荧光标记C_(12)～C_(20)等脂肪酸在反相高效液相色谱系统中的超微量分析

 对Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸在反相高效液相色谱（ＨＰＬＣ）系统中的超微量分析进行了研究。月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸等有机酸在所选择的色谱条件下都能得到有效的分离，采用Ｃ１８键合相的色谱柱，流动相采用甲醇∶水＝９７∶３，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，荧光检测波长为λｅｘ＝３２５ｎｍ，λｅｍ＝３９７ｎｍ。在实验中采用４－溴甲基－７－甲氧基香豆素作为Ｃ１２～Ｃ２０等脂肪酸的荧光标记物，以丙酮为溶剂，以１８－冠醚－６为催化剂，以碳酸钾为碱试剂，通过相转移催化完成衍生化反应。对方法的准确度、精密度及最小检出限。     

蛋白质荧光标记中协同效应的高效液相色谱

以牛血清白蛋白和胰岛素为研究对象, 经1,5-I-AEDANS衍生后, 采用高效液相色谱(HPLC)进行分离分析, 发现两者的衍生存在明显的协同作用.     

高效液相色谱-质谱分离鉴定荧光试剂标记的脂肪酸

以2-(2-(10-蒽基)-萘[2,3-d]咪唑)-乙基-对甲苯磺酸酯(ANITS)作为柱前衍生化试剂,在Eclipse XDB-C8色谱柱上,梯度洗脱实现了20种游离脂肪酸(FFA)衍生物的完全基线分离。90℃下在DMF溶剂中以K2CO3作催化剂,选取衍生试剂摩尔数为脂肪酸的7倍,衍生反应40min可获得稳定的荧光产物。激发和发射波长分别为250nm和512nm。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了油菜蜂花粉中游离脂肪酸的质谱鉴定。所有脂肪酸的线性相关系数均大于0.9999,检出限为24.76~98.79fmol。     

柱前衍生-反相高效液相色谱荧光测定及质谱鉴定土壤和苔藓中的脂肪酸

脂肪酸广泛分布于动植物体内,对于调节某些代谢作用和生理功能起着重要作用,其含量测定对进一步深入研究生理学和病理生理学以及对临床诊断具有重要意义[1-2]。某些动植物体内富含人体必需的多种脂肪酸,对其进行定量分析,对饮食营养和保健品开发同样具有重要指导意义。脂肪酸在     

高效液相色谱荧光测定及质谱鉴定土壤和苔藓中的脂肪酸

以吖啶酮-9-乙基对甲苯磺酸酯(AETS)作荧光衍生化试剂,建立了灵敏、简单的游离脂肪酸反相高效液相色谱测定方法。在Ec lipse XDB-C8色谱柱上,实现了19种游离脂肪酸(FFA)衍生物的完全基线分离。选取AETS摩尔数为脂肪酸的6倍,以DMF作溶剂,在85℃条件下以K2CO3作催化剂可获得稳定的荧光产物,条件温和、衍生产率高。利用柱后在线串联质谱以APC I大气压化学电离源正离子模式实现了各组分的质谱定性。对土壤和3种苔藓植物中(树藓、狭叶绢藓、曲尾藓)FFA组分定量结果表明,苔藓植物从土壤中富集了大量的游离脂肪酸。荧光检测的激发和发射波长分别为404 nm和440 nm。绝大多数脂肪酸的线性相关系数大于0.9996,检出限为12.3~43.7 fmol。本方法具有良好的重现性,用于实际样品测定,结果满意。     

美白化妆品中杜鹃醇的超高效液相色谱荧光检测及质谱确证

采用超高效液相色谱结合荧光检测建立了美白化妆品中杜鹃醇的分析方法,并采用液相色谱-串联质谱法进行确证。化妆品试样以5%三氯乙酸-乙腈混合溶液(70∶30)超声提取15 min,离心过膜后,采用通用型的反相C18色谱柱进行分离,以0.1%甲酸水-乙腈(75∶25)为流动相,荧光检测器(λex/λem=280nm/315 nm)检测,外标法定量;质谱确证采用水(含0.01%氨水)和乙腈作为流动相梯度洗脱,电喷雾负离子模式电离,多反应监测模式检测。结果显示,杜鹃醇在0.05~1.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 6,方法的定量下限为2.5 mg/kg。面膜、乳霜、乳液和爽肤水等样品在加标浓度为5.0,10,25 mg/kg时的回收率为86.5%~103.4%,RSD(n=6)为1.1%~3.4%。该方法简便、灵敏,加标回收率和重现性良好,可用于化妆品中杜鹃醇的检测及其含量水平的普查。     

手性荧光衍生化反相高效液相色谱法分析多巴胺

以R(-)_4_(N,N_Dimethylaminosulfonyl)_7_(3_isothiocyanatopyrrolidino)_2,1,3_benzoxadiazole(R(-)_DBD_PyNCS)作为手性荧光衍生化试剂, 用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)定量分析多巴胺。衍生化反应是在含有7%吡啶溶剂中, 75 ℃温度条件下, 进行40 min, 生成具有荧光特性的多巴胺衍生物(λex= 460 nm, λem= 550nm)。生成的衍生物在流动相为乙腈-水(体积比35∶65), 流速为1.0 mL/min, 在DiamonsilTM C18(150 mm×4.6mm, i.d., 5μm)色谱柱上保留时间约为15 min。多巴胺衍生物在60~1 200 ng/mL时与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6), 多巴胺浓度为1 mmol/L时, 峰面积测定结果的相对标准偏差(RSD)为2.4%, 检出限为12 ng/L(S/N=3)。检测了盐酸多巴胺注射液中多巴胺的含量。     

超高效液相色谱荧光检测器测定土壤中多环芳烃

建立了超高效液相色谱系统(UPLC)荧光检测土壤中15种美国环境保护署(USEPA)优控的多环芳烃(PAHs),简化了土壤样品中PAHs的前处理过程。UPLC对15种PAHs分离时间为17 min,流速为0.4 mL/min。荧光检测器对15种PAHs的检出限为0.03~1.53μg/L,6次重复测定的峰面积相对标准偏差为0.12%~0.99%。除了萘和苊外,土样加标的平均回收率为82.9%~103.4%。由于色谱柱的较高分辨率以及荧光检测器的较高选择性,在定性和定量研究土壤样品中的PAHs时,提取物的硅胶柱净化步骤可以省略。     

在脂肪酸-水流动相中小分子在反相高效液相色谱中的保留表征

在反相液相色谱(RPLC)中用Snyder经验议程和计量置换保留模型(SDM-R)中的参数对深质为脂肪醇同系物,流动相为脂肪酸同系物时深质的保留行为进行了研究,结果表明用SDM-R参数具有明显的优越性,另外,由于用Snyder经验公式中二参数之间的作园无法准确求得斜率,且其不具有明确的物理意义,而由SDM-R二参数作图,不但能准确求得斜率j(与1mol溶剂和固相结合能有关的常数),而且j具有明确的物理意义并符合碳数规律,所以,参数j有可能用于RPLC中表征深剂强度,由此得出,在RPLC中,对同一置换剂面言,随同系物溶质的Z(1mol深剂化深质被深剂化固定相吸附时,从二接解面释放出的置换剂分子数)和logI(与1mol深质和固定相亲和势有关的常数)值增大,它们的保留时间也增大,对同一深质而言,随着在同系物置换剂中碳链的增长,Z和logI值的减小,它的保留时间也缩短,同时还可得出,随着同系物置换剂j值的减小,它们的洗脱能力也增强.     

反相高效液相色谱法分离重组促红细胞生成素

利用反相高效液相色谱法对重组促红细胞生成素进行了纯化。结果表明,利用Ｃ４反相柱和乙腈－三氟乙酸流动相在洗脱梯度和上样样品纯度等条件都较适当时,可以简单、快速、高效地从粗品中分离出重组促红细胞生成素,获得的产品纯度高,接近１００％;比活性好,约为１．９６×１０８ＩＵ／ｇ蛋白。     

反相高效液相色谱法测定牙膏中的甘草次酸

采用反相高效液相色谱法测定了牙膏中的甘草次酸。在ＹＷＧ Ｃ１８（４０ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ,１０μｍ）色谱柱上,以Ｖ（甲醇）∶Ｖ（００１ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４）＝８５∶１５（ｐＨ３０）的溶液为流动相,流速为１０ｍＬ／ｍｉｎ,紫外检测波长为２５４ｎｍ,室温下检测。甘草次酸用甲醇提取。甘草次酸的平均回收率为９９６１％～１０１６７％,样品测试相对标准偏差为１８５％～３１６％。方法操作简便、快速和准确。     

反相高效液相色谱法测定尿中吡啶醚和脱氧吡啶醚

尿中吡啶醚（ｐｙｒｉｄｉｎｏｌｉｎｅ,ＰＹＤ）和脱氧吡啶醚（ｄｅｏｘｙｐｙｒｉｄｉｎｏｌｉｎｅ,ＤＰＤ）是骨代谢特异的生化指标。应用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）建立了尿中ＰＹＤ和ＤＰＤ的测定方法。尿液用６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ水解后,以纤维素ＣＦ１小柱提取,然后用ＨＰＬＣ测定;色谱系统为ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１８反相色谱柱,流动相组成为１５％甲醇添加０．１％七氟丁酸,流速为１．２ｍＬ／ｍｉｎ。系统的检测限：ＰＹＤ为１０ｎｍｏｌ／Ｌ,ＤＰＤ为７ｎｍｏｌ／Ｌ;回收率：ＰＹＤ为９１．５％,ＤＰＤ为１０６．１％;日内变异     

OPA柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸含量

建立了邻苯二甲醛（ＯＰＡ）手动柱前衍生反相高效液相色谱法测定样品中氨基酸含量的方法。以邻苯二甲醛（ＯＰＡ）／３－巯基丙酸（３－ＭＰＡ）为衍生试剂进行衍生,ＯＤＳ柱分离,３４０ｎｍ检测,在４０ｍｉｎ内１８种氨基酸全部得到基线分离。测定牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的氨基酸组成和小鼠血清中的游离氨基酸,取得满意的结果。     

高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸的研究

研究了用高效液相色谱法分析茶叶中茶氨酸的方法。以异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）作衍生剂、醋酸钠缓冲液与乙腈梯度洗脱、Ｃ１８柱分离、紫外２４３ｎｍ检测,探讨了茶氨酸的提取方法。比较了不同茶叶中茶氨酸的含量。方法具有快速、精确、灵敏等特点。     

反相高效液相色谱法测定丙酸发酵液中的有机酸

对于生物法制备丙酸的微生物发酵体系,利用Waters Atlantis dC18反相色谱柱,以0.01mol/L KH2PO4缓冲液(pH2.8)-乙腈(95∶5,V/V)作流动相,在流速为1.0mL/min,柱温为25℃时,于紫外波长215nm处检测,9min内发酵液中的草酸、甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸和丙酸能得到良好分离。6种有机酸线性相关系数均在0.9992~1.0000之间;方法的回收率为99%~102%;RSD为0.56~1.66。本方法能够简便、快速测定丙酸发酵体系中主产物丙酸与其它有机酸含量,适于指导整个发酵过程条件的优化及发酵产物的监控。     

反相高效液相色谱法测定果汁中11种有机酸条件的优化

提出了一种利用高效液相色谱同时分析果汁中11种有机酸的优化的方法。在Prontosil12010C18H(10μm,4.6mmi.d.×250mm)色谱柱上,3%CH3OH0.01mol/LK2HPO4(pH2.55)溶液做流动相,流速为0.5mL/min,柱温为30℃,紫外检测波长为210nm时,可以较好地分离和测定果汁中常见的11种有机酸。该方法相对标准偏差0.31%～1.59%,回收率96.8%～102.0%,各种酸的线性相关系数r>0.9996,具有较高的准确度和精确度,方法简便,可应用于果汁中有机酸的检测。     

反相高效液相色谱法测定山楂中的有机酸

采用Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液(pH=2.6)为流动相,流速0.8 mL/m in,检测波长210 nm,建立了山楂中柠檬酸、苹果酸等有机酸的高效液相色谱分析方法。其中柠檬酸和苹果酸的线性范围分别为0.50~50.04μg、0.10~10.00μg;3个浓度水平的回收率分别为95.5%~96.6%、100.2%~103.7%,RSD分别为0.11%~0.38%、0.41%~2.53%;检出限分别为0.04μg、0.03μg(S/N=3)。测定了5种不同产地山楂果肉及山楂核中的柠檬酸、苹果酸的含量。所建立的方法快速、灵敏度高、重复性好,可用于山楂中有机酸的测定。     

Fluorescent Labeling of Fatty Acids with 9-Anthryldiazomethane (ADAM) for High Performance Liquid Chromatography

Abstract

A novel method for rapid and simple fluorescent labeling of carboxylic acids with 9-anthryldiazomethane (ADAM) for HPLC is described. This reagent is stable in solution and highly reactive with carboxylic acids. Esterification proceeds at room temperature without catalyst. The labeled compounds are separated using a reversed-phase system and determined with a flow-through flurometer. Picomole level of fatty acids are determined by this method.     

反相高效液相色谱法直接测定水蛭中14种未衍生氨基酸的含量

建立了一种反相高效液相色谱/蒸发光散射检测器方法,同时测定中药水蛭中14种未衍生氨基酸含量。以异亮氨酸等氨基酸为标准品、PrevailTMC18(250mm×4.6mmi.d.,5μm)为色谱柱、梯度洗脱、漂移管温度115℃、气体流量2.5L/min,在25min内即可将水蛭中14种氨基酸分离测定。氨基酸质量浓度0.072~2.29g/L时,其对数值与峰面积对数值线性关系良好;14种氨基酸的加样回收率为94.8%~104.4%;信噪比为3时,异亮氨酸检出限为20mg/L。该法快速、简便、准确,可作为水蛭中氨基酸直接测定方法,亦可为其它中药中氨基酸分析提供参考。