BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的…

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ，Ｅｍｕ－ＧＵＳ，３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ，Ｅｍｕ，３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度，结果表明Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强，采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔｌ为启动子带有抗潮霉素选择记基的质粒转化小麦“济南１７７”的原生质体，转化６     

大麦黄矮病毒（BYDV）外壳蛋白基因在小麦原生质体中的稳定转化

实验采用ＰＥＧ介导法转化小麦，用ＧＵＳ基因作为标志，用荧光法测定Ａｃｔｌ－ＧＵＳ、Ｅｍｕ－ＧＵＳ、３５Ｓ－ＧＵＳ三种质粒转化小麦细胞后的瞬间表达强度，以比较Ａｃｔｌ、Ｅｍｕ、３５Ｓ三种启动子在小表中的表达强度．结果表明，Ａｃｔｌ和Ｅｍｕ的强度大致相等，均比３５Ｓ强．采用Ｅｍｕ为启动子带ＢＹＤＶＣＰ基因的质粒和经改造过的Ａｃｔ１为启动子带有抗潮霉素选择标记基因的质粒共转化小麦“济南１７７”的原生质体．转化６ｄ后，用潮霉素进行筛选，最后得到两块抗潮霉素的愈伤组织，转化后４个月，经ＰＣＲ检测，证明ＣＰ基因已整合进一块愈伤组织的细胞基因组中．     

两种小麦的原生质体培养再生植株

报道两种基因型小麦昌乐5号和山农587胚性悬浮细胞系的建立和原生质体再生植株。小麦昌乐5号和山农587的胚性愈伤组织继代一年以后形成部分颗粒状和粉粒状结构,可用于悬浮培养。当分散好、生长快的胚性悬浮细胞系形成后,即可作为原生质体培养的材料。较长时间的悬浮培养容易使材料的胚性丧失,昌乐5号的胚性悬浮细胞系20天左右建成,其原生质体再生植株的频率为14/10~5(再生植株数/植板的原生质体数);而山农587的悬浮培养物需5个月以后才能用于原生质体培养,其原生质体再生植株的频率仅为4/10~6。     

欧当归原生质体再生植株

从继代后3～5天的欧当归幼叶胚性细胞悬浮系游离的原生质体,分别以KM8P、MS、改良MS、NT、D2、DPD及B5为基本培养基进行浅层液体培养,以改良MS进行平板培养和固液双层培养。在激素组合和浓度(2.4-D0.2mg/l,KT0.5mg/l,NAA1.0mg/l)及渗透稳定剂(0.5M甘露醇)相同的条件下,在KM8P中的植板率(40％)显著高于其它培养基中的植板率(0—15％)。在KM8P中(0.35M葡萄糖作渗透稳定剂),不同激素组合及浓度植板率不相同,上述激素组合中最高(50％)。葡萄糖作渗透稳定剂时0.3M优于0.4M,同时优于相同浓度的甘露醇和蔗糖。改良MS浅层培养和双层培养植板率几乎相同(15％),而平板培养银低(1％)。在KM8P中(激素同上,0.35M葡萄糖,CH250mg/l,CM 10ml/l),25天后原生质体形成肉眼可见的小愈伤组织。及时转移到固体愈伤组织增殖培养基上,诱导出胚性和非胚性两种愈伤组织,分别转移到分化培养基上后,两者分別通过体细胞胚胎发生和器官发生途径获得了完整再生植株。     

基因枪法获得可育抗除草剂转基因小麦

用基因枪法对两个春小麦品种进行了遗传转化，获得１９株独立转化的，抗除草剂Ｂａｓｔａ的小麦植株，其中１５株自交可育，ＰＣＲ和ＤＮＡ印迹检测证实了该基因在转化植株中的表达，转基因及其表达已遗传到子三代，在已检测的７个转基因后代中，有４个植株其抗除草剂性状以单位点，显性性状的孟德尔方式遗传。     

四季樱草叶肉原生质体植株再生

以四季樱草为材料，用国产纤维素酶一步法分离叶肉原生质体。用液体浅层静置培养的方法培养原生质体。培养基为Ｂ５基本培养基附加ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ、２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ和甘露醇０．６５ｍｏｌ／Ｌ。细胞分裂旺盛，培养２天后观察到第一次细胞分裂，１０天后形成小细胞团，１５天左右添加一次新鲜的不含甘露醇的培养液，使渗透压减半。将形成直径为１－２毫米的小愈僵组织转到分化培养基上，再生成完整植株，而后将苗移栽到花盆     

普通小麦与玉米的体细胞杂交再生完整植株

从小麦济南177制备得到两种原生质体，一种来源于具有一定分化能力的愈伤组织但其分裂能力较低；一种来源于生长迅速的悬浮细胞但不能分化，将二种原生质体混合，共同作为受体与经过紫外线（UV）照射的玉米（Zea mays L)原生质体在PEG诱导下融合，培养后获得再生克隆并进一步分化为植株，而它们单独与玉米原生质体融合均不能再生植株，通过染色体、同工酶及5SrDNA分析及生长习性分析证明再生植株均为体细胞杂种。     

用基因枪法转化水稻获得转基因植株

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织．将分别含有苏云金杆菌δ－内毒素基因［ＣｒｙⅠＡ（ｂ）］、潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织．经过筛选和再生培养，得到９２个系的潮霉素抗性再生植株．点杂交结果表明９７．８％的抗性植株含有ｈｐｔ基因，７３．９％的植株同时含有ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因和ｈｐｔ基因．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析进一步证实外源ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因已经整合到水稻基因组中．     

外源基因导入部分脱壁的大麦细胞及其转基因植株的再生

采用ＰＥＧ法、电击法以及ＰＥＧ＋电击法将带有ｇｕｓ和ｎｐｔⅡ基因的ｐＢＩ１２１质粒导入部分脱壁的大麦细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＧＵＳ和ＮＰＴⅡ蛋白活性检测，证实了外源报告基因已在大麦基因组中整合并在转化细胞中获得表达。     

东乡野生稻原生质体再生小植株

由东乡野生稻的细胞悬浮培养物游离原生质体，采用改良的ＲＹ－２培养基以琼脂糖珠包埋培养，能产生细胞分裂。预分化实验表明：ＡＢＡ能有效地提高原生体愈伤组织的再生能力。最后成功地诱导出原生质体再生植株。     

外源基因在转基因马铃薯植株中的异常表达

根癌农杆菌感染马铃薯叶盘伤口细胞并进行共培养转化，感染叶盘筛选培养基上可获得卡那霉象抗性的转化愈伤组织，并在转化细胞中检测到ＮＰＴⅡ酶活性，在两种分化培养基上转化愈伤组织的分化率分别为１７％和２０％，ＤＮＡ分子杂交证实以双向载体质粒ＰＰＺＨ１上的ｎｐｔⅡ基因和ｚｅｉｎ－ＨＥＡＡＥ融俣基因均已导入并整合到马铃薯再生植株基因组中，导入的外源基因引起了转基因气生块茎中氨基酸组分的变化，大多数氨基酸含量有     

小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ诱导融合，由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融俣产物却能高频率的分化出完整植株。     

从水稻悬浮细胞获得原生质体再生植株

以长香稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）（糯稻）的幼嫩种子限为材料，在ＭＳ和Ｎ６基本培养基上诱导产生结构松散的愈伤组织，在ＡＡ培养基中进行液体振荡培养，悬浮细胞经酶解后获得了少在性较好的原生质体，试验证明，水稻悬浮细胞是分离原生质体较理想的材料，在附加２．４－Ｄｌｍｇ／Ｌ（以下单位同），ＫＴ０．２，谷氨酰胺８６７，天门冬胺酸２６６的ＭＳ琼脂糖培养基中，诱导出了大量愈伤组织；在含ＫＴ２，ＮＡＡ０．     

多重PCR法快速鉴定转基因小麦植株及后代

根据转基因植物中常用的报告基因uidA、选择基因bar的序列,设计合成两对不同的引物,建立了在转基因小麦材料分子确证中,应用一次PCR反应同时扩增检测两种或多种外源基因的多重PCR方法．通过对质粒pAHC25以及30个转基因小麦样品进行PCR扩增分析,比较多重PCR的检测结果与单基因的PCR扩增结果,发现两者结果完全一致．