一种应用快速分离蛋白纯化仪检测肝素钠中多硫酸软骨素的方法

<正>申请公布号:CN104198635A申请公布日:2014.12.10申请人:南京健友生化制药股份有限公司摘要:本发明公开了一种应用快速分离蛋白纯化仪检测肝素钠中多硫酸软骨素的方法。本发明采用具有紫外检测器和电导检测器的快速分离蛋白纯化仪和强阴离子交换色谱柱     

硫酸软骨素A的解离常数及其金属配合物稳定常数的测定

硫酸软骨素A(ChSA)是葡萄糖醛酸和半乳糖胺通过β-1,3糖苷键所形成的二糖为基本单位的大分子酸性粘多糖。它广泛存在于人及脊椎动物血管及其它脏器结缔组织之中,有关它的生理功能及其在医药等领域中的用途,文献亦有报导。我们曾以镇江肉联厂生产的硫酸软骨素粗品为原料,精制得到纯度较高的硫酸软骨素A制品,并经阳离子交换树脂转化为氢型,测定了它与Cu²⁺、Ca²⁺离子的结合度。     

中性红光度法测定硫酸软骨素含量

硫酸软骨素是一种天然酸性粘多糖,属生物高分子化合物。硫酸软骨素有A、C和D三种异构体,均是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D氨基半乳糖组成,只是硫酸基位置不同。硫酸软骨素具有许多重要的生理活性和药理作用,如促进冠状动脉循环、降血脂、抗凝血、抗肿瘤和防止血管硬化等,广泛用于临床、化妆品和医用材料等领域。硫酸软骨素的测定方法有Elson-Morgan反应法,即将硫酸软骨素水解或酶解成氨基己糖,然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应,生成色原,再与对二甲氨基苯甲醛的盐酸醇溶液反应产生红色,以盐酸氨基葡萄糖为对照品,用比色法测定。还有高效液相色谱法,天青A和亚甲基蓝吸收光谱法。中性红属于醌亚胺类染料,带正电荷,曾作为生物标记用于做蛋白质和DNA的光谱探针。本文将中性红作为糖类物质的光谱探针,研究了中性红与硫酸软骨素的相互作用,根据其复合物溶液在特定波长处吸光度降低与硫酸软骨素的含量成比例的特点,建立了一种快速、简便、灵敏的测定硫酸软骨素含量的光度法。     

核磁共振内标法定量分析肝素钠中多硫酸软骨素

1引言肝素钠是一种由葡萄糖胺,L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂钠盐,是临床大量应用的抗凝血药。研究证明,肝素钠还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。2008年初,欧美各国发生了肝素钠注射液事件,致使81人死亡。随后,美国FDA应用核磁共振方法在肝素钠原料药中定性查出杂质多硫酸软     

高温~1H NMR鉴别8种海参硫酸软骨素

提取了8种海参中的粗多糖,经DEAE-52阴离子交换柱分离纯化得到其中的海参硫酸软骨素(SC-CHS),除日本刺参CHS外其余均为首次获得的海参多糖。对获得的SC-CHS进行分子量、单糖组成及硫酸基含量等基本性质分析后,利用高温1HNMR对SC-CHS结构进行初步鉴别。结果表明,高温条件下SC-CHS的1HNMR图谱具有较好的分辨度。对其支链硫酸化岩藻糖的异头氢进行归属和比较,并以此为指标鉴别不同种类海参硫酸软骨素的结构差异,建立了一种以海参硫酸软骨素结构特征为指标的海参指纹图谱;初步探讨了不同海域生长的海参中硫酸软骨素支链岩藻糖硫酸基的特点,比较发现:寒带海域海参的硫酸软骨素岩藻糖上硫酸基取代以2,4-di OSO3、3,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单取代;温带海域海参以2,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单硫酸基取代;热带亚热带海域海参以2,4-di OSO3双取代和4-OSO单取代为主。这将为海参构效关系的进一步分析鉴定提供理论依据。     

电感耦合等离子体质谱法测定肝素钠中硼含量

肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐,是一种天然抗凝血剂。它广泛用于手术前后防治血栓的形成和作为保存新鲜血液的抗凝剂。原料粗品肝素钠经氧化除杂质后,通常还需通过还原反应来提高产品效价。在这些反应中,常采用硼氢化钾或硼氢化钠作为还原剂,反应后在产     

甲基紫硫酸软骨素共振瑞利散射光谱及其应用

在Britton-Robinson缓冲介质(pH9.37)中硫酸软骨素与甲基紫反应形成离子缔合物时,共振瑞利散射(RRS)强度会明显增强,其最大RRS峰位于505和661 nm处。本文对反应的最佳条件、影响因素、硫酸软骨素浓度与RRS强度的关系进行了研究,建立起一种快速、简便、灵敏的测定硫酸软骨素的方法。本法在661和505 nm测定波长处的线性范围均为:0.15~0.90 mg/L,其检出限分别为0.019 mg/L(505 nm)和0.043mg/L(661 nm)。该法应用于针剂中硫酸软骨素的测定,结果满意。     

十六烷基三甲基溴化铵光度滴定法测定硫酸外国佬骨素钠盐

建立一种测定硫酸软骨素的新方法。十六烷基三甲基溴化铵在KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中、乳化剂OP共存下与硫酸软骨素反应形成离子对缔合物，溶液转变成稳定的乳化液。用光度滴定法测定硫酸软骨素。用标准加入法做加收试验，回收率为99.9%-100.2%，相对标准偏差0.32%-0.40%。方法应用于外贸样品测定，结果满意，方法准确、简便、快速。     

十六烷基三甲基溴化铵光度滴定法测定硫酸软骨素钠盐

建立一种测定硫酸软骨素的新方法。十六烷基三甲基溴化铵在KH2 PO4 Na2 HPO4 缓冲溶液中、乳化剂OP共存下与硫酸软骨素反应形成离子对缔合物 ,溶液转变成稳定的乳化液。用光度滴定法测定硫酸软骨素。用标准加入法做回收试验 ,回收率为 99.9%～ 10 0 .2 % ,相对标准偏差0 .32 %～ 0 .4 0 %。方法应用于外贸样品测定 ,结果满意 ,方法准确、简便、快速     

鱼翅中硫酸软骨素的酶解-高效液相色谱法测定

建立了一种测定鱼翅中硫酸软骨素的酶解－高效液相色谱方法；该法利用在一定条件下硫酸软骨素能被硫酸软骨素酶ABC定量酶解成软骨素二糖，通过高效液相色谱法测定软骨素二糖的量来计算硫酸软骨素的含量。     

酸水解-柱前衍生化-HPLC-MS/MS法分析三种即食海产品中的酸性多糖

从扇贝丁、鱿鱼丝和鳕鱼片中提取得到粗多糖,使用1.3 mol/L的三氟乙酸(TFA)进行降解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化后,高效液相色谱-三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)分析降解产物中的二糖片段。扇贝丁和鱿鱼丝中的酸性多糖几乎全部为硫酸软骨素;而鳕鱼片不仅含有硫酸软骨素,还含有少量透明质酸,相对含量分别为87.5%和12.5%。     

聚合物复合物层层组装膜的高效负载及大分子和小分子药物的差别性释放

基于聚合物复合物和层层组装技术实现了大分子药物硫酸软骨素和小分子药物头孢曲松钠在聚合物膜中的高效负载以及差别性释放. 壳聚糖(CHI)和大分子药物硫酸软骨素(CSS)通过静电相互作用力复合, 制备了壳聚糖-硫酸软骨素复合物(CHI-CSS). 以CHI-CSS复合物和透明质酸(HA)为构筑基元, 通过层层组装构筑负载有硫酸软骨素的聚合物复合物膜. 利用后扩散的负载方法将小分子药物头孢曲松钠(CTX)负载到聚合物膜中, 从而实现大分子和小分子2种药物在聚合物膜中的负载. 聚合物膜中负载的CTX和CSS在生理条件下具有快慢不同的差别性释放动力学特性, CTX在6 h内快速释放, 而CSS长效缓释长达14 d. 快速释放的抗生素CTX能够有效抑制细菌感染, 而酶降解作用下缓慢释放的CSS可促进伤口愈合, 在包括头颈外科在内的外科术后感染防治领域有良好应用前景.     

问题肝素中多硫酸软骨素杂质的柱前衍生高效液相色谱分析

基于肝素和多硫酸软骨素(OSCS)在单糖组成上的差别,建立了可用于肝素中OSCS检测的柱前衍生高效液相色谱法.采用3 mol/L三氟乙酸,将受污染的问题肝素在110℃下充氮封管水解4 h,在碱性条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮进行衍生化反应,再采用C18反相色谱柱,以0.1 mol/L磷酸盐(pH=6.7)缓冲液/乙腈(体积比82∶18)为流动相,在流速1.0 mL/min、柱温25℃及紫外检测波长245 nm的条件下进行液相色谱分析.结果表明,肝素和OSCS的单糖色谱峰具有良好的分离度,测得2批问题肝素中OSCS杂质的质量分数分别为19.6%和28.3%.该方法具有良好的精密度和重现性,易于推广,适合于肝素中OSCS杂质的检测,并可用于硫酸软骨素A和C与硫酸软骨素B的区分和鉴别.     

荧光法测定硫酸软骨素含量的新方法

在pH=5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中,结晶紫在232.0 nm光的激发下,于467.0 nm处有一个荧光峰,其与硫酸软骨素(Chs)反应生成的缔合物在467.0 nm处荧光强度增强,且荧光强度差值与Chs浓度在0.002～1.7μg/mL范围内呈线性关系,相关系数(R)达到0.9997,回收率在99.73%～100.51%.该方法快速、灵敏和准确,可用于硫酸软骨素定量检测.     

顶空气相色谱法测定硫酸软骨素中有机溶剂残留

建立了顶空气相色谱法测定硫酸软骨素中有机溶剂残留量的方法。采用旋涡混合器以水为溶剂制备供试品溶液,以大口径HP-快速GC残留溶剂柱为分离柱,FID为检测器,用外标法进行定量。甲醇在1.34~283.50μg/mL、乙醇在48.27~1206.75μg/mL内线性关系良好,相关系数分别为0.9999、0.9998,测定结果的相对标准偏差(n=6)分别为3.39%、1.36%,加标平均回收率分别为95.64%、97.28%,检出限分别为0.08、0.05μg/mL。     

硫酸软骨素类可注射水凝胶体系及其凝胶化机制

硫酸软骨素是一种硫酸化糖胺聚糖类天然多糖,广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面,具有促进软骨生长、调控生长因子、加快伤口愈合等多种生物功能.近年来,基于硫酸软骨素良好的生物活性、生物相容性和生物降解性,硫酸软骨素类可注射水凝胶作为一种新型生物材料受到了广泛关注,尤其是在组织工程、药物输送和细胞治疗等生物医用领域的应...     

添加剂对活性人工皮肤胶原海绵支架材料的影响

研究了壳聚糖、硫酸软骨素和肝素对胶原海绵理化性质和生物相容性的影响。结果表明：添加壳聚糖后胶原海绵的孔隙率和暖水率下降,添加硫酸软骨素后上升,而添加肝素后无明显变化。三种添加剂均可减少基质收缩,增强材料的抗降解性能,但种问差异不明显。与纯胶原海绵相比,复合海绵可进一步促进细胞的吸附和增殖,其中添加壳聚糖和肝素的效果相当,优于硫酸软骨素,有望应用于构建组织工程化人工皮肤。     

毛细管电泳手性选择剂去硫酸基硫酸软骨素C的研究开发及新药西尼地平对映体的拆分

研究开发了一种新型的毛细管电泳多糖手性选择剂去硫酸基硫酸软骨素C,并用于二氢吡啶类药物对映体的分离。建立了新药西尼地平对映体的拆分方法,同时考察了背景电解质pH值、手性添加剂浓度、工作电压等因素对手性分离的影响。优化的背景电解质pH值 为2.50、手性添加剂的质量浓度为30 g/L,工作电压为10 kV。以去硫酸基硫酸软骨素C为毛细管电泳手性选择剂拆分新药西尼地平对映体,操作简单方便,西尼地平两对映体得到了基线分离,分离度达2.01。     

基于核磁共振氢谱及偏最小二乘判别分析法的红木快速识别模型的建立与应用

以核磁共振技术为基础,采用核磁共振氢谱(1H NMR)对奥氏黄檀、巴里黄檀、交趾黄檀、刺猬紫檀、大果紫檀和檀香紫檀6类国标红木及胶漆树、染料紫檀2类混淆品的甲醇超声提取液进行检测分析,并结合聚类分析法、主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)等模式识别方法对其进行快速鉴别。结果显示,利用PLS-DA法建立的模型前3个主成分累积贡献率达79%,能将国标红木与混淆品进行有效区分,且能大致区分不同种类的国标红木。该方法快速、高效,在红木快速鉴别分析中具有较大的潜力。     

反相离子对高效液相色谱法测定硫酸软骨素

以四甲基氯化铵作为离子对试剂，采用乙腈-2.28mmol/L四甲基氯化铵水溶液（5:95)作为流动相，选用C18色谱柱分离硫酸软骨素和杂质，建立了测定硫酸软骨素含量的反相离子对高效液相色谱方法。该方法的线性范围为0.4-8.0μg，回收率为98.8%-100.3%，相对标准偏差为0.17%-0.53%。该方法的精密度和准确度较高。