胰岛素化学发光免疫测定法的建立

目的建立化学发光免疫法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 CLIA采用竞争法.结果该方法的灵敏度为1.24 mIU/L,在2.5～160 mIU/L的范围内线性良好.CLIA测定胰岛素的批内与日间变异系数分别为3.05%,4.61%和4.80%,4.92%.在血红蛋白浓度<2.4 g/L、总胆红素浓度<342 μmol/L、甘油三酯<9.9 mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性(r=0.915 6).结论 CLIA法测定胰岛素能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.     

安普那韦与人血清白蛋白之间的相互作用

在体外模拟人体生理环境,采用光谱法并结合分子对接技术,研究了安普那韦与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用.荧光光谱表明:安普那韦可以增强HSA的荧光强度.通过对结合常数和热力学常数的计算可知,安普那韦和HSA之间的作用力主要是疏水和静电作用力;紫外-可见光谱显示:安普那韦能够增加HSA的吸收峰强度,表明两者之间发生了相互作用.三维荧光光谱也显示:加入安普那韦后,HSA的斯托克斯位移从62 nm增加到了86 nm,说明安普那韦可以使HSA的微环境极性增加,疏水性减弱;从圆二色光谱的研究结果可知:随着安普那韦的加入,HSA的α-螺旋结构含量从18.38%增加到了63.62%,说明安普那韦的存在改变了HSA的二级结构.分子对接研究结果表明:安普那韦与HSA的作用位点位于HSA的ⅡA结构域,而同步荧光光谱的分析进一步证明了这一点.研究结果为进一步研究安普那韦在体内与血清白蛋白的相互作用提供了一定的理论参考.     

化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原的研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原,用于临床前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者病情的监测和预后.方法化学发光酶免疫分析法(CLELA)采用辣根过氧化酶(HRP)-鲁米诺竞争法.结果该方法的灵敏度为0.01μg/L,在0.5～80μg/L的范围内线性良好.CLEIA测定血清前列腺特异性抗原的批内、批间与日间变异系数分别为5.0%,4.97%和4.93%.在血红蛋白浓度<2.4g/L、总胆红素浓度<342μmol/L、甘油三酯浓度<9.9mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性(r=0.9472).结论CLEIA法测定血清前列腺特异性抗原能及时有效地满足前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.     

流动注射-抑制化学发光法测定人血清白蛋白

在碱性条件下,鲁米诺-过氧化氢-叶绿素铜钠体系的化学发光强度较大,而人血清白蛋白对此体系的化学发光有较强的抑制作用,据此采用流动注射技术,建立了一种简单、快速、可连续测定人血清白蛋白的新方法．在最佳条件下,测定人血清白蛋白的线性范围为：2．5～20mg／L,检出限为0．33mg／L．本方法用于血液样品中人血清白蛋白的测定,回收率在97．2％～102．7％之间,结果满意．     

邻菲罗啉铜与人血清白蛋白相互作用的研究

在模拟生理条件下,用荧光光谱法,圆二色谱法以及位点竞争实验研究了邻菲罗啉铜(Cu(phen)23+)与人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用.结果表明,Cu(phen)23+对HSA的猝灭机制属于静态猝灭过程.由Lineweaver-Burk方程计算了不同温度下的结合常数.由vant Hoff方程和结合常数求出了体系的焓变值和熵变值,焓变值(-10.50kJ/mol)和熵变值(59.28J.mol-1.K-1)表明,静电作用力是维持Cu(phen)23+-HSA复合物稳定的主要作用力.位点竞争实验揭示了Cu(phen)23+在HSA上的结合位点主要在site I.圆二色谱实验结果表明Cu(phen)23+与HSA结合后,HSA中α-螺旋含量减少,说明HSA的构象和微环境发生了改变.     

Zn(Ⅱ)与人血清白蛋白或牛血清白蛋白的结合平衡研究

用平衡透析法研究了生理条件 （ｐＨ 值７．４３） 下Ｚｎ （Ⅱ） 与人血清白蛋白 （ＨＳＡ） 或牛血清白蛋白（ＢＳＡ） 的相互作用。结果表明, ＨＳＡ对Ｚｎ （Ⅱ） 有１．１ 个强结合部位和９．０ 个弱结合部位, 结合常数分别为１．０４×１０５ 及１．６７×１０３ ; ＢＳＡ 对Ｚｎ （Ⅱ） 有１．２个强结合部位和约９．７ 个弱结合部位, 结合常数分别为８．２×１０４ 及１．９×１０３ 。Ｚｎ（Ⅱ）－ＨＳＡ和Ｚｎ（Ⅱ）－ＢＳＡ的Ｈｉｌｌ系数分别为０．８７、０．８４,表明Ｚｎ（Ⅱ）与ＨＳＡ或ＢＳＡ的结合均只产生较小的负协同效应。     

化学发光酶联免疫分析测定血清中乙型肝炎表面抗原

提出了曙红（Eosin)-H2O-HRP-Luminol化学发光体系测定HRP（辣根过氧化物酶）及HRP标记物的方法。将该方法与免疫分析技术相结合成功地用于测定病人血清中乙型肝炎表面抗原的含量，测定结果与经典的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性好。     

紫杉醇与人血清白蛋白的相互作用

以人血清白蛋白(HSA)为实验材料,通过荧光光谱、等温滴定量热及紫外-可见吸收光谱等技术研究化疗药物紫杉醇与其的结合机理.荧光光谱检测结果表明:紫杉醇主要通过氢键和范德华力与HSA结合,并引起其内源荧光的猝灭.在温度为303K下,二者间的结合常数为10.7×103 L/mol.紫外-可见吸收光谱检测发现,随着紫杉醇浓度的增加,HSA在278nm处的吸收峰增大,证明二者结合后HSA的构象发生了改变.等温滴定量热实验则进一步说明二者的结合是一个自发进行的放热反应,在温度为303K下结合常数为8.8×103 L/mol,焓变、熵变及吉布斯自由能分别为-99.1kJ/mol,-183.6J/(mol·K)和-43.5kJ/mol.本研究为紫杉醇在血液中的运输及传递提供理论支持.     

人血清白蛋白融合技术研究进展

人血清白蛋白是血液中含量最丰富的蛋白,它半衰期长,且具有运输药物的功能,这使其成为理想的药物栽体.作为延长药物半衰期的新技术,白蛋白融合技术是近年来发展迅速、应用广泛的蛋白质工程技术.通过共价偶联、非共价偶联、纳米包裹和融合蛋白的方式可实现白蛋白与药物分子的偶联,使药物分子的药代动力学得到明显改善.系统介绍了白蛋白融合技术的主要方式、进展以及发展方向.随着白蛋白和相关受体蛋白作用机制的研究不断深入,基于结构的白蛋白融合技术将进一步提高白蛋白融合技术在长效药物开发中的应用.     

偶合放大反应化学发光酶联免疫分析测定人血清乙型肝炎E抗体

提出了一种偶合放大反应化学发光酶联免疫分析测定人血清乙型肝炎Ｅ抗体的新方法．本法对ＨＢｅＡｂ－ＨＲＰ测定的灵敏度比ＨＢｅＡｂ－ＨＲＰ催化Ｌｕｍｉｕｏｌ－Ｈ２Ｏ２直接化学发光体系高２．５×１０２倍．对ＨＢｅＡｂ的测定采用竞争性抑制法，对ＨＢｅＡｂ阳性对照血清的测定范围为１：１～１：３２７６８，用所建立的方法对实际病人血清样品进行了测定，并与现行的ＥＬＩＳＡ显色光度法进行对照，两种方法相关性很好．     

C-肽化学发光免疫测定法的建立

目的建立化学发光免疫法,测定C-肽及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 LEIA抗原竞争法.结果 CLIA测定C-肽的批内与批间变异系数分别为4.2%和5.0%.结论 CLIA法测定C-肽能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要.     

毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白的研究

本试验将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后，流加亚硒酸钠，同时设空白对照发酵液(不加入亚硒酸钠)，通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量，判断硒能否以硒代氨基酸的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后，进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明，加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%，硒与蛋白质的质量比为0.0069，高于对照发酵液近35倍，初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化，转化为硒代氨基酸，并形成硒代重组蛋白质。     

SiO2纳米材料对人血清白蛋白毛细管电泳行为影响研究

对建立高效毛细管电泳方法检测蛋白质进行研究,探讨了在碱性缓冲溶液中添加SiO2纳米材料对人血清白蛋白(HAS)检测的影响.实验发现:采用未处理过的75 μm(内径)×60 cm (50 cm有效长度)毛细管柱、15 kV分离电压、25 mmol·L-1硼酸硼砂组成的缓冲溶液直接检测HAS,由于HAS在毛细管内表面产生强烈吸附而无法检测到相应的电泳峰;上述缓冲溶液中加入一定量的纳米材料后,在电泳图中8 min左右出现尖锐的HAS峰,该峰峰形良好,完全可以达到检测与定量的要求.该方法对HAS的检测限为0.50 mg·L-1, HAS峰迁移时间的相对标准偏差为2.62%.实验结果表明SiO2纳米材料是检测蛋白质的有效添加剂.     

毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白高密度培养条件的研究

研究了毕赤酵母基因工程菌高密度培养条件。在全合成培养基的基础上考察了诱导过程中添加(NH₄)₂SO₄、微量元素PTM₁、油酸、甲醇加量及pH等因素对重组人血清白蛋白表达的影响，发现PTM₁能显著提高白蛋白的表达，6mL/L时蛋白表达量最大。诱导期硫酸铵浓度维持在 3g/L左右蛋白表达量最大，高于3g/L抑制蛋白表达。酸性环境不利于蛋白表达，诱导过程维持pH6.0～6.5最佳。甲醇最佳诱导浓度为10mL/L。添加0.05%的油酸可有效提高蛋白表达。可以此作为发酵罐上发酵培养流加成分的参考。     

化学发光法快速高通量检测双嘧达莫

根据过氧化草酸酯与双氧水作用产生的高能中间体能激发荧光物质发光的原理,建立了利用过氧化草酸酯(TCPO)-H2O2-咪唑化学发光体系测定双嘧达莫的新方法.研究了溶剂、酸度、增敏剂及化学发光试剂浓度对化学发光信号的影响.在最佳试验条件下,双嘧达莫浓度在3.3×10-9～1.7×10-6 g/mL范围内其相对化学发光强度与浓度呈良好的线性关系,检出限为1.1×10-9 g/mL.该方法操作简便快速、灵敏度高、试剂用量少,可用于实际样品血清及尿液的检测.     

慢性氨氮暴露对中华鳖生长及非特异性免疫功能的影响

水体氨氮含量过高是中华鳖养殖过程中经常遇到的问题,本实验探讨了慢性氨氮暴露环境对中华鳖幼鳖生长及非特异性免疫功能的影响.挑选64只初始体质量为(90.5±20.5)g的健康中华鳖幼鳖分别暴露于非离子氨氮(UIA-N)质量浓度为1.5(C1),2.6(C2)和4.1(C3)mg.L-1的水环境中,每组16只,暴露时间为42 d.对照组(C0)用不加外源氨氮的自然晾晒自来水饲养.实验期间温度((29±0.5)℃)和pH值(7.75±0.1)在各组间保持一致.结果表明,本实验所设氨氮的质量浓度梯度对特殊生长率、补体旁路途径介导的血清溶血活性和血清杀菌活性都没有显著影响(P>0.05),但血清溶菌活性和血细胞吞噬率这2个指标在C1组和C2组显著升高(P<0.05),同时其他各处理组与对照组间未见显著差异(P>0.05).由此推论:低于4.1 mg.L-1UIA-N的水环境对中华鳖的生长和非特异性免疫功能没有明显的抑制作用,对某些指标甚至有刺激升高的作用,表明中华鳖具有较强的耐受水体中高质量浓度氨氮的能力.     

荧光猝灭法研究Fe(III)和Zn(II)与血清白蛋白的竞争结合

利用荧光猝灭法,在生理pH值7.43,20℃时,研究了Fe(Ⅲ)-血清白蛋白-Zn(Ⅱ)双金属体系中Fe(Ⅲ)、Zn(Ⅱ)与血清白蛋白相互作用,得出Fe(Ⅲ)与血清白蛋白结合比Zn(Ⅱ)与血清白蛋白结合强,并且在HSA体系中,Zn(Ⅱ)能够促进Fe(Ⅲ)与血清白蛋白的结合。     

荧光猝灭法研究Fe(Ⅲ)和Zn(Ⅱ)与血清白蛋白的竞争结合

利用荧光猝灭法,在生理pH值7.43,20℃时,研究了Fe(Ⅲ)-血清白蛋白-Zn(Ⅱ)双金属体系中Fe(Ⅲ)、Zn(Ⅱ)与血清白蛋白相互作用,得出Fe(Ⅲ)与血清白蛋白结合比Zn(Ⅱ)与血清白蛋白结合强,并且在HSA体系中,Zn(Ⅱ)能够促进Fe(Ⅲ)与血清白蛋白的结合.