyse der Katecholamine mit einem Äthylendiamin-Reaktionsdetektor

Zusammenfassung Es werden die Möglichkeiten einer hochdruck-flüssigkeitschromatographischen (HPLC-) Analyse durch lonenaustausch und reversed-phase-Chromatographie für Dihydroxyphenylalanin (Dopa) und die Katecholamine Dipamin, Noradrenalin und Adrenalin in Verbindung mit einem Reaktionsdetektor beschrieben. Der Reaktionsdetektor besteht aus einem Fluorimeter und einer Reaktionseinheit mit Flüssigkeits-Dosierpumpe. In der Reaktionseinheit findet die Umsetzung der von der HPLC-Säule kommenden Substanze mit Äthylendiamin (AeDA) zu fluoreszierenden Reaktionsprodukten statt. Durch die Verbindung der HPLC-Trennung mit der selektiven AeDA-Reaktion und fluorimetrischen Messung ist eine getrennte und empfindliche Analyse der Substanzen unter Verwendung von Isopropyl-noradrenalin als inneren Standard in etwa 20 Minuten möglich.

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High-speed liquid chromatography of the catecholamines using an ethylenediamine reaction detector

Summary The possibilities of a high-speed liquid chromatographic (HPLC) method using ion exchange and reversed-phase techniques for dihydroxyphenylalanine (dopa) and the catecholamines dopamine, noradrenaline, and adrenaline in combination with a reaction detector are described. The reaction detector comprises a fluorimeter and a reaction unit with liquid dose-pump. In the reaction unit the substances coming from the HPLC column react with ethylenediamine (AeDA) to form fluorescent products. By combining the HPLC separation with the selective AeDA-reaction and fluorimetric measurement a separate and sensitive analysis of components using isopropyl noradrenaline as internal standard is possible in about 20 minutes.

     

Automatische Analyse der fluorimetrisch bestimmbaren Verbindungen aus dem Katecholamin-Stoffwechsel mit einem Reaktionssystem

Zusammenfassung Es werden die optimalen Bedingungen für die automatisch-fluorimetrische Bestimmung folgender Verbindungen aus dem Katecholamin-Stoff-wechsel mitgeteilt: Dopa, Dopamin, Noradrenalin, Adrenalin, 3-Methoxytyramin, Normetanephrin, Metanephrin und Homovanillinsäure. Die Bestimmungen können mit einem einfachen Reaktionssystem durch Veränderung der chemischen und physikalischen Bedingungen im Analysenautomaten durchgeführt werden. Die sehr empfindliche fluorimetrische Analyse im Nanogrammbereich beruht auf der Oxidation der einzelnen Verbindungen und anschließenden Umwandlung der Zwischenprodukte in Fluorophore.

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Automatic analysis of the fluorimetrically determinable compounds from the catecholamine metabolism with one reaction system

Summary Optimal conditions are reported for the following compounds: dopa, dopamine, noradrenaline, adrenaline, 3-methoxytyramine, normetanephrine, metanephrine, homovanillic acid. The determinations are realized in one simple reaction system with the variation of chemical and physical system. The very sensitive fluorimetric analysis in the nanogram range is based on the oxidation of the single compounds and the following change of the intermediate products into fluorophores.

     

Selektivit?tseffekte bei der automatisch-fluorimetrischen Bestimmung von Adrenalin, Noradrenalin und 3,4-Dihydroxyphenylalanin durch Optimierung von Ger?teparametern im Analysensystem

Zusammenfassung Adrenalin, Noradrenalin, 3,4-Dihydroxyphenylalanin (Dopa) und die Summe Adrenalin + Noradrenalin als Gesamtkatecholamine lassen sich automatisch-fluorimetrisch in einem Analysensystem (nach Wisser) nach der Trihydroxyindolmethode bestimmen.Die Fluorescenzausbeuten für die Fluorophore der einzelnen Verbindungen sind außer bei der differenzierten Adrenalinbestimmung von der Pumpengeschwindigkeit des Autoanalyzers abhängig. Durch diese Unterschiede ergeben sich Selektivitätseffekte für die Bestimmung von Dopa neben Noradrenalin und von Adrenalin neben Noradrenalin.Ebenso wurde der Einfluß der Ansaugzeit auf die Fluorescenzausbeute untersucht.Die optimalen Einstellungen für die einzelnen Bestimmungsmethoden werden angegeben.

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Selectivity effects in the automatic-fluorimetric determination of adrenaline, noradrenaline and 3,4-dihydroxy-phenylalanine by optimization of apparatus parameters in the analysis system

Adrenaline, noradrenaline, 3,4-dihydroxyphenylalanine (Dopa) and adrenaline plus noradrenaline as total catecholamines can automaticallyfluorimetrically be determined in one analysis system (according to Wisser) by the trihydroxyindole method. The fluorescence yields for the fluorophores of the single compounds are dependent on the pump speed of the autoanalyzer except for the differentiated determination of adrenaline. Caused by these differences effects of selectivity are demonstrated for the determination of Dopa disturbed by noradrenaline and adrenaline disturbed by noradrenaline. Also the influence of the suction time on the fluorescence yield was investigated. The optimal adjustings for the single methods of determination are given.

     

Fluorimetrische Reaktionsdetektoren zur HPLC-Analyse von Steroiden

Zusammenfassung Acht bekannte Umsetzungsmöglichkeiten von Steroiden zu fluoreszierenden Derivaten wurden auf automatische, luftsegmentierte Reaktionssysteme übertragen. Die Reaktionen mit Isonicotinoylhydrazid sowie mit Periodat/Acetylaceton lassen sich auch in Verbindung mit HPLC-Trennungen in einem Reaktionsdetektor unter Verwendung von Teflonschläuchen einsetzen. Die Nachweisgrenzen für das Corticosteron liegen bei 7 bzw. 100 ng im Reaktionssystem. Die fluorimetrische Bestimmung mehrerer Steroide in Urinextrakten nach Trennung an einer chemisch-gebundenen Nitrophase mit dem Isonicotinoylhydrazid-Reaktionsdetektor wird gezeigt.

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Fluorimetric reaction detectors for the HPLC analysis of steroids

Summary Eight known reaction possibilities for steroids to fluorescent derivatives were transferred to automatic, air-segmented reaction systems. The reactions with isonicotinoylhydrazide and with periodate/acetylacetone under application of teflon tubes are suitable for application in a reaction detector in connection with HPLC separations. The determination limits for corticosterone are 7 resp. 100 ng in the reaction system. The fluorimetric determination of some steroids in urine extracts after separation on a chemical-bonded nitrophase by the isonicotinoylhydrazide reaction detector is demonstrated.

     

Extraktiv-fluorimetrische Bestimmung von Adrenalin als 3,5,6-Trihydroxy-1-methylindol im Nano- und Pikogrammbereich

Zusammenfassung Adrenalin läßt sich extraktiv-fluorimetrisch nach der Oxidation als 3,5,6-Trihydroxy-1-methylindol in Isobutanol bis in den Pikogrammbereich bestimmen. Bei der Verwendung von Essigsäureäthylester treten auch bei einem 10 fachen Überschuß an Noradrenalin keine größeren Störungen auf. In einem zweistufigen Extraktionsverfahren können Adrenalin und Noradrenalin auch getrennt bestimmt werden.

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Extractive-fluorimetric determination of adrenaline as 3,5,6-trihydroxy-1-methylindole in the nano- and picogram range

After oxidation adrenaline is extractive-fluorimetrically determinable as 3,5,6-trihydroxy-1-methylindole down to the picogram range. When using ethyl acetate even with a tenfold excess of noradrenaline no greater disturbance will be found.In a two-step extraction adrenaline and noradrenaline are also separately determinable.

     

Bestimmung von Trialkylbleispecies in Urin

Zusammenfassung Für die Bestimmung von Trialkylbleispecies (Me₃Pb⁺ und Et₃Pb⁺) in Urin wird ein Analysenverfahren vorgestellt, das aus einem Anreicherungsschritt, einer hochdruckflüssigkeits-chromatographischen Trennung und dem Nachweis mit einem chemischen Reaktionsdetektor besteht. Die Anreicherung erfolgt aus der auf pH 10 eingestellten Urinprobe durch Adsorption an Kieselgel. Das Adsorbermaterial wird mit Borat-Puffer und Wasser gewaschen und die Bleispecies mit einem 10% Methanol enthaltenden Acetat-Puffer (pH 3,7) eluiert. Nach Verdünnen und gleichzeitigem Einstellen des Eluats auf pH 8 mit Borat-Puffer wird eine weitere Anreicherung auf einer Nucleosil 10-C₁₈ Vorsäule durchgeführt. Die Vorsäule ist in eine HPLC-Anlage so integriert, daß die Bleispecies durch eine Säulenschaltung im Backflush direkt auf die analytische Säule eluiert, getrennt und mit dem chemischen Reaktionsdetektor nachgewiesen werden können. Die Nachweisgrenzen für das gesamte Analysenverfahren betragen bei einem Probenvolumen von 50 ml Urin 150 pg/ml für Me₃Pb⁺ und 200 pg/ml für Et₃Pb⁺.

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Determination of trialkyllead species in urine

Summary An analytical method has been developed for the determination of trialkyllead species (Me₃Pb⁺ and Et₃Pb⁺) in urine. The procedure consists of an enrichment step, a separation by HPLC, and the detection by a chemical reaction detector. The urine sample is adjusted to pH 10 and the lead species are adsorbed on silica gel, washed with boratebuffer and water, and finally eluted with an acetate-buffer (pH 3.7) containing 10% of methanol. For further enrichment by a pre-column technique the eluate is diluted and simultaneously adjusted to pH 8 by a borate-buffer. This eluate is injected onto a Nucleosil 10-C₁₈ pre-column, which is integrated in a HPLC-system. The lead species are then eluted in a backflush mode onto the analytical column by column-switching. Separation takes place on a RP-C₁₈ stationary phase followed by the detection with an on-line coupled chemical reaction detector. Starting with 50 ml sample volume the limits of detection for the whole analytical procedure are 150 pg/ml for Me₃Pb⁺and 200 pg/ml for Et₃Pb⁺.

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Herrn Prof. Dr. H. Hartkamp zum 60. Geburtstag gewidmet

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Der Deutschen Forschungsgemeinschaft sind wir für die freundliche Unterstützung zu Dank verpflichtet (Ne 176-4).